伊氏锥虫TR酶的初步研究

国外研究者已报道在布氏锥虫、枯氏锥早、刚果锥虫中发现了存在ＴＲ酶，此酶是锥虫代谢的重要酶之一。伊氏锥虫ＴＲ酶研究的尚属空白。本研究目的是为了确定伊氏锥虫中是存在ＴＲ酶。我们利用分光光度法测出了伊氏锥虫中有ＴＲ酶活性，但无ＧＲ酶活性，测出了ＴＲ酶的Ｋｍ和Ｖｍ值；发现了治疗锥虫药物安锥赛和盐酸锥双对ＴＲ酶有抑制作用，抑制率分别达２８％和３１％；比较了七株中国伊氏锥虫和布氏锥虫敏毫克蛋白中ＴＲ酶活力，其     

伊氏锥虫、马媾疫锥虫、布氏锥虫、刚果锥虫的18S rDNA部分序列测定与系统发育关系

对伊氏锥虫（Trypanosoma evansi）：新疆株（XJCA）、湖北株（HBM）、云南株（YNB）、广东株（GDB2）；马媾疫锥虫（Trypanosoma equiperdum）、布氏锥虫（Trypanosoma brucei）、刚果锥虫（Trypanosoma congolense）提取基因组DNA，根据已报道的伊氏锥虫株18SrDNA基因序列设计合成引物，用PCR扩增了锥虫虫株基因组DNA,伊氏锥虫新疆株、湖北株、云南株、广东株、布氏锥虫、刚果锥虫均为373bp的片段；马媾疫锥虫为372bp的片段，PCR产物经电泳鉴定后用试剂盒回收纯化，纯化后PCR产物经连接、转化后测序，将测得的序列用DNAMAN软件分析并与国外已发表的相应序列进行了同源性比较，并绘制了系统发育进化树。结果与国外AJ009153、AJ223564、D89527株同源性达到99％～100％，与另外11株同源性75％。本研究为锥虫分子流行病学研究及分类研究打下基础。     

锥虫的抗药性

锥虫是人畜共患的寄生虫，主要分布在亚洲、非洲和拉丁美洲广大地区，锥虫病也是我国主要家畜寄生虫病之一，曾造成大批牛、马、骆驼发病死亡，防治锥虫病一向靠药物，长期使用药物后锥虫逐渐产生了抗药性，国外对这个问题早有发现，迄今已发表有关论文数百篇。国内注意较晚，于1988年在上海举行的以英法专家为主的国际性学术报告会上，云南畜牧兽医总站李松柏第一次公开谈到这个问题，他报道在云南省发现常用抗锥虫药按厂方推荐剂量已难于治愈家畜伊氏锥虫病，必须加倍剂量才能有效。1991年沈杰等报道，用小白鼠试验表明，抗锥虫特效药安推…     

低温状态下伊氏锥虫的放射性核素标记及测定

为了明确伊氏锥虫在低温状态下是否仍有代谢活动，在-20℃和-80℃条件下，在伊氏锥虫保存液中添加3H-TdR活锥虫样品和未添加3H-TdR活锥虫样品，用液闪计数器测定保存的锥虫体内CPM值。结果，添加3H-TdR的活锥虫样品与未添加3H-TdR的活锥虫样品CPM值差异非常显著（P＜0．01），在保存液中添加3H－TdR的活锥虫样品与死锥虫样品的CPM值差异也非常显著。说明3H-TdR渗入到活锥虫体内，在低温条件下伊氏锥虫仍有代谢活动。     

锥虫抗药性机制的研究进展

为了较全面地了解锥虫抗药性机制的研究进展,综述了国内外有关报道。锥虫抗药性形成的机制主要表现在三方面,即锥虫体内酶的活性（或含量）发生变化,抗药株虫体的苹果酸酶、锥虫硫酮还原酶或鸟氨酸脱羧酶等酶的活性明显升高;锥虫细胞膜上的特异载体,即细胞膜上转运腺苷酸和腺苷的Ｐ２载体发生改变,药物进入虫体受阻;虫体的抗药基因被激活或基因发生重组、突变或扩增。本文还总结了锥虫抗药性机制研究中存在的问题及今后的研究     

