CpG DNA对鸡传染性喉气管炎病毒DNA疫苗免疫效果的影响

 将分别构建的含有鸡传染性喉气管炎病毒（ＩＬＴＶ）王岗株ｇＢｇＣ和ｇＤ基因的重组真核表达质粒及ＣＰＧＤＮＡ佐剂分组肌肉注射 ＳＰＦ鸡，检测了免疫后的抗体水平，并观测了攻毒后的免疫保护效果。实验结果显示，ＣｐＧＤＮＡ佐剂和ＤＮＡ疫苗联合免疫后的抗体水平比单一使用ＤＮＡ疫苗的要高，而佐剂组的发病率、死亡率均低于非佐剂组，保护率则高于非佐剂组。这表明 ＣｐＧ ＤＮＡ佐剂增强了 ＩＬＴＶ ＤＮＡ疫苗的免疫效果。     

我国禽用基因工程疫苗研发现状及策略

近些年来,我国在禽用基因工程疫苗研究上取得了很大的进展,一些禽用基因工程疫苗已经商品化,并对我国养禽业作出了巨大贡献。本文对通过注册的禽用基因工程疫苗进行简介,并对基因工程疫苗研发现状进行总结,提出相应策略。     

H5N1亚型禽流感油佐剂疫苗安全性试验研究

通过对H5N1亚型禽流感油佐剂疫苗的急性毒性试验、眼结膜刺激试验、肌肉刺激试验与溶血试验研究,评价其安全性。急性毒性试验：取AA+肉鸡70只,随机分成7组,设为高剂量疫苗组与佐剂组,中剂量疫苗组与佐剂组,低剂量疫苗组与佐剂组,空白对照组。眼结膜刺激试验：取兔12只,随机分成2组,为疫苗组和佐剂组,采用自身对照法,观察兔...     

鸡传染性支气管炎病毒S1基因和鸡II型干扰素基因在重组鸡痘病毒中的共表达

将鸡II型干扰素(ChIFNγ)基因和鸡传染性支气管炎病毒S1基因同时插入到鸡痘病毒转移载体中,构建含有这2个基因的鸡痘病毒转移载体pSY-ChIFNγS1。采用脂质体法将该质粒转染鸡痘病毒感染的鸡胚成纤维细胞(CEF),经过8轮蓝斑筛选,得到纯化的能够同时表达鸡II型干扰素和鸡传染性支气管炎病毒S1基因的重组鸡痘病毒rFPV-ChIFNγS1。rFPV-ChIFNγS1接种28日龄的SPF鸡1周后,可以检测到针对传染性支气管炎病毒S1基因的ELISA抗体,重组病毒接种鸡的CD4+、CD8+和γδTCR阳性T淋巴细胞的百分比含量显著高于非免疫对照鸡(P<0.05);免疫4周后用传染性支气管炎LX4强毒株攻击,rFPV-ChIFNγS1免疫组仅有1只出现轻微的呼吸道症状(1/16),而非免疫对照组则有16只发病(16/16),并有2只出现死亡(2/16),表明rFPV-ChIFNγS1对接种鸡可以产生良好的保护效果。     

传染性喉气管炎病毒王岗株gB基因gC基因和gD基因的真核表达

将传染性喉气管炎病毒(ILTV)王岗(WG)株的gB、gC、gD基因分别克隆到真核表达载体pCAGGS的EcoRⅠ位点，经过酶切、测序分析，筛选鉴定出含有gB、gC、gD基因的重组质粒，分别命名为pCAGG—gB、pCAGG—gC、pCAGG—gD。用质粒纯化试剂盒对重组质粒进行了纯化，将纯化后的质粒转染293T细胞，用间接免疫荧光技术检测了目的蛋白的表达情况。检测结果表明，目的蛋白得到了真实的表达。     

