VP2蛋白Cys-402、Cys-214对猪细小病毒VLPs影响的初步研究

试验以猪细小病毒VP2 Cys-402(A)、Cys-214(B) 定点突变体为基础,将突变体真核表达载体转染COS-7细胞及核酸免疫猪细小病毒抗体阴性的小白鼠,通过电镜技术和流式细胞仪技术探讨突变Cys-402、Cys-214对猪细小病毒病毒样颗粒的影响,旨在寻找利于外源基因插入的病毒样颗粒内部位点.电镜和小白鼠核酸免疫试验结果表明:Cys-214对病毒样颗粒的组装和免疫原性的发挥是必需的,其突变后不能促使VP2形成病毒样颗粒,更不能在免疫后的小白鼠血清中监测出相应抗体的存在;而Cys-402的突变并不干扰病毒样颗粒的形成和免疫原性的发挥.由此可以推测Cys-402及其附近可能存在利于外源基因插入的位点.     

皮下注射鸭瘟弱毒苗诱导鸭局部黏膜和系统免疫中IgA、IgM和IgG的发生规律

为探讨鸭瘟弱毒苗诱导鸭局部黏膜和系统免疫中抗体发生的规律,将鸭瘟病毒Cha株弱毒苗皮下注射免疫20日龄樱桃谷鸭后60 d内定时随机剖杀5只鸭,采集血清、胆汁、气管和消化道(食道、十二指肠、空肠、回肠、盲肠和直肠)分泌液,应用间接ELISA检测抗DPV的IgA、IgM和IgG滴度(以Log10表示).结果表明:①血清:抗体滴度由高到低为IgG、IgM和IgA,相应的检测到的时间段分别为免疫后6～60,3～15,12～36 d.②胆汁:抗体滴度由高到低为IgA、IgG和IgM,相应的检测到的时间段分别为免疫后9～21,15～27,3～12 d.③分泌液:气管和消化道分泌液中抗体滴度由高到低均为IgA、IgM和IgG,其中IgA抗体滴度由高到低为十二指肠、食道、气管、空肠、盲肠、回肠和直肠,相应的检测到IgA的时间段分别为免疫后3～60,9～60,3～60,9～60,12～60,12～27,6～36d;IgM由高到低为气管、食道、十二指肠、空肠、盲肠、直肠和回肠,相应的检测到IgM的时间段分别为免疫后3～12,6～15,3～12,6～12,9～12,6～9,6～9 d;IgG由高到低为食道、十二指肠、气管、空肠、盲肠、直肠和回肠,相应的检测到IgG的时间段分别为免疫后9～36,12～27,6～36,9～36,12～36,9～21,15～21 d.综上,鸭瘟弱毒疫苗皮下免疫鸭后,IgM和IgG分别是系统免疫中体液免疫的先锋抗体和主要抗体;IgA是气管、消化道和胆汁中的主要抗体.     

猪传染性胃肠炎病毒检测基因芯片的构建

采用PCR扩增制备TGEV的靶基因并进行纯化,对基因芯片的最佳靶基因点样质量浓度、探针质量浓度、杂交温度、杂交时间进行筛选,选择构建检测芯片的最适靶基因,进行基因芯片探针最佳标记方法试验.结果表明,质粒PCR扩增和采用异丙醇沉淀纯化的靶基因质量好,基因芯片最佳靶基因点样质量浓度为200mg/L,最佳探针质量浓度为3 000 μg/L,预杂交时间为1 h,杂交时间为3～6 h,杂交温度为48℃,以S、S3、sM、M、N、ORF7、POL等7个靶基因为构建TGEV检测芯片的最适靶基因,确定了多重PCR扩增标记TGEV探钟的最佳体系,Cy3-dCTP标记浓度为2.5 μmol/L,构建的TGEV检测芯片与标记的混合探针杂交效果好.     

血浆蛋白粉不同时间饲喂对肉鸡免疫功能的影响

选用1日龄AA肉鸡240只,随机分为4个处理,每个处理6个重复,每个重复10只鸡.处理一为基础日粮组,处理二、三、四分别添加2.5%血浆蛋白粉(SDPP)替代基础日粮中部分蛋白饲喂7、14、21 d后,换喂相同日粮直到49 d试验结束.前期饲喂21 d后,从每个处理中选择接近平均体质量健康鸡8只腹腔注射大肠杆菌O_2攻毒.结果表明:(1)前期1～14 d连续添加SDPP生产成绩最好,显著高于处理一(P<0.05).后期和全期以1～21 d添加的生产性能略好,与1～14 d差异不显著.(2)添加SDPP提高了肉鸡Ea、Et、脾脏指数、胸腺指数和法氏囊指数,极显著(P<0.01)提高淋巴细胞转化率.(3)SDPP明显降低内鸡死亡率.结果表明,在1～14 d添加SDPP,可促进内鸡生长,增强免疫功能,前期获得最佳ADG的时间是饲喂1～14 d.该饲喂时间肉鸡抗菌能力最强.     

