犬贾第虫dsRNA病毒的鉴定及特性

对分离到的6株犬贾第虫（Giardia cnais)包囊进行核酸分析，在其中1株犬贾第虫核酸的琼脂糖凝胶电泳图谱上观察到1条长度约7.0kb的片段。经鉴定，该核酸不能被DNA酶（100mg/L）降解，对质量浓度低的RNA酶（0.1mg/L)不敏感，但可被质量浓度高的RNA酶（10mg/L）降解。纯化包囊经流氮冻融后，磷钨酸负染，电镜观察发现有球形、直径约为33nm的病毒样粒子存在，包囊超薄切片在胞质中也观察到该病毒样粒子存在。RNA依赖RNA聚合酶活性测定结果表明，该病毒具有RNA依赖RNA聚合酶的活性。犬贾第虫dsRNA病毒核经RT-PCR扩增后得到1条预计扩增大小的片段，将其回收后连接到pMD18-T载体上进行克隆并测序，所得序列仅与蓝氏贾第虫病毒具有较高同源性。     

纳罗克非洲狗尾草种子生产技术研究概况

从施肥、刈割、植物生长调节剂、收获时间等方面论述了纳罗克非洲狗尾草种子生产的主要环节,提出了增加种子产量的关键措施。     

一个山羊Ⅰ型毛角蛋白基因的序列及其在皮肤中的表达

角蛋白家族包含表皮软角蛋白和毛发硬角蛋白，可以分为酸性Ⅰ型和碱性或中性的Ⅱ型角蛋白亚家族。从构建的成年山羊皮肤cDNA文库和ESTs分析中发现了和与绵羊羊毛角蛋白8C1和人Ⅰ型毛发角蛋白相应cDNA序列高度同源的序列，经序列分析证明是一个山羊毛发特异性角蛋白，命名为山羊Ⅰ型毛角蛋白1（gHa1），Gen Bank序列号为AY510110．1。推导的读码框ORF由413氨基酸组成，与绵羊8C1角蛋白的序列一致性为97．8％。原位杂交显示它在皮肤初级和次级毛囊的皮质层有强烈的表达。     

猪传染性胸膜肺炎重组亚单位疫苗诱导小鼠免疫保护效果的观察

重组表达猪传染性胸膜肺炎放线杆菌6种主要毒力因子基因:apxⅠ、apxⅡ、apxⅢ、apxⅣ、apfa和omp,以重组蛋白rApxⅠ、rApxⅡ、rApxⅢ和rOMP组合免疫小鼠作为试验I组,重组蛋白rApxⅠ、rApxⅡ、rApxⅢr、OMPr、ApxⅣ和rApfa组合免疫小鼠作为试验Ⅱ组,PBS为对照组,分3次免疫小鼠,采用背部皮下多点注射,每次间隔2周,免疫剂量为0.2 mL/只,3免后1周分别以APP1型菌Shope 4074株(5×109cfu)和APP2型菌S1536株(5×1010cfu)进行攻毒试验。通过小鼠保护率与抗体效价的相关性研究、肺部病理变化及肺脏细菌的分布情况等指标进行综合评价。结果显示,试验Ⅰ组4种重组蛋白特异性抗体水平显著高于其他两组(P<0.05),对APP1型菌攻毒的保护率(9/10)明显高于试验Ⅱ组(5/10)和对照组(0/8),小鼠的免疫保护率与抗体效价之间存在显著正相关;且该组对APP2型菌攻毒的保护作用(无肺脏损伤)也明显优于其它两组(典型肺部损伤)。间接免疫荧光试验表明试验Ⅰ组对肺脏细菌的清除效果也明显优于其他两组。本试验揭示试验Ⅰ组对不同血清型APP攻击能够提供很好的交叉保护作用,从而为猪传染性胸膜肺炎新型疫苗的研制提供参考。     

猪传染性胃肠炎病毒分子生物学研究进展

猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)基因组为不分段的单股正链RNA,其编码4种结构蛋白和3种非结构蛋白。TGEV S蛋白是基因工程研究的重点,近年来,S蛋白在大肠埃希菌、沙门菌、腺病毒等中得到了高效表达。将传染性胃肠炎病毒的基因组人工改造成为感染性cDNA的表达载体,此载体可在ORF3处插入外源基因,异源基因绿荧光蛋白可稳定、高效地表达。TGEV基因1和其他冠状病毒相比保守性很强,所以对TGEV聚合酶的研究,特别是其中保守酶的研究,对于抗TGEV及其他冠状病毒药物的研究有着重要的意义。     

