H3N2亚型禽流感病毒三重RT-PCR检测方法的建立

为建立检测禽流感病毒(AIV)且同时区分H3N2亚型AIV的方法,本研究根据H3、N2亚型AIV HA、NA基因及AIV最保守M基因的保守区域,设计并筛选出3对特异性引物,通过优化反应条件,建立了AIV H3N2亚型和M基因三重RT-PCR的检测方法。对该法进行特异性及敏感性检测,并通过该三重RT-PCR方法对96份临床样品进行检测。结果显示,H3N2亚型AIV可扩增出3条特异性条带,其中518bp为AIV M基因、418bp为N2亚型AIV NA基因、271bp为H3亚型AIV HA基因;H3亚型和N2亚型AIV均可扩增出2条特异性条带,大小分别为518bp、271bp和518bp、418bp;其他亚型AIV可扩增出一条特异性条带,大小为518bp;常见禽病病原体均未扩增出任何条带。敏感性试验表明该法对H3N2亚型AIV的检测下限为100pg,96份临床样品检测结果与病毒分离鉴定结果一致。本研究所建立的AIV H3N2亚型和M基因三重RT-PCR为一种简便、快速、有效的检测方法。     

青少年思想政治教育与和谐社会构建

构建和谐社会是党的十六届四中全会提出的战略任务,搞好青少年思想政治教育是构建和谐社会的基础。提高教育者素质,把理想信念教育作为对青少年进行思想政治教育的核心内容,营造有利于青少年健康成长的氛围,是实现这一战略目标的关键。     

7种杀菌药物对桉树紫斑病的防治试验

利用 7种药物对桉树紫斑病 (SeptoriamotarlensisPenz .etSacc)进行防治试验 ,结果表明 ,这 7种药物对桉树紫斑病都有较好防治效果。可杀得、多菌灵及菌毒清不仅防治效果好 ,而且价格便宜 ,值得推广。此外根据该病的发生特点提出防治建议     

近年广西鸡传染性支气管炎流行病学研究的概况

1前言鸡传染性支气管炎(Infectious bronchitis,IB)分别为国际兽疫局(OIE)及中国规定的家禽B类/二类传染病。该病是由传染性支气管炎病毒(In-fectious bronchitis virus,IBV)引起鸡的一种急性、高度接触传染性的呼吸道疾病,不同日龄、性别、品种的鸡均易感。其危害由于感染的广泛性和高发     

无羽鸡即将走向市场

无羽鸡的研究在首次报道后四年,引起了公众和世界媒体的关注。商业化的试验表明,相对于有羽鸡,无羽鸡具有更大的优势,特别在热带地区饲养时优势更明显。大约四年前,以色列希伯来大学农学专业的遗传学家阿维格多·卡哈纳教授报道了他关于无羽鸡的研究。他列举了无羽鸡的种种优点     

鸡细小病毒NS1和VP2蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

【目的】原核表达鸡细小病毒(ChPV)的NS1和VP2蛋白,制备其多克隆抗体,为深入探究ChPV蛋白结构功能及建立血清学诊断方法提供物质基础。【方法】通过合成ChPV GX-Ch-PV-21毒株的NS1和VP2蛋白基因序列,构建原核重组表达载体pET-32a-NS1和pET-32a-VP2,将测序正确的重组质粒转化至大肠杆菌transsetta感受态细胞进行原核表达,优化表达条件,以十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳和免疫印迹(Western-blotting)方法鉴定NS1和VP2蛋白的表达情况。将表达产物免疫无特定病原体(SPF)鸡获得多克隆抗体,采用酶联免疫吸附实验(ELISA)方法测定其效价,以Western-blotting和间接免疫荧光试验(IFA)对多克隆抗体进行鉴定。【结果】SDS-PAGE分析显示,NS1和VP2蛋白条带大小分别约为104和87 kD,与预期条带大小相符。对重组质粒pET-32a-VP2和pET-32a-NS1进行最佳诱导条件筛选,结果显示NS1蛋白表达的最佳诱导条件为异丙基-beta-D-硫代半乳糖吡喃糖苷(IPTG)终浓度1.0...     