猪伪狂犬病病毒gD基因的生物信息学分析

自测12条PRV不同毒株的gD全序列连同GeneBank中登录的9条gD基因全序列共21条基因序列,使用生物软件对它们的基因序列的同源性、突变区域的定位、遗传进化关系、酶切位点的差异、密码子偏爱性,氨基酸序列的同源性、蛋白质亲水性、抗原表位分析、三级结构预测等生物信息学的内容进行预测和分析.结果表明:PRV-gD基因的开放阅读框的核苷酸长度在1 197～1 215 nt之间,氨基酸长度在399～405个之间,核酸同源性在97.3%～100%之间,氨基酸的同源性在89.8%～98.8%之间,在核酸820～837位有个高变重复区,不同毒株基因均对GC极为偏爱.在遗传进化关系上将我国PRV流行分为四川、华北、东南3个区域.毒株间基因内酶切位点、蛋白质亲水性、抗原表位和蛋白质高级结构预测等内容的分析结果十分相似,说明PRV-gD基因具有很高的保守性.     

乳酶LDH作为奶牛隐性乳房炎早期诊断指标的研究

为了筛选敏感的奶牛隐性乳房炎早期诊断指标,选择220头荷斯坦泌乳奶牛,分别采集乳汁进行体细胞计数和乳酸脱氢酶(LDH)活性测定.结果显示,隐性乳房炎奶牛乳汁中LDH活性显著高于健康奶牛(P＜0.05),乳汁体细胞数(SCC)与LDH活性呈正相关(r2=0.93).选择LDH活性>100 IU/L作为隐性乳房炎的判定阈值,诊断的敏感性为70%,特异性为82.3%,Jouden指数为0.52.结果提示,LDH可作为奶牛隐性乳房炎早期诊断指标.     

胰岛素、胰高血糖素对体外单层培养的肝细胞胰岛素样生长因子-Ⅰ mRNA丰度的影响

以持家基因β肌动蛋白(β-actin)作为内参照,通过竞争PCR法检测不同浓度的胰岛素和胰高血糖素对犊牛肝细胞中胰岛素样生长因子-Ⅰ mRNA丰度的影响.结果表明,胰岛素和胰高血糖素都能直接调控胰岛素样生长因子-Ⅰ mRNA的表达,胰岛素促进胰岛素样生长因子-Ⅰ mRNA的表达,而胰高血糖素抑制胰岛素样生长因子-ⅠmRNA的表达,存在量变关系.     

猪圆环病毒核酸疫苗pcDNA-PCV-ORF2-ISS的构建及分子佐剂联合免疫研究

用PCR方法扩增猪圆环病毒PCVwhn株编码CAP蛋白的基因ORF2,同时人工合成一段CpG序列,并设计上下游引物,进行扩增,定向插入到真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建新型核酸疫苗(pcDNA-PCV-ORF2-ISS),并进行了酶切和测序鉴定.用构建的pcDNA-PCV-ORF2-ISS质粒以及pcDNA-PCV-ORF2与5种细胞因子分子佐剂质粒(IL-6/4、IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ真核表达质粒)联合对仔猪进行免疫试验.免疫后用间接ELISA法测定猪圆环病毒Ⅱ型特异性抗体IgG,用流式细胞仪测定猪血液CD3+、CD4+和CD8+T细胞亚类的数量.结果显示,成功构建含CpG免疫刺激序列的猪圆环病毒Ⅱ型核酸疫苗;pcDNA-PCV-ORF2-ISS在仔猪免疫实验能诱导细胞免疫并产生特异性抗体(P<0.05);用5种细胞因子分子佐荆质粒与pcDNA-PCV-ORF2疫苗同时免疫能显著提高DNA疫苗的免疫效果(P<0.05).分子佐剂免疫增强效果次序为:IL-6、CpG、IL-6/4、IL-2、IL-4和IFN-γ,表明IL-6和CpG最佳.     

微生态制剂对奥尼罗非鱼生长、饲料利用和抗病力的影响

罗非鱼属于鲈形目（Perciformes）、鲡鱼科（Cich-lidae）、罗非鱼属（Tilapia）,约有60种。目前,中国养殖的杂交品种主要有奥尼罗非鱼、红罗非鱼和福寿罗非鱼等。罗非鱼具有生长快、养殖周期短、产量高、群体繁殖力强、对环境适应性强以及抗病力强等特点。然而,随着高密度养殖规模的不断扩大,罗非鱼养殖业也面临着严峻的挑战。     

Dot-ELISA检测兔疥螨抗体方法的建立和应用

将从病兔痂皮内收集的疥螨经研磨、冻融、离心后,制成可溶性抗原,作为诊断抗原,建立Dot-ELISA方法检测兔疥螨血清抗体.研究确定了该方法的最佳工作条件.制备的诊断膜片特异性强,不与兔瘟病毒、兔大肠埃希菌、兔附红细胞体等阳性血清反应.膜片具有良好的灵敏性,高免血清作1∶210稀释亦能检出;重复性试验表明该法重复性良好.诊断膜片在4 ℃保存5个月其检测活性不变.结果表明,建立的Dot-ELISA可用于免疥螨抗体的检测.