CRISPR/Cas9介导的基因组编辑技术及应用研究进展

成簇的规律间隔的短回文重复序列及其相关蛋白系统(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR/CRISPR-associated nuclease system,CRISPR/Cas)是广泛存在于细菌和古细菌的适应性免疫系统,其中由Ⅱ型CRISPR/Cas系统改造而来的第三代基因组编辑技术——CRISPR/Cas9系统已广泛应用于生命科学研究的多个领域。本文主要从CRISPR/Cas9系统的发现、作用原理、应用进展及与其他新兴的基因组编辑技术的对比等四个方面进行阐述,重点介绍其最新研究进展,并展望了CRISPR/Cas9系统的应用前景。     

基因型鹅副粘病毒NA-1株全基因组的克隆及特性分析

将本实验室分离保存的NA-1株鹅副粘病毒(GPMV)经SPF鸡胚增殖,收集鸡胚尿囊液进行病毒纯化,提取病毒基因组RNA。参考GenBank已收录的GPMVZJ1株基因组序列,设计了8对特异性引物,RT-PCR法分别特异性的扩增出病毒各基因片段,并将各目的基因片段回收纯化,克隆PGEM-T载体,转化大肠杆菌DH5α,小提质粒选取阳性克隆酶切鉴定并进行序列测定,对测定结果进行拼接得到全长cDNA序列(GenBank登录号:DQ659677)。NA-1株核苷酸比新城疫病毒(NDV)核苷酸多6个碱基,位于1644~1645nt之间,符合NDV核苷酸“六碱基原则”。序列分析结果表明,GPMVNA-1株与各地代表株核苷酸同源性81.2%~91.3%。同时根据各毒株F基因开放阅读框前389个核苷酸序列绘制出系统发育进化树,结果表明GPMNNA-1株与SF02和QY97病毒株同属于基因型,不同于基因IX型NDV的国家标准株F48E9和基因型的LaSota传统弱毒株。     

噬菌体展示技术及其应用研究进展

噬菌体展示技术（Phage Dlsplay techniques，PDT）起源于1985年，是一种用于筛选和改造功能性多肽、蛋白质强有力的生物技术，广泛应用于研究蛋白质的结构与功能，蛋白质间的识别与作用，分离体内特异蛋白质与基因以及实验进化等多个分子生物学领域。目前噬菌体展示技术的研究进展非常迅速，在抗原决定簇的定位、蛋白质相互作用位点的确定、特异调节分子的分离和人工抗体和疫苗的制备、诊断技术、酶抑制剂的研究开发、多肽药物的研制等生物技术研究的不同领域得到了应用，并对这些领域产生了深远的影响。     

丽水农科院基于地方服务工作农技人才培养模式的探究

为探索地方农业科研机构人才培养新模式,解决地方农业人才短缺,提升农技人才质量等现实问题,丽水市农科院构建了纵向培养创新人才、横向(二级)培养实用人才的新模式,通过近几年的实施人才培养工作获得良好成效。为地方农业科研机构的人才培养工作提供了新的思路。     

高致病性猪蓝耳病病毒吉林株的分离鉴定及生物学特性

从吉林某猪场采集曾接种过猪繁殖与呼吸综合征疫苗的发病猪病料,经RT-PCR初步鉴定为猪繁殖与呼吸综合征病毒后,利用反转录合成cDNA,用针对PRRSV M、N基因片段设计的特异性引物进行扩增及电泳,在紫外凝胶成像系统下可见约为660bp特异性扩增条带。解剖发病仔猪,发现其有HP-PRRSV发病的特征,两耳及鼻端淤血,呈蓝紫色,肺部等内脏器官淤血呈暗红色。病理组织切片显示,病猪有典型的间质性肺炎的特征性病理变化。将其接种于Marc-145细胞后,在培养至第4代时出现典型的细胞病变（CPE）,表现为细胞聚集成丛、随后固缩、变圆、脱落;经Reed-Muench法计算得出两PRRSV分离株的病毒滴度分别为10-5.30 TCID50/0.1mL和10-5.53TCID50/0.1mL。用间接免疫荧光试验观察到在接种病料的Marc-145细胞胞浆内出现特异性荧光,而未接种PRRSV的细胞对照则未见到荧光反应。     

