饲喂乳酸菌对小白鼠血清中IgG及肠道中SIgA影响的研究

本试验以2株乳杆菌MG2-1、L.casei.zhang按不同剂量分别饲喂小鼠,在5、10、15、20、25、30d测定其血清中IgG及肠道内SIgA含量,结果表明饲喂不同剂量的2株菌的乳悬液均能极显著提高IgG、SIgA含量(P<0.01)。对提高IgG含量方面两菌株均表现出低、中剂量饲喂组随着饲喂时间不断增加,有超过高剂量组的趋势。在第25d时,菌株MG2-1组,中剂量组极显著的高于高剂量组,L.casei.zhang组低剂量极显著的高于中、高剂量组。而SIgA水平高剂量组比低、中剂量组高。     

Fat globule membrane of sow milk as a target for adhesion of K88-positive Escherichia coli

Membrane adhesion of K88-positive Escherichia coli was studied on intestinal brush-border membranes on 237 Finnish Landrace pigs. Forty-one per cent of the brush-border membrane preparations aggregated E. coli (positive adhesion). Similar dualism of adherence/nonadherence was observed on sow milk fat globule membranes. Washed milk fat globules (washed cream) can be used as a convenient source of material for adhesion studies. Bacterial adherence on to milk fat globules is evident as agglutination of the globules (dark-field microscopy). By this procedure the sows can be typed according to their receptor phenotype. This simple principle of fat globule agglutination due to receptors for K88-positive E. coli might be complicated by SigA-mediated bacterial adherence. Fat globule membranes were shown to contain SigA, which may act as a mediator of bacterial adherence onto fat globules. The significance of this adhesive property of milk fat globule might be to provide alternative receptors for E. coli thus preventing bacterial adhesion on to gastro-intestinal epithelium of the offspring. Sow milk fat globules can be used for typing E. coli for membrane adhesiveness. The adhesiveness of the strains showed a good correlation with the presence of the K88 antigen, as well as the hydrophobicity of the bacterial strain as determined by an association on Phenyl-Sepharose beads.     

白细胞介素2对固始鸡十二指肠黏膜免疫增强作用

以父母代固始鸡为试验材料,用添加不同剂量的白细胞介素2(IL-2)佐剂的鸡志贺氏菌苗对试验鸡进行分组免疫,应用免疫组织化学技术,通过Owin图像处理系统对鸡十二指肠内分泌型免疫球蛋白A(SIgA)阳性细胞反其分泌物的分布和阳性面积进行系统分析.结果表明,SIgA阳性细胞主要分布于十二指肠肠黏膜的固有膜及肠腺腔中,在志贺菌组中添加IL-2能够提高SIgA细胞的分泌,从而提高动物体的免疫能力,且以IL-2的添加剂量在50μg时对增加志贺菌苗的免疫性效果最佳.     

4种中药多糖对免疫雏鸡黏膜免疫功能的影响

为了探讨4种多糖增强雏鸡黏膜免疫的作用和机理.将450羽罗曼公鸡随机分成9组,14日龄用新支二联弱毒苗点眼滴鼻,同时,8个试验组分别肌肉注射高、低剂量的黄芪多糖(APS)、板蓝根多糖(IRPS)、牛膝多糖(AIRPS)和山药多糖(CYPS)溶液,对照组注射生理盐水,连续注射3 d,1次/d.于免疫后第10 d、20 d、30 d、40 d、50 d和60 d每组随机抽取5羽迫杀,刮取空肠黏液,用ELISA方法测定SIgA的含量;采盲肠扁桃体和十二指肠.用免疫组织化学法测定盲肠扁桃体和肠绒毛SIgA细胞阳性面积.实验结果表明:4种多糖均能显著提高空肠黏液中SIgA的含量和盲肠扁桃体、小肠绒毛的SIgA阳性细胞数,低剂量的APS、IRPS的效果优于高剂量的ARPS、CYPS.提示4种多糖均可以有效地增强黏膜的屏障作用,从而提高机体抗感染能力.     

抗猪SIgA单克隆抗体的研制

采用饱和硫酸铵盐析、SephadexG-200柱层析和离子交换柱层析技术，从猪初乳中提纯分泌型IgA(SIgA)。经SDS-PAGE电泳鉴定，纯化的SIgA达到电泳纯。以此纯化的SIgA，采用长程免疫法免疫BALB／c小鼠，取4次免疫后的脾细胞与SP2／0骨髓瘤细胞用PEG-1500进行细胞融合，第1次融合率为79．7％，第2次融合率为60．3％。建立间接ELISA，用于检测杂交瘤细胞上清中的单克隆抗体．初检阳性率分别为4．1％、16．8％。经2次亚克隆反复筛选获得了2株能稳定分泌抗猪SIgA单克隆抗体的杂交瘤细胞株，命名为CA6、5D4。ELISA和Western-blotting证实，所获得的单抗能特异性针对SIgA。CA6、5D4经反复冻存、复苏及多次传代，仍能分泌高效价抗体．CA6分泌抗体属IgM、κ型，而5D4分泌抗体属IgG1、κ型。     

