不同佐剂和免疫途径对柔嫩艾美耳球虫SO7抗原免疫保护效果的影响

利用PGEX-6P-1融合表达系统将SO7基因在大肠杆菌中进行融合表达,对表达产物进行初步纯化和复性,制备免疫原。分别使用不同剂量的人参总皂甙和重组γ-干扰素以及弗氏完全佐剂作为免疫佐剂,于5日龄、12日龄和19日龄对雏鸡进行3次免疫,同时设立蛋白口服免疫组、蛋白皮下注射免疫组、卵囊口服免疫组、未免疫未攻毒组和未免疫攻毒组作对照,于26日龄用105个柔嫩艾美耳球虫卵囊进行攻毒,8d后扑杀,对各组的存活率、相对增重率、病变减少率、相对卵囊产量和抗球虫指数ACI等指标进行统计分析,比较免疫保护效果。与非免疫攻毒组以及不加佐剂的免疫攻毒组相比,佐剂使用后各组的增重、病变记分、相对卵囊产量、ACI等指标均有一定的改善,对柔嫩艾美耳球虫的人工感染可以提供部分保护。3种佐剂中,γ-干扰素和人参总皂甙能增强重组蛋白的免疫保护效果,且佐剂的剂量对免疫保护的效果有一定的影响,以5000Uγ-干扰素效果最佳,效果与E.tenella活卵囊免疫相当,弗氏完全佐剂的免疫增强效果不明显。单独使用重组蛋白皮下注射或口服免疫,虽有一定的保护作用,但不明显。一定剂量的γ-干扰素对SO7抗原的免疫保护效果起明显的增强作用,是一个具有很好临床应用前景的新型佐剂。     

美系獭兔的胴体性状和肉品质特性研究

通过对20只美系獭兔屠宰性能和肉品质的测定，研究獭兔的生产性能和肉质特性及它们之间的关系，结果表明：美系獭兔5月龄的平均体重为2.533 kg,商用皮重0.410 kg,屠宰率为60.70%，右后腿重0.182 kg，体长和腰周长分别为30.69和18.04 cm；美系獭兔背最长肌和后腿肉的pH1(宰后1 h的pH)分别为6.42和6.43，pH24(宰后24 h的pH)分别为6.22和6.35,肉色L*值分别为54.66和52.67，a*值分别为12.37和9.89，b*值分别为9.06和4.08；兔肉的滴水损失、熟肉率、蒸煮损失、剪切力值、水分含量和肌内脂肪含量分别为2.06%、62.12%、30.44%、2.453 kg.f、73.60%和1.67%。商用皮重与热胴体重、体长存在极显著的正相关（P<0.01），与商用胴体重存在显著的正相关（P<0.05）。兔的体重（热胴体、商用胴〖JP2〗体、右后腿）、体型（体长和腰周长）与滴水损失、蒸煮损失呈负相关，与熟肉率、剪切力值呈正相关，但相关性都不显著（P>0.05）。     

表达猪繁殖与呼吸综合征病毒CH-1a株核衣壳蛋白重组鸡痘病毒的构建

从含有猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）核衣壳蛋白（N）的质粒扩增出N基因，构建禽痘病毒转移载体。该载体含有禽痘病毒早晚期启动子LP2EP2控制之下的PRRSVN基因、P11启动下的报告基因lacZ以及用于同源重组的禽痘病毒基因组的片段。在转移载体转染亲本病毒S—FPV-017感染的鸡胚成纤维细胞（CEF）之后，采用蓝色表型筛选的方法，筛选到表达N基因的重组病毒，并对其进行了6轮蚀斑纯化。PCR方法鉴定证明重组病毒的基因组中含有完整PRRSVN基因，间接免疫荧光试验证明了PRRSVN蛋白在重组病毒感染的CEF细胞中获得表达，本研究为猪繁殖与呼吸综合征非复制型疫苗的研制打下了基础。     