噬菌体展示技术及其应用研究进展

噬菌体展示技术(Phage Display techniques,PDT)起源于1985年,是一种用于筛选和改造功能性多肽、蛋白质强有力的生物技术,广泛应用于研究蛋白质的结构与功能,蛋白质间的识别与作用,分离体内特异蛋白质与基因以及实验进化等多个分子生物学领域.目前噬菌体展示技术的研究进展非常迅速,在抗原决定簇的定位、蛋白质相互作用位点的确定、特异调节分子的分离和人工抗体和疫苗的制备、诊断技术、酶抑制剂的研究开发、多肽药物的研制等生物技术研究的不同领域得到了应用,并对这些领域产生了深远的影响.     

鹅细小病毒主要免疫原性蛋白VP3基因遗传变异及其原核表达

根据鹅细小病毒(GPV)B株全基因序列,设计并合成了1对特异性引物,采用PCR技术对GPV GD-01株的VP3基因进行扩增,将目的基因克隆到pGEM(R)-T后测序,分析了GPV GD-01株VP3基因的遗传变异情况,并进行原核表达.结果表明,GPV GD-01株VP3基因全长1605bp,编码534个氨基酸(DQ665790),与已发表的GPV、番鸭细小病毒(MDPV)的核苷酸、氨基酸同源性分别为96.15%、80.1%,97.78%、89.13%,说明GPV VP3基因具有较高的遗传稳定性.结合亲水性、表面极性、抗原位点分析比较GPV、MDPV VP3基因,为研究GPV和MDPV感染谱差异的分子机制提供了一定的理论基础.原核表达显示,VP3蛋白的最高表达量占整个菌体蛋白含量的29.9%,经表达条件优化可产生大量可溶性VP3表达蛋白.SDS-PAGE与Western-blot分析显示,表达的VP3蛋白的相对分子质量约60000,并能与鼠抗GPV阳性血清反应,证明具有一定的反应原性,为进一步研制基因工程疫苗及诊断制品奠定了基础.     

基于成果导向教育理念的《动物性食品检疫学》课程教学改革探索

应用成果导向教育理念,结合多年的实践教学经验,构建《动物性食品检疫学》课程成果导向教学改革体系。分别从课堂教学目标、课堂教学内容、课堂生态、实验教学、考试考核、课程评价会等方面进行阐述。改革措施实施以来,取得一些显著效果,学习成绩有所上升,学生科研兴趣高涨,保研考研的人数增加。本文旨在通过对《动物性食品检疫学》课程的教学改革进行探索,以期提高教学质量,促进人才培养。     

针对血清6型副黏病毒(APMV-6)快速荧光定量PCR检测方法的建立与初步应用

根据GenBank发表的6型副黏病毒(APMV-6)参考毒株(KF267717.1)M基因序列,利用Oligo7设计合成1对引物,以重组阳性质粒为标准品,建立了APMV-6SYBR Green实时荧光定量PCR检测方法。结果显示,建立的检测方法经优化后,线性关系良好,标准曲线R2=0.998,扩增效率107.322%。本方法敏感度高,特异性强,重复性好,最低检出拷贝数为2.78×10~2copies/μL,与NDV和APMV-4不发生特异性反应,比常规检测方法检出率高18%,可将其用于APMV-6的定量检测以及临床早期快速诊断。     

gga-miRNA155介导新城疫病毒感染机制

新城疫是由新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)引起的一种禽类急性高度接触性病毒性传染病,对全球养禽业造成了严重危害。而现阶段主要依赖疫苗接种的方法对防控新城疫存在着一定的局限性,现已经有多个研究证明宿主miRNA对病毒具有调节作用。根据新城疫病毒NA-1感染鸡细胞HD11 microRNA(miRNA)表达谱分析,选取表达量显著上调的miRNA155作为研究对象,研究miRNA155在介导新城疫病毒感染中的作用。试验研究结果显示,在新城疫病毒感染后miRNA155表达量明显上调,但是miRNA155表达量的改变无法影响新城疫病毒的感染。