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本研究以从刺葡萄克隆获得的DFR基因为目的基因,同时从质粒pCAMBIA1302中扩增获得CaMV35S启动子和NOS终止子,并利用双酶切法构建由CaMV35S启动子驱动DFR基因且带有NOS终止子的表达载体,验证测序结果显示成功构建了pCAMBIA1302-35S-DFR-NOS植物表达载体,并将该载体转化到农杆菌EHA105中。采用农杆菌注射渗透法转化烟草叶片进行瞬时表达,经鉴定,转化后的烟草叶片中能检测到GFP基因的表达。采用农杆菌介导法将该植物表达载体转化受体茉莉花愈伤组织,经多轮抗性筛选获得了转基因抗性愈伤组织,经PCR鉴定,茉莉花转基因抗性愈伤组织中检测到GFP、Hyg和DFR基因等的存在,初步证明目的基因DFR已成功整合到宿主的基因组中。茉莉花愈伤组织遗传转化体系的建立,验证了花色苷合成相关基因转化茉莉花愈伤组织的可行性,为今后通过植物转基因技术丰富茉莉花的花色奠定基础。 相似文献
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茶树花药培养植株若干株系的RAPD分析 总被引:3,自引:1,他引:2
对茶树花药培养植株 6个株系 (含母树 )进行RAPD分析 ,用 6条 10聚体的随机引物共得到 190个扩增位点 ,其中多态位点有 76个 ,占扩增出的总位点的 4 0 % ;在检测到的 4 4条谱带中 ,2 5条具有多态性 ,多态性程度达 5 6 .8% ,表明茶树花药培养植株各株系之间在DNA序列上存在着差异。进行聚类分析 ,将 6个株系划分为两个类群 ,并在DNA分子水平上进一步证实株系 4为花粉植株。 相似文献
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根据葡萄DFR基因CDS序列设计刺葡萄开放阅读框(ORF)特异引物,利用RT-PCR技术克隆获得其DFR基因序列,并通过生物信息学方法分析其生物学特性。结果表明,刺葡萄DFR基因ORF序列全长1 014bp,编码337个氨基酸,命名为Vitis davidii dihydroflavonol 4-reductase gene(VdDFR),GenBank登录号为KF915803。刺葡萄DFR蛋白预测分子量为37 593.2Da,理论等电点pI为5.81,是一个跨膜亲水蛋白,无典型信号肽,不属于分泌蛋白,并且亚细胞定位主要位于细胞质中(70%);二级结构以无规则卷曲为主(52.82%),是一种mixed类蛋白;该蛋白有潜在的7个糖基化位点和16个磷酸化位点,具有NAD(P)结合位点,有NAD依赖型的表异构酶/脱氢酶的N端结构域,属于NADB_Rossmann超家族成员。核苷酸序列分析表明,刺葡萄DFR基因与美丽葡萄、山葡萄和酿酒葡萄的同源性为99%,与圆叶葡萄同源性为98%,与显齿蛇葡萄同源性为94%,进化上比较保守,利用DFR基因编码区碱基序列所建立的系统关系树与真实的植物进化基本一致。 相似文献
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以温室种植的‘秋香’番茄健壮幼嫩侧芽为材料,研究4种不同消毒方法对番茄外植体的消毒效果,并通过继代培养,进一步研究并筛选‘秋香’番茄组织培养最佳培养基。试验结果表明:外植体消毒效果较理想的方式是10%的NaClO溶液(v/v)消毒20min,后用0.1%HgCl_2溶液(w/v)+2滴吐温20消毒3min;无菌株系建立适合的培养基为MS+BA 0.1mg·L~(-1)+IBA 0.1mg·L~(-1);继代培养适宜培养基配方为MS+BA0.1mg·L~(-1)+IBA 0.5mg·L~(-1),可以较快获得健壮的‘秋香’番茄试管苗。 相似文献
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龙眼胚性培养物APX同工酶的分析方法建立及其在龙眼体胚发生过程中的变化 总被引:1,自引:0,他引:1
以龙眼胚性培养物为材料,进行抗坏血酸过氧化物酶(APX)同工酶的聚丙烯酰胺凝胶电泳分析方法研究,建立一套适合分离龙眼胚性培养物中不同类型APX同工酶的垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳方法;进一步研究了APX同工酶在龙眼体胚发生过程中的变化,发现在胚性愈伤组织、球形胚、子叶形胚3个阶段APX同工酶存在差异. 相似文献
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