表达传染性喉气管炎病毒gB基因和新城疫病毒F基因重组鸡痘病毒疫苗免疫持续期试验

用表达传染性喉气管炎病毒gB基因和新城疫病毒F基因的重组鸡痘病毒（rFPV～gB—F）制备的疫苗免疫4周龄SPF鸡，免疫后的7、14、21、30、60、90、120、150、180d分别采血，分离血清，检测抗FPV和gB的抗体。结果表明重组疫苗免疫后14d，免疫鸡血清抗体已经全部阳转，免疫后的21d血清抗FPV的抗体出现峰值；此后便开始回落，到免疫后的6个月抗体水平已经接近阴性对照的水平。抗gB的抗体在免疫后的第二周达到阳性，之后的六个月都为阳性。在免疫后的每个月将免疫鸡取20只再分成两组。分别用新城疫强毒与传染性喉气管炎强毒的攻击。在免疫后的第一个月对新城疫的保护率为8／10，第2个月对新城疫的保护为7／10，第3个月为2／10，因此对新城疫的免疫保护期为2个月。在免疫后的5个月内可以使免疫鸡对传染性喉气管炎强毒攻击的保护率达到8／10以上，免疫后的6个月对ILT为8／13．因此rF—PV-gB—F对传染性喉气管炎的免疫保护期为5个月。     

表达传染性支气管炎病毒S1基因重组鸡痘病毒的构建

将鸡传染性支气管炎病毒S1基因插入到鸡痘病毒转移载体pSY681中，获得重组转移载体pSY681。将pSY681-IBVS1转染已感染亲本鸡痘病毒S-FPV-017株的鸡胚成纤维细胞，使其在鸡胚成纤维细胞内与鸡痘病毒基因组发生同源重组，产生表达鸡IBVS1蛋白的重组鸡痘病毒rFPV-IBVS1。在含有X-gal的营养琼脂培养基上进行蓝斑筛选且进一步纯化14代。S1基因的PCR检测表明，获得的含传染性支气管炎病毒S1基因的重组鸡痘病毒能够稳定遗传，间接免疫荧光和Western blot等试验证实该重组病毒在CEF内真实地表达了分子量约为90Ku的具有免疫学活性的IBV S1糖蛋白。     

表达传染性喉气管炎病毒gB基因和新城疫病毒F基因重组病毒免疫及强毒攻击后外周血T淋巴细胞亚群的动态

采用流式细胞检测技术对表达传染性喉气管炎病毒gB基因和新城疫病毒F基因重组鸡痘病毒（rFPV-gB-F）、新城瘦弱毒疫苗以及传染性喉气管炎弱毒疫苗免疫和传染性喉气管炎以及新城疫强毒攻击后外周血T细胞表型亚类（CD4^＋、CD8^＋、XCRγδ^＋）的变化动态进行监测。重组疫苗和禽痘疫苗免疫之后，CD8^＋和TCRγδ^＋的细胞数先升高后回落；在NDV强毒攻击之后，ND疫苗免疫组的TCRγδ^＋数量升高，rFPV-gB-F免疫组的三种细胞数量在第l周都下降，随后升高；ILT疫苗在免疫后的第1周，CD4^＋细胞数量下降。结果提示rFPV-gB-F可以诱发相应的细胞免疫应答，但是有关传染性喉气管炎病毒导致的细胞免疫需要进一步的研究，     

马传染性贫血野毒辽宁株前病毒全基因组核苷酸序列测定

采取马传染性贫血病毒（ＥＩＡＶ）辽宁野毒株（Ｌ株）感染马的血液,分离白细胞。提取白细胞中的ＤＮＡ,并以此为模板,利用ＰＣＲ技术分四个片段扩增 ＥＩＡＶ前病毒 ＤＮＡ。将其分别克隆到载体质粒 ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ ＳＫ中,经酶切鉴定后测序。对测序结果分析、拼接,得到 ＥＩＡＶ　 Ｌ株前病毒基因组全序列。     

家禽抗病毒免疫

目前对家禽生产的需求量在持续加大,随着集约化养殖的扩大,养鸡场更容易受到一些病原体比如细菌、病毒和一些寄生虫的袭击。现已采用多种方法比如改善饲养管理、调节饲料或使用疫苗来提高家禽的先天性和获得性免疫的能力,保护其不被感染,从而减少疫病造成的损失。其中疫苗免疫是提高家禽抵抗力的最好方法。本文对家禽抗病毒免疫的基本机理进行简述,为提高家禽的抗病毒免疫力提供借鉴。