长毛兔金黄色葡萄球菌的分离鉴定

从内蒙古包头市某养殖场患有肺炎的病兔分离到一株革兰氏阳性球菌,通过形态学观察和生化试验进行了初步鉴定,并通过16S rRNA序列扩增和测序进行分析,BLAST分析结果显示,该菌与金黄色葡萄球菌的核酸序列同源性达99.6%,确定该分离菌株为兔金黄色葡萄球菌,并将其命名为BTSH1。     

一株具有广谱抗菌性的海洋微生物的筛选与鉴定

为了分离出广谱抑菌的海洋微生物,试验以北冰洋沉积物为样本,采用涂布平板法分离海洋微生物单菌落,以9种致病菌(大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、弧菌、铜绿假单胞菌、沙门氏杆菌、肺炎克雷伯菌、屎肠球菌、鲍曼不动杆菌)为指示菌,进行抑菌试验及抑菌谱的研究;通过形态学特征、生理生化特征和16S rDNA测序对抑菌效果最好的海洋微生物进行鉴定。结果表明:共分离得到100个单菌落,除去菌落形态相同的菌株,共分离得到40株分离菌。从待测的40株菌株中筛选出1株抑菌效果最好的菌株(26号菌株),根据形态学特征、生理生化特征和16S rDNA测序结果鉴定为地衣芽孢杆菌,该菌株对大肠杆菌、沙门氏杆菌、弧菌表现为高敏,金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌表现为中敏。说明26号菌株对畜禽养殖过程中常见的致病菌——大肠杆菌、沙门氏杆菌、金黄色葡萄球菌都表现出较为明显的抑菌效果,具有作为饲料添加剂中益生菌的可能性。     

猪粪便中致病性病原菌检测与耐药性分析

为了检测猪粪便中的致病微生物并分析其耐药性,试验采用细菌分离培养、生化试验、16S rRNA PCR检测与测序、致病性试验等方法对从镇江地区不同养猪场采集的100份粪便样品进行病原菌鉴定,采用K-B药敏纸片法测定致病性病原菌的耐药性。结果表明:从100份粪便样品中分离得到大肠杆菌25株、沙门氏菌17株、金黄色葡萄球菌15株,其中致病性大肠杆菌20株,致病性沙门氏菌15株,致病性金黄色葡萄球菌10株;分离菌16S rRNA PCR扩增得到大小约为1 492 bp的目的条带;57株分离株的PCR产物测序结果与GenBank中参考株基因序列的同源性高于97.0%;致病性大肠杆菌对阿莫西林、环丙沙星、磺胺间甲氧嘧啶等12种药物的耐药率在65.0%～95.0%之间,致病性沙门氏菌对阿莫西林、氟苯尼考、庆大霉素等12种药物的耐药率在46.7%～100%之间,致病性金黄色葡萄球菌对阿莫西林、庆大霉素、氟苯尼考等9种药物的耐药率在50.0%～100%之间,且存在多重耐药性。     

奶牛关节炎病原菌的分离与鉴定

为避免奶牛关节炎对牛场造成巨大经济损失,采集患病奶牛关节积液,应用胰蛋白胨肉汤琼脂分离培养病原菌,随后通过形态学方法、生化试验和PCR扩增16S rRNA基因片段及TA克隆测序对其进行鉴定.结果显示,该菌在血琼脂上产生明显的β溶血;光镜下可见该菌个体为单个或短链状排列的革兰氏阳性球菌;该菌七叶苷、麦芽糖、蔗糖、葡萄糖、过氧化氢酶试验均为阳性,对头孢唑啉、恩诺沙星、环丙沙星、氨苄西林、链霉素、氯霉素、新霉素、头孢吡肟8种抗生素敏感,对四环素、红霉素、强力霉素、阿米卡星4种抗生素耐药;该菌与金黄色葡萄球菌核苷酸同源性为91%,但与肉葡萄球菌核苷酸同源性为92%.依据该菌株16S rRNA基因片段测序结果,并结合生物学特性分析,初步将分离菌株鉴定为葡萄球菌属的细菌.本试验结果可为该牛场确诊和防治关节炎提供必要的试验依据.     

