| 鸡细小病毒NS1和VP2蛋白的原核表达及多克隆抗体制备 |
| |
| 引用本文： | 廖健淇,谢芝勋,张民秀,张艳芳,罗思思,李孟,谢志勤,谢丽基,邓显文,范晴,曾婷婷,黄娇玲,王盛.鸡细小病毒NS1和VP2蛋白的原核表达及多克隆抗体制备[J].西南农业学报,2023(2):419-426. |
| |
| 作者姓名： | 廖健淇 谢芝勋 张民秀 张艳芳 罗思思 李孟 谢志勤 谢丽基 邓显文 范晴 曾婷婷 黄娇玲 王盛 |
| |
| 作者单位： | 1. 广西大学动物科学技术学院;2. 广西壮族自治区兽医研究所/广西兽医生物技术重点实验室/农业农村部中国(广西)—东盟跨境动物疫病防控重点实验室 |
| |
| 摘 要： | 【目的】原核表达鸡细小病毒(ChPV)的NS1和VP2蛋白，制备其多克隆抗体，为深入探究ChPV蛋白结构功能及建立血清学诊断方法提供物质基础。【方法】通过合成ChPV GX-Ch-PV-21毒株的NS1和VP2蛋白基因序列，构建原核重组表达载体pET-32a-NS1和pET-32a-VP2,将测序正确的重组质粒转化至大肠杆菌transsetta感受态细胞进行原核表达，优化表达条件，以十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳和免疫印迹(Western-blotting)方法鉴定NS1和VP2蛋白的表达情况。将表达产物免疫无特定病原体(SPF)鸡获得多克隆抗体，采用酶联免疫吸附实验(ELISA)方法测定其效价，以Western-blotting和间接免疫荧光试验(IFA)对多克隆抗体进行鉴定。【结果】SDS-PAGE分析显示，NS1和VP2蛋白条带大小分别约为104和87 kD,与预期条带大小相符。对重组质粒pET-32a-VP2和pET-32a-NS1进行最佳诱导条件筛选，结果显示NS1蛋白表达的最佳诱导条件为异丙基-beta-D-硫代半乳糖吡喃糖苷(IPTG)终浓度1.0...
|
| 关 键 词： | 鸡细小病毒 原核表达 NS1蛋白 VP2蛋白 多克隆抗体 |
|
|
