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猪传染性胸膜肺炎,是由胸膜肺炎放线杆菌引起猪的一种高度接触传染性、致死性呼吸道传染病。本病病原为胸膜肺炎放线杆菌(APP)。 相似文献
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以牛分枝杆菌ValleeⅢ株基因组DNA为模板扩增hsp65和esat6基因。采用重叠延伸剪接技术(SOE)获得了融合基因hsp65-esat6,将hsp65-esat6连接到原核表达载体pET32a(+)上,构建重组质粒pET65-E6,将其转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,以IPTG诱导(终浓度为1mmol/L),表达产物进行SDS—PAGE分析。以Ni^2+亲和层析柱纯化表达的融合蛋白和Western—blot分析该融合蛋白的免疫活性。结果表明:Hsp65-ESAT6融合蛋白以包涵体形式表达。表达的融合蛋白裂解为两部分,即58ku和30ku,二者相加与预测大小88ku相符。纯化的融合蛋白能与抗牛分枝杆菌阳性血清发生反应。 相似文献
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本研究根据金黄色葡萄球菌(Staphylococcus auretls,SA)耐热核酸酶(nut)基因、伤寒沙门氏菌(Salmonella typhi,ST)鞭毛抗原(H1-d)基因和副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)热稳定直接溶血素(tdh)基因,分别设计了三对引物Nuc-F/Nu-R、H1-d—F/H1-d—R和Tdh-F/Tdh-R,预计PCR扩增的DNA片断分别为279bp、202bp和458bp。通过对单个基因PCR和单管多重PCR扩增的特异性、敏感性分析以及对单管多重PCR扩增条件如引物浓度、退火温度和dNTP浓度等的优化,建立了快速检测金黄色葡萄球菌、伤寒沙门氏菌和副溶血弧菌的单管多重PCR方法,该方法检测的敏感性分别为:47.8PgST的基因组DNA.22.7PgSA的基因组DNA和0.3745PgVP的基因组DNA。模拟试验显示最低检测限度为分别为:SA150CFU/反应体系,ST98CFU/反应体系,VP53CFU/反应体系。表明该方法具有很好的应用价值和开发前景。 相似文献
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牛分支杆菌热休克蛋白65基因的分子克隆和表达 总被引:4,自引:1,他引:4
以牛型分枝杆菌Vallee菌株基因组DNA为模板,应用PCR方法扩增热休克蛋白65(Hsp65)基因,PCR产物经纯化与EcoRⅠ/SaⅠ双酶切后与经同样处理的原核表达载体pGEX-6P-1进行连接,转化感受态细胞BL21中,筛选和构建了原核重组表达质粒pGEX-H65,核苷酸序列测定验证其正确性.以1 Mol/LIPTG诱导,进行SDS-PAGE电泳.结果表明,Hsp65基因表达的融合蛋白GST-H65裂解为两部分;即64 kD和22 kD,两个蛋白分子量相加与预测的86 kD(HsP60 kD GST26 kD)相符.牛分支杆菌热休克蛋白HSP65的成功表达为其功能的研究打下基础. 相似文献
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副猪嗜血杆菌临床分离株耐药性与耐药机制的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
为研究副猪嗜血杆菌(HPS)的耐药性和耐药机制,本研究从临床疑似患多发浆膜炎和关节炎猪的病料样品中分离到30株致病菌,对其采用16S r RNA菌株鉴定方法和KRG琼脂扩散血清分型方法进行鉴定,并利用琼脂稀释法和PCR方法对分离株进行12种常用抗菌药物的最小抑菌浓度(MIC)测定和相应耐药基因或突变位点的检测。鉴定结果显示,30株分离株均为HPS,其血清型主要为5型(26.7%)、13型(26.7%)和不可分型(26.7%)。药物敏感性试验结果显示,30株HPS对氨苄西林、泰妙菌素、恩诺沙星和亚胺培南的耐药率较高,分别为50%、50%、46.7%和100%。利用PCR重点检测了介导喹诺酮类药物的耐药基因和基因突变情况,结果显示qnr A的检出率高达98.7%。根据MIC试验结果从中选出14株耐药性比较强的菌株,检测其gyr A/gyr B/par C/par E 4种基因的突变位点,结果显示gyr A基因突变位点主要为S83F和D87N,gyr B的突变位点均为P472G,par C的突变位点主要为L73S和A77E,par E基因的突变位点主要为R254H和A227T。本研究结果为临床选用合理抗菌药物防治HPS病提供了实验依据。 相似文献
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应用SMART技术构建猪肾上皮细胞(PK-15)酵母双杂交cDNA文库,为进一步筛选与副猪嗜血杆菌(HPS)细胞致死膨胀毒素(CDT)不同亚基蛋白相互作用蛋白奠定基础。提取PK-15的总RNA,经LD-PCR合成双链cDNA,运用SMART技术,再通过同源重组的方法,构建了PK-15细胞的酵母cDNA文库。经检测,文库滴度达到了2.8×108CFU·mL-1,插入的双链cDNA片段范围为300~1 000 bp,片段平均大小为500 bp。此文库可用于筛选与HPS CDT不同亚基蛋白相互作用的蛋白,这将为治疗靶点的选择、基因缺失弱毒活疫苗的设计提供科学依据。 相似文献
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将猪传染性胸膜肺炎放线杆菌ApxⅡ毒素的结构基因ApxⅡA克隆到原核表达载体pGEX-6P-1,并在大肠埃希氏菌中进行了表达,表达产物rApxⅡA以包涵体形式存在。为了检测rApxⅡA的免疫原性,分别用rApxⅡA、灭活疫苗以及灭活疫苗添加rApxⅡA对比利时白兔进行了免疫。免疫后进行攻毒,所用菌株分别为同型菌株(APP7型L25—4株)和异型菌株(APP1型4074株)。结果,免疫动物对相同血清型菌株的攻击获得完全保护,且对异型菌的攻击也获得一定保护作用。表明,rApxⅡA蛋白具有良好的免疫原性,作为抗原成分添加到灭活疫苗中后可提高灭活疫苗的免疫效果。 相似文献