一株乳酸杆菌的分离鉴定及其体外抑菌和抑制伪狂犬病毒增殖的研究

旨在研究乳酸杆菌能够抑制一些病原菌生长和抗病毒方面的作用,为制备乳酸杆菌类微生态制剂提供参考。本试验从泡菜中分离出乳酸杆菌,通过革兰染色镜检、生化试验以及对菌株16S rRNA基因序列进行分析,鉴定分离细菌为植物乳酸杆菌(Lactobacillus plantarum),对分离到的菌株采用琼脂扩散法,以大肠杆菌、沙门菌、金黄色葡萄球菌为指示菌检验其抑菌效果;利用荧光定量方法检验其对伪狂犬病毒的抑制作用。结果表明分离的植物乳酸杆菌(Lactobacillus plantarum)对大肠杆菌、沙门菌、金黄色葡萄球菌有较高的抑制作用,抑菌圈直径平均分别为18. 3 mm、18. 0 mm、19. 0 mm;荧光定量方法检验其具有一定的抗伪狂犬病毒活性作用,抑制病毒复制作用明显。综上表明,分离的乳酸杆菌抑制大肠杆菌、沙门菌、金黄色葡萄球菌以及伪狂犬病毒效果明显,丰富了乳酸杆菌资源,同时为其在微生态制剂中的应用及功能性产品的生产提供依据。     

流产奶牛胎儿肺炎克雷伯氏菌的分离与鉴定

从流产奶牛胎儿组织中分离到1株革兰氏阴性短杆菌,采用细菌分离纯化、生化试验、16S rRNA和16S～23S rRNA测序、药敏试验和小鼠致死性试验对其进行了鉴定。结果显示,该分离菌与GenBank中肺炎克雷伯氏菌16S rRNA和16S～23S rRNA基因序列一致性分别高达99%和96%,16S～23S rRNA基因被扩增出3条不同长度条带;该菌生化特性均符合肺炎克雷伯氏菌的生化反应特性;对头孢曲松、阿米卡星、多粘菌素等敏感,对多西环素、四环素、卡拉霉素等中度敏感,对青霉素、红霉素、米诺环素等耐药;对小鼠有很强的致病性。以上结果表明,该分离细菌为肺炎克雷伯氏菌。     

某蛋鸡场金黄色葡萄球菌和沙门菌的分离鉴定及药物敏感性分析

为了解某蛋鸡场金黄色葡萄球菌和沙门菌对抗菌药物的耐药情况,采集重庆市某蛋鸡场48份羽毛样品、123份肛拭子样品,将羽毛样品经MH高盐培养液增菌后划线接种于MH高盐平板,将肛拭子样品经沙门菌增菌液增菌后划线接种于S.S.平板。将疑似菌落接种LB液体培养基培养后提取基因组,PCR扩增金黄色葡萄球菌特异性nuc基因和沙门菌特异性invA基因片段。对分离鉴定的金黄色葡萄球菌和沙门菌进行药物敏感性试验。最终共分离鉴定出9株金黄色葡萄球菌、6株沙门菌。药敏试验结果表明,分离的金黄色葡萄球菌和沙门菌耐药严重,且存在多重耐药。本研究基本摸清了该蛋鸡场金黄色葡萄球菌和沙门菌对常见抗菌药物的敏感性,为该蛋鸡场的临床用药提供了参考。     

种鸡场空舍期禽舍空气中金黄色葡萄球菌的分离鉴定及耐药性分析

为了解种鸡场空舍期禽舍空气中金黄色葡萄球菌的耐药性情况,采用自然沉降法对山东省某大型种鸡场空舍期空气中金黄色葡萄球菌用Baird-parker培养基进行分离,得到一株细菌,通过培养特性、染色镜检及生化特性对分离菌株进行鉴定,用PCR法扩增16S rRNA基因片段,克隆测序,进行BLAST比对,并用30种常用抗菌药物对分离菌株进行药敏试验。结果表明:分离菌株在BP培养基上有金黄色葡萄球菌的典型菌落特征;染色镜检呈革兰氏阳性葡萄球菌的特性;生化特性试验符合金黄色葡萄球菌特性;与金黄色葡萄球菌的16S rRNA基因序列同源性达99.7%,确定其为金黄色葡萄球菌;分离菌株对氨基糖苷类、β-内酰胺类、大环内脂类和喹诺酮类抗生素产生耐药性,对青霉素的抑菌圈直径为0,呈现完全耐药。说明养禽场空舍期消毒后空气中存在金黄色葡萄球菌,该菌株呈现一定的耐药性;试验结果可以为规模化种鸡场抗菌药物和消毒剂的使用提供依据。     

兔葡萄球菌的分离与鉴定

为了确定重庆市某兔场洪灾后母兔发生化脓性疾病的病原及筛选敏感的药物,试验进行了细菌分离培养、染色镜检、生化试验、血浆凝固酶试验、动物接种试验、16S rRNA基因扩增及测序、药物敏感试验。结果表明:分离的病原菌是金黄色葡萄球菌,其基因序列与金黄色葡萄球菌的同源性高达99%;分离菌对氨苄西林、先锋Ⅴ、菌必治、氨苄西林/舒巴坦高度敏感。     