表达鸡马立克氏病病毒gB基因重组鸡痘病毒的遗传稳定性及生物安全性评价

为了评价表达鸡马立克氏病病毒gB基因重组鸡痘病毒(rFPV-gB/R)的遗传稳定性,我们将纯化后的重组病毒在CEF单层上连续传30代,引起细胞病变的速度和形态均未发生明显变化;覆盖含X-Gal的琼脂引起的空斑均为蓝色;间接免疫荧光实验证明rFPV-gB/R中的gB基因始终能稳定表达;序列测定结果表明,重组病毒在细胞上连续传30代、在SPF鸡上连续传5代后,gB基因序列没有发生任何变化;以0、10、20、30代重组病毒制成冻干疫苗进行的实验室免疫效力实验表明,细胞连续传代后rFPV-gB/R仍然保持了原有的免疫原性。可见重组鸡痘病毒gB基因的结构和免疫原性都是高度稳定的。为了评价rFPV-gB/R的生物安全性,我们将rFPV-gB/R通过SPF鸡连续传5代,检测病毒在鸡体的存在部位及其消长、生长繁殖性能和毒力变化;将rFPV-gB/R免疫鸡与未免疫鸡同笼饲养,攻击FPV-102E6强毒,以检测rFPV-gB/R感染鸡的接触传染性。结果显示,rFPV-gB/R在鸡体的存在时间大约为7d,在体内仅存在于接种部位;鸡体传代后痘病毒毒力有一定程度下降,gB基因核苷酸序列未发生任何变化;同居未免疫SPF鸡在痘病毒强毒攻击后全部发痘,可见重组病毒免疫鸡没有接触传染性,能在鸡体内稳定地传代,rFPV-gB/R具有高度的生物安全性。     

增强猪传染性胸膜肺炎灭活苗对小鼠保护力的研究

为了提高猪传染性胸膜肺炎灭活苗的保护力,本研究利用基因重组技术表达了猪传染性胸膜肺炎放线杆菌6种主要致病因子蛋白:rApxⅠ、rApxⅡ、rApxⅢ、rApxⅣ、rApfa和rOMP。设立试验Ⅰ组(灭活苗),试验Ⅱ组(灭活苗、rApxⅠ、rApxⅡ、rApxⅢ和rOMP),试验Ⅲ组(灭活苗、rApxⅠ、rApxⅡ、rApxⅢ和rApxⅣ),试验Ⅳ组(灭活苗、rApxⅠ、rApxⅡ、rApxⅢ和rApfa)和空白对照组(PBS),每组26只BALB/c小鼠,分3次免疫,每次间隔2周,每周检测血清抗体水平,在免疫后第2周、第4周和第5周,MTT法检测脾脏T细胞增殖水平及ELISA法测定IFN-γ分泌水平。在第3次免疫后的第7 d,将每组剩余20只小鼠平均分成2组,分别以APP1型菌(5×10~9 CFU)和APP7型菌(1×10~(11) CFU)进行攻毒保护试验。结果表明,向灭活苗中添加重组亚单位成份可以提高机体的细胞免疫和体液免疫水平,并能提高灭活苗的交叉保护率;试验Ⅱ组的ApxⅠ和OMP抗体水平以及细胞免疫水平均显著高于其它各组(p<0.05),对于APP1和APP7型菌的攻毒也提供了明显优于其它各组的保护结果,试验Ⅲ、Ⅳ组的细胞、体液免疫水平及保护率较试验Ⅰ组也有所提高。结果显示出ApxⅠ、OMP抗体水平和细胞免疫水平与攻毒保护率之间存在着正相关性,向灭活苗中加入重组蛋白成份可以提高疫苗的交叉保护,试验Ⅱ组通过激活体液免疫和细胞免疫,对两个血清型APP的攻击提供了很好的保护作用,从而为猪传染性胸膜肺炎新型疫苗的研制提供参考。     

H5N1亚型禽流感灭活疫苗免疫鸵鸟后抗体消长规律及免疫程序的研究

为了探讨鸵鸟对H5亚型禽流感灭活疫苗的免疫原性,做好鸵鸟禽流感的防控工作,采用哈尔滨兽医研究所研制的重组H5N1亚型禽流感疫苗,不同剂量免疫鸵鸟,用HI方法检测母源抗体和免疫抗体,根据母源抗体的衰减和免疫抗体的消长规律确定首免和再免日龄.结果表明,雏鸵鸟母源抗体能维持约3周～8周;8周龄时分组首免,C1组产生的免疫反应优于C2组,抗体峰值能达到7.50 log2,维持时间为9周左右;17周龄时C1组以3.0 mL/羽进行二免,2周后抗体达到7.40log2,3周～7周抗体维持在高峰值,最高达8.80log2,以后逐渐下降,有效抗体水平能维持至接种后25周左右.二免后25周进行三免,以5 mL/羽三免后2周抗体可达到9.80log2,2周～4周抗体维持在最高峰,以后缓慢下降,期间抗体时有起伏,但有效抗体水平约可维持1年时间.三免后45周内抗体水平合格率均在70%以上.根据抗体消长规律,初步推荐了鸵鸟的免疫程序.     