硅藻土/纤维素复合助滤剂在微污染原水处理中的应用

以硅藻土和纤维素为原料,通过溶胶-凝胶法制备出了新型硅藻土/纤维素复合助滤剂,探究了各种制备条件对助滤剂的影响,并在高岭土悬浊液中对硅藻土、纤维素和硅藻土/纤维素的助滤性能进行了比较,同时研究了硅藻土/纤维素助滤剂对实际微污染水过滤的影响。研究结果表明:复合助滤剂的最佳制备条件为纤硅比0.67,氨水浓度5.0×10^-4mol/L,蒸馏水/纤维素40 mL/g,EtOH/硅藻土20 mL/g,60℃恒温水浴;硅藻土/纤维素复合助滤剂的助滤性能要明显优于硅藻土和纤维素助滤剂;在微污染原水直接过滤过程中,投加硅藻土/纤维素助滤剂可提高各微污染物的去除率,结合微滤膜深度处理工艺,最终出水水质满足《生活饮用水卫生标准》(GB 5749-2006)的要求。     

H9和H6亚型禽流感病毒三重RT-PCR检测方法的建立

为H9与H6亚型禽流感病毒(AIV)的监测及其防控提供技术支撑,依据Genbank中H9和H6亚型AIV的HA基因及所有亚型AIV M基因的保守序列,分别设计3对特异性引物,优化退火温度和引物浓度及其配比等条件,建立并优化可同时鉴别检测H9和H6亚型AIV的三重RT-PCR检测方法,并对所建方法进行特异性、敏感性及临床样品检测验证。结果表明:三重RT-PCR反应的最佳体系为2×PCR Mix 12.5μL,H9与H6亚型AIV cDNA共2μL为模板,特异性引物M-F和M-R(20pmol/μL)加入量为0.6μL,特异性引物H9-F和H9-R(20pmol/μL)及H6-F和H6-R(20pmol/μL)的加入量分别为0.7μL和1μL,用RNA-free水补足至终体积为25μL,退火温度53℃。该方法可在一个反应管内同时鉴别检测H9与H6亚型AIV,特异性强,敏感性高,可推广应用。     

H9和H10亚型禽流感病毒三重RT-PCR检测方法的建立

根据GenBank中H9和H10亚型禽流感病毒(AIV)的HA基因及所有亚型AIV M基因的保守序列,分别设计3对特异性引物,并优化退火温度和引物浓度及其配比等条件,建立了可同时鉴别检测H9和H10亚型AIV的三重RT-PCR检测方法。特异性实验结果表明,该方法可以特异性地扩增出H9、H10亚型AIV及M基因对应大小的目的条带,而对其余亚型AIV仅M基因出现特异性条带,其它禽病病原体均未扩增出任何特异性条带。敏感性实验结果表明,该方法对H9、H10亚型HA基因及M基因质粒的扩增下限均为5×10~4拷贝/μL。此外,该方法对临床样品的检测结果与病毒分离及测序结果完全一致。     

饲料和饲料添加剂中蜡样芽孢杆菌分离鉴定及其呕吐毒素基因检测

为了掌握饲料及饲料添加剂中蜡样芽孢杆菌分布及其呕吐毒素基因携带情况,从规模化饲料生产企业采集饲料及饲料添加剂样品246批。通过细菌分离、纯化、PCR检测和BD PhoenixTM-100全自动微生物鉴定系统鉴定,共分离蜡样芽孢杆菌63株,分离率为25.6%,从混合型饲料添加剂中检出4株含芽孢杆菌呕吐毒素基因,携带率为13.3%。试验结果表明,饲料和饲料添加剂中存在蜡样芽孢杆菌,尤其是含呕吐毒素蜡样芽孢杆菌污染风险。