鼻炎症状兔的细菌感染情况调查与分析

文章对山东省某兔场的25只临床鼻炎症状家兔进行了细菌带菌情况调查,并对分离出的细菌进行了16S rRNA基因测序和耐药情况检测。结果表明:从临床病例中分离出151株细菌,经过16S rRNA测序鉴定,分别为大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、奇异变形杆菌、鲍曼不动杆菌、波氏杆菌、枯草芽孢杆菌、多杀性巴氏杆菌以及绿脓杆菌等;药敏试验结果显示,所有检出菌对红霉素、磺胺异噁唑的耐药率最高,其次为阿奇霉素和庆大霉素,阿米卡星的耐药率最低。     

鹅源金黄色葡萄球菌分离鉴定及其诊治分析

为确诊昆明市东川区某养鹅场疑似葡萄球菌感染鹅群的致病原因,采集发病鹅的脑组织、肿胀关节脓液及肝脏等病料进行细菌分离鉴定。结果显示,从病料中分离到1株细菌,分离菌在普通营养琼脂平板上形成光滑、湿润、无色、表面凸起的圆形菌落,在血琼脂平板上能产生β溶血,镜检呈革兰氏阳性葡萄串状;生化鉴定结果符合金黄色葡萄球菌反应特征;分离菌16S rRNA扩增序列分析表明,其匹配度最高的均是金黄色葡萄球菌各株系的16S rRNA序列,综合研判分离菌株为鹅源金黄色葡萄球菌。药敏试验显示,该菌株对头孢噻肟、阿米卡星等敏感,对强力霉素、庆大霉素等中度敏感,对氨苄西林、大观霉素等具有耐药性;该分离菌株接种试验小鼠具有较强的致病性。结果表明,金黄色葡萄球菌是引起该场鹅群感染的致病因素之一,该分离菌对多种抗菌药具有耐药性,应引起重视。研究结果为该地区鹅病的临床诊治提供参考。     

兔葡萄球菌的分离与鉴定

对重庆市某兔场洪灾后发生化脓性疾病的母兔进行了病原诊断,通过细菌分离培养、染色镜检、生化试验、血浆凝固酶试验、动物接种试验、16S rRNA基因扩增及测序,证明本菌是金黄色葡萄球菌,其基因序列同源性与金黄色葡萄球菌高达99%。药敏试验结果表明,本菌对氨苄青霉素、先锋Ⅴ、菌必治、氨苄青霉素/舒巴坦高度敏感。兔场立即选用敏感的药物,并结合综合防治措施,使疫情得到有效控制。     

新疆巴州地区某规模化奶牛场致奶牛隐性乳腺炎金黄色葡萄球菌的分离鉴定

为了解新疆巴州地区金黄色葡萄球菌在奶牛隐性乳腺炎中所起的作用,实验对巴州地区某规模化奶牛场患隐性乳腺炎奶牛的乳样进行金黄色葡萄球菌分离,通过形态学特征观察、生化特性鉴定、16S rRNA鉴定,结果表明此奶牛场隐性乳腺炎的患病率为14.5%,最终确定13株分离菌均为金黄色葡萄球菌,占样本数的7.1%(13/184)。该结果为巴州地区金黄色葡萄球菌性奶牛隐性乳腺炎防治提供了科学依据。     

一例鸡源金黄色葡萄球菌的分离鉴定与耐药性分析

采集关节肿胀、关节囊内有浆液性渗出物患病鸡肝脏及骨髓进行细菌分离,对分离菌进行形态学观察、革兰氏染色、生理生化试验、PCR鉴定、16S rDNA序列测定和药敏试验。结果从病鸡样品中分离出一株在普通琼脂平板上形成湿润、表面光滑、隆起的圆形菌落,菌落在血琼脂平板上能产生β溶血;分离菌为革兰氏阳性,符合金黄色葡萄球菌生化培养特性;PCR检测结果显示金黄色葡萄球菌的耐热核酸酶基因呈阳性,细菌16S rDNA核酸序列Blast比对结果显示为金黄色葡萄球菌;分离菌对阿莫西林、四环素、青霉素G、氯霉素、复方新诺明和氨苄西林具有耐药性。结果为云南鸡源金黄色葡萄球菌病的临床诊断和防治提供了依据。     

