猪链球菌2型感染致小型猪肺炎的病理学研究

为探明猪链球菌2型(Streptococcus suis type 2,SS2)感染肺组织的主要病变及其在肺组织中的分布,并针对病变的肺脏进行系统的病理学研究。选取6头SPF巴马小型猪,5头用于实验组,分别肌肉注射1×109 CFU/mL的SS2菌液2mL;1头对照猪注射等体积生理盐水。记录死亡时间,同时观察死亡前实验小型猪的临床症状变化;剖解病死猪,观察肺部病变;随机取部分肺组织计算肺脏的湿/干比值,分析其与死亡时间的关系;取病变肺组织进行组织病理学观察;制作冰冻切片,用SS2荧光抗体检测SS2在肺组织中定位和菌量。结果显示:(1)实验组2头感染小型猪在6h内发生急性死亡,且死亡前没有任何神经症状,只是存在呼吸异常等症状,同时其肺脏的湿/干比值最大;另3头分别在感染12、20h和36h死亡,死亡前具有SS2典型的神经和呼吸异常症状,肺脏的湿/干比值也随之降低,可见死亡越早肺水肿程度越严重。(2)病死猪肺组织病理学观察结果显示,肺泡的间隔增宽,出血,有大量炎性物质渗出,肺泡腔内可见数量不等的红细胞、中性粒细胞、淋巴细胞和浆液性渗出物等典型的间质性肺炎特征症状。(3)SS2荧光抗体检测显示SS2可侵入肺组织的各个部位,并且在6h和20h菌量相接近。结果表明SS2感染小型猪肺病变以炎症反应为主,并发现SS2感染诱发动物急性死亡与其感染导致呼吸功能衰竭有关。     

猪传染性胃肠炎疫苗研究进展

猪传染性胃肠炎是猪的一种高度接触性的病毒性传染病。该病主要发生在冬李和早春,是危害养猪业较严重的一种传染病,给养猪业造成了巨大的经济损失。本文就猪传染性胃肠炎病毒基因的分子生物学特征、疫苗研究进展及以乳酸杆菌为载体构建DNA疫苗等方面进行了综述,以期为猪传染性胃肠炎乳酸杆菌疫苗的研究提供一定依据。     

TTMV间接ELISA检测方法的建立

以TTMV重组蛋白作为包被抗原,通过反应条件优化,建立了检测人TTMV血清抗体的间接ELISA方法,结果显示：抗原最佳包被浓度为1．63μg／mL,37℃孵育1h后4℃过夜;血清稀释度为1：320;酶标二抗孵育时间为37℃60min;ELISA酶标板的临界值为0．211。运用该方法对上海市和辽宁省共计280份血清样品进行检测,阳性检出率分别为34．68％和39．74％。检测结果表明,建立的间接ELISA方法特异性与重复性均较好,为进一步完善TTMV临床诊断方法打下了基础。     

猪链球菌2型感染动物模型研究进展

猪链球菌2型(SS2)是以败血症、脑膜炎、关节炎为主要特征的人兽共患病。该病不但对养猪业造成严重经济损失，也会给公共卫生和食品安全带来威胁，但由于其毒力因子和感染机制还不十分清楚，尚不能有效控制。不同动物模型的建立为研究病原的体内动态分布、感染机制、毒力因子及免疫应答等提供了依据。作者就国内外对SS2的造模方法及结果进行了介绍，并将不同动物模型的优缺点进行了比较，旨在掌握SS2动物模型研究的动态，为建立更有效的动物模型奠定基础。     

观赏鱼常见寄生虫病的诊治初探

观赏鱼资源丰富,却常发生寄生虫病,给水族爱好者带来较大的损失。本文通过对病鱼或死鱼的临床检查、病理剖检及实验室检查,对常见的瓣体虫病、车轮虫病、小瓜虫病、指环虫病和本尼登虫病的诊断进行了初步研究,并在此基础上进行了治疗。结果表明,以上5种寄生虫病在症状上有很多相似之处,只有经过刮片镜检,才能准确诊断。当鱼体诊断出有寄生虫时要迅速用硫酸铜、甲醛、吡喹酮和黄药粉等高效药物进行治疗。     

猪流行性腹泻病毒SHpd/2012株Nsp8基因分析及真核表达

应用生物信息工具和分子克隆技术对PEDV SHpd/2012株Nsp8基因编码的蛋白进行了结构和功能分析以及体外表达。结果显示,NSP8蛋白是一个含有194个氨基酸的亲水性蛋白,不含信号肽和跨膜区。SHpd/2012毒株高度保守的NSP8氨基酸序列与CV777、AJ1102等毒株同源性高。NSP8蛋白也是一个单体蛋白,共有5个优势抗原表位。此外,本研究成功地在293T细胞内表达了NSP8蛋白,为进一步研究猪流行性腹泻病毒NSP8蛋白的功能提供了理论基础。     

猪流行性腹泻病毒SHpd/2012株侵染Vero细胞特性分析

为了探究PEDV(猪流行性腹泻病毒)流行毒株SHpd/2012侵染细胞的特性,研究采用IFA(间接免疫荧光)及绘制病毒一步生长曲线等方法,对感染PEDVSHpd/2012株后的Vero细胞(非洲绿猴肾细胞)病变过程进行研究。结果发现,CPE(细胞病变)主要表现为细胞肿胀、变圆、皱缩、聚集成合胞体甚至从培养瓶壁大量脱落。IFA结果显示,接毒后12h病毒开始增殖,在接毒后36h时感染细胞数量最多,其后病毒增殖速度逐步下降,60h时趋于平稳。病毒一步生长曲线结果显示,SHpd/2012株感染细胞后24~60h的毒价一直处于较高水平,60h后开始下降。此外,本研究成功克隆并真核表达了PEDV S蛋白,为研究PEDV与受体蛋白的互作及病毒的致病机制奠定基础。     

猪星状病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立与初步应用

本研究旨在建立一种能够快速、简便、灵敏地检测猪星状病毒的基于SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法。根据已报道的猪星状病毒ORF2基因序列,设计并合成1对引物,通过PCR扩增ORF2基因片段,将测序正确的ORF2基因片段克隆入pMD18-T载体,转化大肠杆菌DH5α,经测序鉴定后得到阳性重组质粒,作为标准品模板建立SYBR GreenⅠ荧光定量PCR标准曲线和熔解曲线,并对其灵敏性、特异性和重复性进行验证。结果表明,猪星状病毒荧光定量PCR的标准曲线Ct值与模板浓度呈良好的线性关系,熔解曲线特异,灵敏度可达1×101拷贝,是普通PCR检测方法的100倍,特异性和重复性较好。本次建立的猪星状病毒荧光定量PCR检测方法具有快速、简便、敏感等优点,有重要的实用价值。     

LLC-PK1细胞中LDHB蛋白的体外表达及小RNA干扰

为了观察与猪流行性腹泻病毒(PEDV) NSP12互作蛋白乳酸脱氢酶B (LDHB)的体外表达情况和小RNA干扰效果,构建了真核表达载体pcDNA4.0-LDHB-3*Flag,并在Vero细胞中过表达LDHB,发现在37 kDa处有大小相符的明显条带。设计的2条小干扰RNA能降低LLC-PK1细胞中LDHB的mRNA和蛋白质水平,经one-way ANOVA检验证明干扰实验组2~(-ΔΔct)的平均值显著低于对照组(P0.05)。该结果为研究LDHB在PEDV感染LLC-PK1和Vero细胞过程中的作用提供了基础数据。