苏云金杆菌HBF-1菌株在土壤中毒蛋白含量的ELISA检测

以苏云金芽孢杆菌HBF-1菌株中分离纯化的高特异性杀虫蛋白作为抗原，免疫新西兰白兔制备出多克隆抗体，其效价可达到16000。应用制备的特异性抗体建立了间接酶联免疫吸附测定法（ELISA），检测不同土壤样品中Bt毒蛋白含量。初步结果表明，该方法能够检测土壤中Bt毒蛋白的含量，因土壤理化特性及组成成分的不同，检测到的毒蛋白含量也略有不同，河沙中的蛋白检测量最低，只有12．53％；另一种沙壤混合物中检测量达到76.16％。     

松辽黑猪生长发育性能研究

[目的]为松辽黑猪新品系和吉松配套系选育优质肉猪新品种提供理论依据。[方法]选取松辽黑猪,松野杂猪和杜长大三元杂交育肥猪各15头,分成3个组分别为S、Y和B组,组内设3个重复,每个重复5头猪,在同一条件下进行饲养试验,并对其生长发育性能进行测定。[结果]S组松辽黑猪的胸围发育程度明显高于Y组松野杂猪和B组杜长大三元杂交猪,差异极显著（P〈0.01）,其他指标均差异不显著;Y组松野杂猪的增重速度、发育程度、屠宰率和产瘦肉率与B组杜长大三元杂交猪相比,差异均不显著。[结论]在增重速度和产肉率方面,松辽黑猪新品系和松野杂猪新品种的选育是成功的。     

家蚕核型多角体病毒p35基因的核苷酸序列分析

对家蚕核型多角体病毒苏州株 (BmNPVsu)p35基因的序列分析表明 :BmNPVsup35编码序列为 897nt,编码 2 98aa。同源性分析表明 :BmNPVsup35与BmNPVT3、AcNPV、SlNPV在核苷酸水平上同源性分别为 99.5%、95.1 %、89.3% ,在氨基酸水平上的同源性分别为 98.7%、89.4 %、76.4 % ,显示了杆状病毒p35基因在进化上的保守性。BmNPVT3中位的N14 6、S2 0 2 、E2 0 4 、K2 4 4 ,在BmNPVsu中分别被G、N、Q、N取代 ,BmNPVT3中S2 2 2 ,在BmNPVsuP35中发生了缺失。推测BmNPVsuP35蛋白的功能及抑制细胞凋亡的能力与BmNPVT3P35蛋白的相似     

Comparative Pigmentation Efficiency of High Dietary Levels of Apo-Ester and Marigold Extract on Quality Traits of Whole Liquid Egg of Two Strains of Laying Hens

This trial was carried out to compare the effect of the dietary supplementation of high doses of either synthetic pigment ethyl ester of β-apo-8′-carotenoic acid (apo-ester) or natural pigments, mainly lutein and zeaxanthin, extracted from Tagetes erecta, on egg quality of hens laying brown shell eggs (ISA Brown) and white shell eggs (Hy-Line White W-36). The hens of each strain were divided into 6 groups and fed a corn-soybean basal diet supplemented either with 40, 60, and 80 ppm of apo-ester (APO) or with 120, 180, and 240 ppm of marigold extract (MAR). Egg pigmentation rose linearly and significantly (P < 0.01) as the dietary levels of apo-ester increased, but this did not occur when MAR supplementation was used. The amount of β-carotene equivalents in whole liquid egg of MAR treatments was almost constant with varying pigment dietary dose and was significantly lower (P < 0.01) than in APO treatments. In both hen strains, whole liquid egg redness (a*) and yellowness (b*) were higher with APO supplementation. The egg component weights were highly affected (P < 0.01) by the hen strain, with yolk:egg ratio higher in the Hy-Line. The trial confirms that in spite of the higher level of MAR supplementation, APO has a better efficiency in whole liquid egg pigmentation. The ISA Brown hens showed a better ability to absorb dietary carotenoids than did the Hy-Line White.