15株禽源沙门菌的分离鉴定与耐药性试验

本试验旨在对沙门菌临床分离株进行鉴定及其耐药性进行研究。通过收集2012年2月-7月间具有典型沙门菌病病变特征的病例,无菌采集病死禽的肝脏、心、卵巢等脏器接种血清营养琼脂培养基,以麦康凯琼脂培养基纯化分离菌,并检测其生化特点,16S rDNA基因测序法快速鉴定分离菌株,然后进一步鉴定血清型;同时用15种抗菌药物进行药敏试验。结果显示,有15株细菌在麦康凯琼脂培养基上为无色、透明的菌落,能利用葡萄糖、甘露醇,不发酵乳糖、蔗糖,符合沙门菌的生化特性。同时,15株沙门菌的16S rDNA序列分析结果显示,分离株的同源性达到97%以上。15株沙门菌的血清学试验结果显示,有7株鼠伤寒沙门菌、5株伤寒沙门菌、2株肠炎沙门菌、1株鸡白痢沙门菌。药敏试验结果显示,分离细菌对链霉素、萘啶酸、强力霉素和美洛西林耐药率高。     

獭兔源铜绿假单胞菌的分离鉴定及药敏试验

为了确定某獭兔养殖场獭兔发病的主要病原菌,分析该病原菌的耐药性,本试验对青岛市某獭兔养殖场送检的病死兔进行病理剖检,并从肺脏中分离得到1株细菌,随后进行分离菌形态观察、生化试验、细菌16S rRNA基因测序。该株分离菌为革兰阴性杆菌,博检革兰阴性细菌鉴定系统的生化鉴定结果为铜绿假单胞菌,细菌的16S rRNA基因序列经同源性比较,与铜绿假单胞菌同源性为100%。药敏试验结果表明该株分离菌对多种头孢类、喹诺酮类药物高度敏感。细菌分离鉴定和药敏试验结果为临床用药治疗该病提供参考依据。     

奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌的分离鉴定及药敏试验

[目的] 了解泰州市某奶牛场乳房炎中金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）感染情况及其对常用药物的敏感性。[方法] 试验选用Baird-Parker培养基分离、生化鉴定、PCR检测等方法,对采集的9份奶牛乳房炎奶样进行分离鉴定和药敏试验。[结果] 共分离到6株葡萄球菌,进一步通过凝固酶试验和16S rDNA测序等方法鉴定其中3株为金黄色葡萄球菌。药敏试验结果显示,3株金黄色葡萄球菌对青霉素G均耐药,2株对四环素耐药,2株对红霉素和苯唑西林表现为中介。[结论] 该次分离的金黄色葡萄球菌主要对青霉素G和四环素耐药,对其他常用抗生素表现为敏感。     

大肠埃希菌PCR检测方法的建立与应用

为建立一种快速检测动物大肠杆菌病的方法,基于大肠埃希菌16S~23S rRNA基因序列分析,利用Premier 5.0软件设计并合成了一对特异性引物,建立了可检测16S~23S rRNA基因的PCR检测方法,通过反复试验确定了最佳PCR反应体系和反应条件,并评估了此方法的灵敏性和特异性。同时应用该方法对临床病料进行检测,检测结果与生化试验鉴定结果的符合率为100%。说明该方法具有良好的特异性和敏感性,与细菌分离培养、生化鉴定方法相比较有效降低了检测时间,提高了检测效率。     

鸭疫里默氏杆菌巢式PCR检测方法的建立

为建立一种更加准确、敏感的鸭疫里默氏杆菌检测方法,根据鸭疫里默氏杆菌16S rRNA基因序列设计2对巢式PCR引物,在完成最佳反应条件筛选、特异性、敏感性、重复性试验的基础上,建立巢式PCR检测方法.结果表明,建立的巢式PCR对1、2、10、X型鸭疫里默氏杆菌的16S rRNA都能扩增出特异性片段,而对大肠杆菌、多杀性巴氏杆菌、沙门菌、鸭源金黄色葡萄球菌的基因组不能扩增出特异性片段,DNA最小检测量为0.392 fg/μL,是常规PCR的1 000倍.该巢式PCR方法具有快速、敏感、特异、通用的优点,可用于鸭疫里默氏杆菌感染的检测、分子流行病学调查和分离菌株的快速鉴定.     

羊源肺炎克雷伯氏菌的分离与鉴定

本研究通过病死羊的肺脏中进行细菌分离、形态学观察、生化试验、致病性试验、药敏试验和16S rRNA扩增。结果从肺中分离到1株具有致病性的革兰氏阴性短杆菌。生化试验鉴定结果符合肺炎克雷伯氏菌的特征。分离株对头孢噻肟、阿米卡星、头孢曲松和链霉敏感外,对强力霉素等12药物具有耐药性。16S rRNA测序结果分析显示分离株与肺炎克雷伯氏菌的核苷酸同源性为97.1%~99.0%,在核苷酸进化树上与肺炎克雷伯氏菌属于同一分支。结果表明本研究从病死羊的肺脏中分离到1株肺炎克雷伯氏菌。