奶牛初乳SIgA的提纯与电泳分析

为了建立提取奶牛初乳中SIgA的方法，本试验取分娩当日的奶牛乳汁，经10000 r/min离心10min，0.2mol/L（PH=6.0）PBS透析，上清液加0.06 mol/L硫酸锌处理后，调PH值为6.8-6.9，加入饱和硫酸铵，取沉淀溶于水，并在0.02mol/L（PH=8.0）PBS中透析至无NH4+，样品浓缩后上DEAE Sepharose (Fast Flow)柱，用0.02mol/L（PH=8.0）至0.3mol/L（PH=8.0）PBS梯度洗脱；收集峰蛋白上葡聚糖凝胶-200层析柱，用0.01mol/L（PH=7.4）PBS洗脱；收集出现蛋白峰的洗脱液，经SDS-PAGE电泳鉴定，为SIgA单体。经初步测定奶牛初乳中SIgA含量为3.47mg/ml。本试验已成功建立提取奶牛初乳中SIgA的方法。     

鸡SIgA的纯化及兔抗鸡SIgA抗体的制备

采用改良硫酸铵盐析法从鸡胆汁中分离鸡分泌型免疫球蛋白A(S IgA),M acro-prep H igh Q阴离子交换柱层析提纯,经二次过柱后获得的鸡S IgA浓度达22 m g/mL。SDS聚-丙烯酰胺凝胶电泳检测表明,重链分子质量为63~64 ku,轻链为26~28 ku,J链约16 ku。用纯化的鸡S IgA免疫兔,所得的抗血清经双向琼脂扩散,证明兔抗鸡S IgA血清效价达1¨128。     

生长抑素亚单位苗对鸡粘膜免疫的影响

在肌肉注射生长抑素 (SS)亚单位苗的基础上应用鸡新城疫弱毒苗进行消化道粘膜免疫鸡 ,显示和检查小肠粘膜中免疫球蛋白A (SIgA)阳性细胞和上皮内淋巴细胞 (iIEL)数量的变化。结果表明 ,应用SS亚单位苗首免后第 3周和第 4周 ,十二指肠中iIEL数量比对照组均显著增加(P <0 0 5) ;首免后第 3周 ,十二指肠、空肠和盲肠扁桃体中SIgA阳性细胞比仅用新城疫弱毒苗免疫组极显著增加 (P <0 0 1 ) ;首免后第 4周 ,十二指肠和空肠中SIgA阳性细胞比仅用新城疫弱毒苗免疫组极显著增加 (P <0 0 1 )。提示SS可抑制小肠粘膜中SIgA阳性细胞和iIEL的分化和增殖。SS亚单位苗可中和体内SS ,作为粘膜免疫促进剂预防家禽传染病     

鸡SIgA的提取鉴定及其抗体制备

实验采用饱和硫酸铵法从健康肉鸡胆囊收集的胆汁中粗提二聚体SIgA,继而透析粗提产物除盐,然后进行纤维素DEAE-52离子交换层析,使用紫外分光光度计测定收集液的蛋白浓度,对层析产物浓缩使其浓度≥2.0 mg/m l,最后使用SDS-PAGE进行鉴定,从电泳所得图像中可以看到清晰的两个条带,一个条带分子量在67~70 ku之间为重链,另一个条带在26~28 ku之间为轻链。进一步将纯化的鸡SIgA抗体免疫健康兔,制备得到兔抗鸡SIgA抗体。     

黄芪多糖对新支二联疫苗免疫雏鸡的免疫调节作用

为探讨黄芪多糖(APS)对免疫雏鸡的免疫调节作用和机理,本研究将150羽14日龄罗曼公鸡随机均分成3组,用鸡新支二联疫苗(ND-IB)免疫的同时,2个试验组分别肌肉注射高、低剂量的APS溶液,对照组注射生理盐水,每天1次,连续3d。免疫后第10d～60d,每隔10d每组随机取10只鸡,用微量法测定血清中抗新城疫病毒血凝抑制(HI)抗体效价;每组随机取5只鸡,用流式细胞双染色法检测外周血CD3+、CD3+CD4+和CD3+CD8+淋巴细胞百分数,用ELISA方法测定空肠黏液中SIgA的含量,用免疫组织化学法测定盲肠扁桃体和十二指肠绒毛中SIgA阳性细胞数。结果显示,APS组的HI抗体效价、CD3+淋巴细胞数、CD4+/CD8+比值、SIgA的含量和SIgA阳性细胞数都明显高于对照组,且低剂量的APS的效果优于高剂量。本实验表明合适剂量APS对ND-IB疫苗的免疫效果有明显的增强作用。