杂交构树叶多酚提取工艺优化及其抗氧化活性研究

为建立和优化杂交构树叶多酚的提取工艺,本试验采用超声波辅助提取的方法,以构树叶多酚得率为考察指标,通过单因素试验研究液料比、乙醇浓度、超声时间、超声温度4个因素对构树叶多酚得率的影响;在单因素试验的基础上,借助响应面法设计4因素3水平的试验方案,对构树叶多酚提取的工艺参数进行优化,建立回归模型并进行响应面分析,最终确定最佳的提取工艺参数,并进行3次平行验证;以维生素C为对照,通过测定构树叶多酚对DPPH和ABTS自由基的清除率,评价构树叶多酚的体外抗氧化活性。结果显示：4个因素对构树叶多酚得率的影响顺序依次为：乙醇浓度（B） > 液料比（A） > 超声温度（D） > 超声时间（C）,响应面分析结果显示：两两因素之间存在交互作用,但交互作用不显著（P>0.05）;在液料比为70：1、乙醇浓度为60%、超声时间为50 min、超声温度50 ℃的条件下,构树叶多酚的得率最大,为13.62 mg/g,与响应面法的预测值接近;体外抗氧化试验结果表明,构树叶多酚可以清除DPPH和ABTS自由基,并且在高浓度情况下可以达到与维生素C相当的水平。综上,试验建立的构树叶多酚提取工艺准确、可行,同时证明构树叶多酚具有良好的抗氧化活性;该结果可为构树叶多酚的生物活性研究以及构树叶的药用价值开发提供参考。     

不同月龄广西富凤麻公鸡的繁殖性能比较

[目的]明确不同月龄广西富凤麻公鸡间的繁殖性能差异和相关性,为其种质资源保护提供更好的配种条件,同时为种鸡生产提供参考依据.[方法]以广西富凤麻公鸡为研究对象,从精液品质、睾丸发育状况及血清激素等角度系统研究不同月龄公鸡间的繁殖性能差异和相关性,并使用不同月龄公鸡的精液对母鸡进行人工授精,孵化第9 d照蛋并统计受精率.[结果]5、8和18月龄广西富凤麻公鸡的精液体积和精子密度无显著差异(P>0.05,下同),18月龄广西富凤麻公鸡的精子活力较5和8月龄公鸡的精子活力极显著降低(P<0.01,下同),在精子畸形率方面则表现为18月龄广西富凤麻公鸡较5和8月龄公鸡极显著升高.广西富凤麻公鸡在5~8月龄期间,随着月龄的增长公鸡睾丸的体积和重量均呈上升趋势,睾丸曲细精管直径呈增粗趋势,血清睾酮含量呈上升趋势;但在8~18月龄期间,整体上表现为随着月龄的增长公鸡睾丸的体积和重量呈下降趋势,睾丸曲细精管直径逐渐变细,且血清睾酮含量急剧下降.广西富凤麻公鸡各繁殖性能指标间的相关性分析发现,血清睾酮含量与两侧睾丸总重量、精液体积与精子活力呈中等强度正相关,精子畸形率与血清睾酮含量、精子活力与精子畸形率呈强负相关.不同月龄广西富凤麻公鸡精液的受精率无显著差异.[结论]广西富凤麻公鸡在5~8月龄期间其繁殖性能随着月龄的增长而提高,但在8~18月龄期间整体上表现为繁殖性能随月龄的增长而下降.即8月龄广西富凤麻公鸡睾丸发育状况最佳,生产上可适当提高8月龄公鸡的利用率.     

