30株鸡大肠杆菌ESBLs基因型检测及耐药性分析

采用2倍稀释法检测30株鸡大肠杆菌对常见药物耐药性,用表型筛选和确证试验检测产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)情况,并分别用TEM、SHV和CTX-M等3种通用引物进行PCR扩增以确定其基因型.结果显示23株大肠杆菌为产ESBLs株,占76.7%.PCR扩增表明TEM、CTX-M、SHV阳性率分别为73.9%、43.5%和0%,有7株同时检测出TEM和CTX-M基因(占30.4%),3株未检测出TEM、CTX-M和SHV 3种基因(占13.0%).药敏试验结果显示产ESBLs大肠杆菌对药物的多重耐药性明显比非产酶大肠杆菌严重,产酶菌对氨苄西林和头孢噻呋的耐药率最高,为95.7%,对氨基糖苷类、恩诺沙星和复方新诺明的耐药率均高于78%,氨苄西林和三代头孢与酶抑制剂联用或2种不同种类的药物联用均能明显增强抗菌活性.以上结果表明河南省76.7%的临床分离鸡大肠杆菌为产ESBLs株,其基因型主要是TEM和CTX-M,尚无SHV型,β-内酰胺类与酶抑制剂联用或不同种类药物联用是防治鸡产酶大肠杆菌感染的有效措施之一.     

鸡大肠杆菌TEM和CTX-M型超广谱β-内酰胺酶基因分型研究

 【目的】检测鸡大肠杆菌超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的基因型和基因亚型,了解河南省产酶鸡大肠杆菌ESBLs基因型分布。【方法】 对河南省7个地区不同鸡场临床分离28株产ESBLs鸡大肠杆菌分别用TEM、SHV和CTX-M等3种通用引物进行PCR扩增及测序分析,确定其基因型和基因亚型。【结果】 21株鸡大肠杆菌检出TEM型基因,2株检出CTX-M型基因,5株检出TEM型和CTX-M型两种基因,未检出SHV型。TEM基因亚型以TEM-1变异型为主,与AY293072(TEM-1)相比同源性为98%—99%,核苷酸序列除发生18T→C沉默突变外,尚有3株分别有另一处碱基发生变化：783G→A(C3菌,序列号为FJ405207)、21T→A(X2菌,序列号为FJ405208)和269G→A(F4菌,序列号为FJ405211),其中前两处为沉默突变,F4菌的碱基突变引起92甘氨酸变为天冬氨酸,为TEM-57型。CTX-M基因亚型包括两种：CTX-M-65亚型4株(C2、C3、C4和K1,序列号分别为FJ405191,FJ405192,FJ405212和FJ405214)和CTX-M-14亚型3株(F2、X3和B5,其中F2菌的相关序列已上传至GenBank,获序列号为FJ405213)。【结论】 目前河南省产ESBL鸡大肠杆菌基因亚型以TEM-1变异型为主,CTX-M-65和CTX-M-14型次之。     

外排泵抑制剂小肽1号对抗菌药抗菌活性的影响

为了观察外排泵抑制剂小肽1号对抗菌药抗菌活性的影响,本试验采用标准微量稀释法,测定了6类8种抗菌药单用和与小肽1号联用对12株临床分离鸡大肠杆菌的MIC值。结果表明,12株鸡大肠杆菌中有9株为产超广谱酶的多重耐药菌株,小肽1号（1∶2）使恩诺沙星等8种药物的抗菌活性多数增强2倍,使氟苯尼考对A8、A15的抗菌活性增强了4倍,小肽1号（1∶2或1∶4）使恩诺沙星、甲替沙星、环丙沙星的抗菌活性增强2倍,使左旋氧氟沙星对A13的抗菌活性增强4倍。以上结果表明,细菌外排泵抑制剂-小肽1号对大多数药物的抗菌活性有一定的增强作用,产酶多重耐药的鸡大肠杆菌至少同时存在产ESBLs、外排泵两种耐药机制。     

味精废液发酵秸秆饲料对肉兔生产性能的影响

利用除盐味精废液和玉米秸秆经微生物发酵,研制高蛋白秸秆生物饲料。对用该方法生产的秸秆饲料粗蛋白、粗纤维和氨基酸含量进行检测,其粗蛋白含量高达34.42%,粗纤维含量17.46%;利用其饲喂奶牛与饲喂常规饲料相比,奶牛产奶量和乳质量差异均不显著,但饲料成本降低7.3%。这项试验研究高蛋白秸秆生物饲料对肉兔生产性能的影响,试验结果表明,用这种发酵饲料代替部分精料,肉兔平均日增质量及料重比等差异均不显著。     

托曲珠利纳米乳的研制及其初步质量评价

制备托曲珠利纳米乳,并考察其质量。选用油酸乙酯、肉豆蔻酸异丙酯、油酸等为油相,吐温-80、聚氧乙烯辛基苯基醚、聚氧乙烯蓖麻油-40等为乳化剂,乙醇、PEG400、乙二醇、丙二醇等为助乳化剂,通过伪三元相图筛选出制备托曲珠利纳米乳的最优处方,优化处方为油相O1∶乳化剂S5/助乳化剂C4∶水=1.2∶2.8∶6(质量百分数比)。当Km=3时,伪三元相图所形成的微乳区域面积最大;所制备的纳米乳带有淡蓝色乳光,染色特性证明为为O/W型纳米乳,平均粒径为42.99 nm,分布均匀。试验所制备的O/W型2.3%托曲珠利纳米乳澄清透明,12000 r/m in离心10 m in及分别置于4℃冰箱、室温和60℃4个月溶液不分层、不浑浊,仍澄清透明,性质稳定,托曲珠利纳米乳制备工艺简单,稳定性良好。     

氟苯尼考联合用药对产ESBLs鸡大肠杆菌抗菌活性的影响

为测定氟苯尼考联合用药对临床分离产ESBLs鸡大肠杆菌的抗菌活性的影响,采用纸片扩散法检测ESBLs菌,并用微量液体2倍稀释法测定单独使用氟苯尼考、黏菌素、头孢噻呋、阿米卡星、多西环素、痢菌净、磷霉素,以及氟苯尼考与上述6种药物不同比例联合使用时对鸡大肠杆菌的最小抑菌浓度(MIC).结果发现,临床分离的7株大肠杆菌均产ESBLs,对氟苯尼考、头孢噻呋、痢菌净耐药率高达100%,对阿米卡星、多西环素、磷霉素的耐药率分别为71%、57%、57%.氟苯尼考与黏菌素、阿米卡星、多西环素、痢菌净联合使用时,抗菌活性有所提高,氟苯尼考与多西环素以1:2比例复配时,MIC值下降幅度最大.