羊痘病毒实时荧光定量TaqManPCR检测方法的建立

参照羊痘病毒（CaPV）P32的基因序列，设计合成了2套引物和1条探针，建立了实时荧光定量PCR技术，对细胞培养物、皮肤丘疹、痂皮等组织病料中的GPV进行了特异性检测和敏感性试验。结果显示，用300nmol／L引物浓度和200nmol／L探针浓度，获得的CT值较小，而△Rn最大；可检测到相当于0．1TCID50的病毒DNA；制作的标准曲线中各浓度范围内有极好的线性关系且线性范围宽，相关系数为0．9995以上；组内和组间试验重复性的变异系数分别为2．3％和3．4％；与常规的PCR相比较，该方法具有快速、特异、敏感、可定量，可同时检测大量样品等优点。表明，荧光TaqMan PCR是一种检测CaPV的良好方法，可对组织病料中低含量的CaPV或持续带毒宿主进行准确检测。     

小反刍兽疫病毒H糖蛋白基因原核表达载体的构建及表达

参照GenBank中小反刍兽疫病毒（PPRV）H抗原基因序列，人工合成了PPRVH基因，将其克隆至PUC18-T质粒中，转化E．coli JM109感受态细胞，构建并选择PPRVH基因克隆重组质粒，经核苷酸序列分析正确，将其克隆至pBAD／Thio—TOPO载体中，转化E．coli TOP10感受态细胞，核苷酸序列分析证实，成功构建了PPRVH基因重组表达载体。经不同浓度L-阿拉伯糖诱导，可稳定、高效地表达PPRVH抗原。SDS-PAGE分析结果表明，用终浓度为0．2g／L的L-阿拉伯糖诱导5h的表达量最高，表达蛋白为分子质量约83ku的融合蛋白；经薄层扫描分析，其表达产量约占菌体总蛋白的10％。Western-blotting检测表明，诱导的蛋白能与PPRVH蛋白单抗发生特异性反应，说明表达的融合蛋白中含有PPRVH糖蛋白抗原。     

赤羽病病毒核衣壳蛋白抗体间接ELISA检测方法的建立

以纯化的重组赤羽病病毒核衣壳蛋白作为诊断抗原，建立了检测牛血清特异性核衣壳蛋白抗体的间接ELISA方法，初步组装成便于现地使用的试剂盒。经对试验条件进行优化，确定最佳抗原包被量为每孔1μg（100μL），样品稀释度为1：100，兔抗牛IgG辣根过氧化物酶标记抗体稀释度为1：8000。经特异性试验和重复性试验证明该方法特异性高、重复性好。应用初步研制的间接ELISA试剂盒和微量中和试验法分别对云南省的89份、内蒙古的100份牛血清样本进行了检测，以中和试验为参照，经统计学处理，得出检测临界值分别为0．411和0．303，2种方法的符合率分别为72．7％（56／77）和91．4％（85／93）。试剂盒在37℃保存3d，对敏感性无明显影响。     

基因型鹅副粘病毒NA-1株全基因组的克隆及特性分析

将本实验室分离保存的NA-1株鹅副粘病毒(GPMV)经SPF鸡胚增殖,收集鸡胚尿囊液进行病毒纯化,提取病毒基因组RNA。参考GenBank已收录的GPMVZJ1株基因组序列,设计了8对特异性引物,RT-PCR法分别特异性的扩增出病毒各基因片段,并将各目的基因片段回收纯化,克隆PGEM-T载体,转化大肠杆菌DH5α,小提质粒选取阳性克隆酶切鉴定并进行序列测定,对测定结果进行拼接得到全长cDNA序列(GenBank登录号:DQ659677)。NA-1株核苷酸比新城疫病毒(NDV)核苷酸多6个碱基,位于1644~1645nt之间,符合NDV核苷酸“六碱基原则”。序列分析结果表明,GPMVNA-1株与各地代表株核苷酸同源性81.2%~91.3%。同时根据各毒株F基因开放阅读框前389个核苷酸序列绘制出系统发育进化树,结果表明GPMNNA-1株与SF02和QY97病毒株同属于基因型,不同于基因IX型NDV的国家标准株F48E9和基因型的LaSota传统弱毒株。     

不同日粮组成对断奶初期奶公犊瘤胃内环境指标的影响

选用3头三月龄左右装有瘤胃瘘管的荷斯坦奶公犊,按3×3完全拉丁方试验设计,喂给三种日粮。日粮组成按精粗比分别表示为:70:30;60:40;50:50,研究不同日粮组成对断奶初期奶公犊瘤胃内环境指标包括pH值、氨氮(NH3-N)浓度、纤毛虫数量及微生物蛋白的影响。试验结果表明:精粗比为70:30日粮条件下奶公犊瘤胃内pH值显著低于其它组(P<0.01),70:30日粮组瘤胃内NH3-N浓度显著高于精粗比为60:40和50:50日粮(P<0.01)。不同日粮组成下精粗比为60:40和50:50日粮的瘤胃纤毛虫数量和微生物蛋白显著高于高精料组70:30日粮(P<0.01)。