陆川猪ANKRD1基因克隆及其表达差异分析

[目的]克隆陆川猪心肌锚蛋白重复域1基因(ANKRD1),并进行生物信息学及组织表达谱分析,为研究ANKRD1在陆川猪机体内的功能作用提供参考依据.[方法]根据NCBI已公布的野猪ANKRD1基因序列(NM_213922.1)设计特异性引物,采用TRIzol法提取陆川猪心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、背最长肌和皮下脂肪的总RNA,反转录合成cDNA,并以此为模板进行ANKRD1基因克隆,通过MegAlign、Protaram、Protscale、MHMM Server和Sig-nalP等在线分析软件进行生物信息学分析,最后以实时荧光定量PCR检测ANKRD1基因在陆川猪各组织中的表达情况.[结果]陆川猪ANKRD1基因蛋白编码区(CDS)序列全长960 bp,编码319个氨基酸残基,与NCBI已公布野猪ANKRD1基因(NM_213922.1)的CDS序列存在4处碱基突变,但均为同义突变,二者的ANKRD1氨基酸序列同源性为99.6%.陆川猪ANKRD1基因编码蛋白分子量为36125.70 Da,理论等电点(pI)为7.09,属于稳定蛋白,其二级结构中α-螺旋占46.39%、无规则卷曲占39.81%、β-转角占9.09%、延伸链占4.70%;陆川猪ANKRD1蛋白不存在跨膜结构,也无信号肽,有多个磷酸化位点.陆川猪ANKRD1基因在其心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、背最长肌和皮下脂肪等7个组织中均有表达,其中以心脏中的相对表达量最高,显著高于在其他组织中的相对表达量(P<0.05,下同),在脾脏中的相对表达量最低,显著低于在心脏、肝脏、肺脏和背最长肌中的相对表达量.[结论]ANKRD1基因在陆川猪的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、背最长肌和皮下脂肪等组织中均有表达,且存在明显差异,故推测ANKRD1基因在不同组织中发挥不同作用.     

猪源IKKγ在原核和真核表达系统中的表达及其多克隆抗体制备

[目的]制备猪源IKKγ多克隆抗体,为进一步研究IKKγ蛋白生物学特性及揭示IKKγ蛋白与猪瘟病毒(CSFV)间相互作用机制打下基础.[方法]利用RT-PCR从猪肾细胞(PK-15)中克隆原核表达的IKKγ基因功能片段(561 bp),与原核表达载体pET-32a(+)构建原核重组质粒pET-IKKγ,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞后进行IPTG诱导表达,表达的融合蛋白经纯化和浓缩后,免疫小鼠制备猪源IKKγ多克隆抗体.同时克隆IKKγ基因全长序列(1356 bp),与真核表达载体pCMV-HA构建真核重组质粒pCMV-HA-IKKγ,分别转染293T细胞和PK-15细胞,检测融合蛋白表达情况.[结果]以原核重组质粒pET-IKKγ转化BL21感受态细胞,经IPTG诱导能表达出约40 kD的融合蛋白,且融合蛋白主要以可溶性蛋白形式进行表达,可通过Ni-NTA亲和层析柱进行纯化,已获得较高纯度的融合蛋白IKKγ.构建的真核重组质粒pCMV-HA-IKKγ能在293T细胞中成功表达出IKKγ蛋白;制备获得的猪源IKKγ多克隆抗体能与293T细胞表达融合蛋白IKKγ发生特异性反应,其抗体效价为1:16000,与PK-15细胞表达IKKγ蛋白也具有良好的反应性,其中CSFV感染后36 h是IKKγ蛋白表达高峰期.此外,制备获得的猪源IKKγ多克隆抗体能在PK-15细胞中成功检测到IKKγ蛋白,说明猪源IKKγ多克隆抗体与真核细胞瞬时表达的IKKγ蛋白特异性良好.[结论]制备获得的猪源IKKγ多克隆抗体具有效价高、特异性强等特点,可用于检测CSFV感染PK-15细胞中IKKγ蛋白表达水平,为下一步研究IKKγ蛋白生物学特性及揭示NF-κB信号通路转录调节功能机制提供技术支持.     

对猪小腔卵泡孤雌激活胚胎发育力的初步探索

为探讨直径为2 mm以下和2～6 mm猪卵泡卵母细胞的体外培养分裂率与囊胚率差异,采用相同体外成熟培养条件,来培养从不同直径的2种卵泡中所抽出的卵母细胞,在卵母细胞成熟培养后44～48 h,对卵母细胞进行化学激活和体外培养,观察胚胎体外发育能力;在培养48 h时进行分裂数据统计,培养168 h时统计囊胚个数。结果发现,2 mm以下猪卵泡卵母细胞孤雌激活后胚胎的体外培养平均分裂率与2～6 mm猪卵泡卵母细胞孤雌激活后胚胎的体外培养平均分裂率差异显著,分别为62.46%、81.76%(P0.05);2 mm以下猪卵泡卵母细胞孤雌激活后胚胎的体外培养平均囊胚率与2～6 mm猪卵泡卵母细胞孤雌激活后胚胎的体外培养平均囊胚率差异不显著,分别为11.71%、15.30%。说明正常卵泡、小腔卵泡的卵母细胞在体外成熟后,孤雌激活胚分裂率依次降低,孤雌胚胎的分裂能力随卵泡直径的增大而增强;正常卵泡、小腔卵泡的卵母细胞体外成熟后,孤雌激活胚囊胚率随卵泡直径的增大有一定增高,但变化不显著。     

卵形鲳鲹 JAK3 蛋白的原核表达与纯化

【目的】纯化获取卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)JAK3(TroJAK3)重组蛋白,为了解TroJAK3蛋白功能、相互作用及抗体制备奠定基础。【方法】应用分子生物学技术构建重组质粒pET-32a-TroJAK3,转化大肠杆菌BL21感受态细胞,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blot检测TroJAK3重组蛋白表达情况。【结果】PCR扩增片段长度为3 333 bp,经双酶切鉴定、测序确认序列和开放阅读框正确,结果显示成功构建重组质粒pET-32a-TroJAK3。经终浓度为1 mmol/L IPTG 37℃诱导4 h后进行SDS-PAGE检测,结果表明TroJAK3重组蛋白以包涵体形式大量表达,分子量约为140 ku。经Ni-IDA树脂柱纯化,获得纯化的重组蛋白。Western blot检测结果显示有140 ku的条带,表明TroJAK3重组蛋白能被抗His抗体识别。【结论】成功构建了重组质粒pET-32a-TroJAK3,纯化得到高纯度的TroJAK3融合蛋白。     

养殖鱼类抗脂肪肝因子研究进展

脂肪肝是一种可以由多种诱因引起的疾病,同时也是多种肝脏疾病发展中的一种病理过程,是最常见的弥漫性肝病之一,其以肝细胞内甘油三酯蓄积过多为主要病理变化。具有脂肪肝病变的商品鱼。其肌肉脂肪含量也会明显升高,导致其品质下降。脂肪肝病已成为养殖业的难题之一。有鉴于此。本文综合了国内外有关鱼类营养性脂肪肝研究的成果。以期为鱼类脂肪肝病的深入研究提供参考。     

规模化猪场猪繁殖与呼吸综合征的综合防控策略

<正>猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS),又称猪蓝耳病,是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndromevirus,PRRSV)引起的以母猪流产、死胎、弱仔、木乃伊胎以及仔猪呼吸困难、败血症、高死亡率为主要特征的一种高度接触性传染病。     

管角螺对几种环境因子的耐受性试验

试验结果表明,管角螺幼螺生存温度为6～32 ℃,适宜温度20～30 ℃.管角螺对低盐具有较强的耐受力,适应盐度为13.0～39.0;生存pH为6.2～10.4,并具有较强的耐干露能力.气温28～30 ℃,壳高10.0 mm的幼螺干露12 h无死亡,干露24 h和36 h的死亡率分别为75%和100%.幼螺营底栖生活,底质条件对管角螺的个体成活率无明显影响.饵料以双壳贝类为主,对贝肉、鱼虾肉糜具明显的趋食性.     

受精液中添加β-ME、BSA和咖啡因对猪卵母细胞体外受精后早期发育的影响

进行受精液中添加不同浓度的β-ME、BSA和咖啡因对猪卵母细胞体外受精及其早期发育的影响试验。结果表明,在受精液中添加β-ME(2、10、50μmol/L)对猪卵母细胞体外受精后的早期发育无显著促进作用,当添加浓度过高(250μmol/L)时对早期胚胎发育反而不利;在受精液中添加咖啡因(1、2、4mmol/L)对猪卵母细胞体外受精后的早期发育无显著的促进作用;在受精液中添加BSA(0.1%、0.2%、0.4%、0.8%)对猪卵母细胞体外受精后的早期发育有一定的促进作用,并以添加0.4%BSA的效果最好。