伊氏锥虫和媾疫锥虫蛋白组分的电泳分析

应用SDS—PAGE和IEF电泳对伊氏锥虫和媾疫锥虫的蛋白组分进行了分析.在SDS—PAGE中,伊氏锥虫有21条带.媾疫锥虫有19条带,两种虫体的蛋白质区带在分子量40000～90000之间存在差异,尤其表现在表面糖蛋白上,伊氏锥虫为43000,媾疫锥虫为60000.在IEF电泳中,伊氏锥虫出现26条带,媾疫锥虫出现33条带,两种虫体的蛋白质区带在等电点4.8～5.6之间相同,而在5.6～7.0之间存在差异.本实验还对马媾疫锥虫的蛋白质进行了双相电泳分析,显示出86个多肽斑点.     

媾疫锥虫、伊氏锥虫差异抗原的分离鉴定

以50％饱和硫酸铵沉淀的兔抗伊氏锥虫高免血清球蛋白制备琼脂糖-4B免疫吸附柱,对马媾疫锥虫超声全虫可溶性抗原进行反亲和层析免疫吸附。当抗原量在抗体吸附范围内时,最先洗脱下来的成分即为媾疫锥虫特异性抗原(差异抗原)。该抗原与媾疫锥虫血清抗体反应较强,与伊氏锥虫血清抗体反应较弱,经SDS-PAGE检测,其为分子量大于68000的大分子蛋白。     

伊氏锥虫与小鼠细胞的粘附反应研究

本文探讨了伊氏锥虫在体外与小鼠淋巴细胞、巨噬细胞和上皮细胞间的粘附反应。结果表明，三种健康细胞与锥虫有不同程度的粘附性，不同个体来源的细胞的粘附反应存在差异，但是，各类细胞的粘附率之比基本稳定。动物受到感染后，粘附细胞数大幅度减少。人α－干扰素可以促进健康细胞以及受感染动物细胞与锥虫的粘附性。细胞粘附水平高的个体在疾病的后期表现有较强的耐受力。作者认为，小鼠多种细胞表面存在着伊氏锥虫的病原性受体，后者与动物的抗锥虫感染能力以及疾病发生都有明显相关性。     

伊氏锥虫不同虫株免疫保护试验

伊氏锥虫在我国流行面广，因而地理株众多。在进行免疫诊断时，已发现用某株锥虫制成的抗原对其他株锥虫病的诊断出现敏感性和特异性不均一的现象［’1。王祥生等用异种锥虫进行了交叉兔疫试验’‘’。有关不同株锥虫之间交叉免疫保护试验，还未见有人研究，本试验对此作了初步探讨。材料与方法】．虫株新疆骆驼株（XJCA）和安徽水牛株（AHB）均为本实验室液氮保存。2．试验动物昆明系小白鼠30只，体重20g左右，雄性。购自上海医科大学实验动物中，乙。3．抗原制备保存于液氮中锥虫取出复苏后经小白鼠继代，大白鼠扩增后，按an－ham等（1…     

伊氏锥虫抗原变异规律

国内外已有众多文章报道了伊氏锥虫表面抗原变异现象的特点，但均较零散，本文将这些报道进行分析综合，从中找出共同点，归纳出伊氏锥虫抗原变异的一些规律，计有伊氏锥虫抗原变异的频率、抗原变异的程序、变异体的数量、优势变异体和非优势变异体，伊氏锥虫感染动物后第一次发生抗原变异的时间和特点等，作者并对尚需继续探索的有关规律性的研究内容也提出了看法。     

人血清中伊氏锥虫溶虫活性因子的鉴定

将伊氏锥虫在体外与人血清一起培养，虫体出现渐进性水肿，由蝌蚪形变成环形，最后崩解。将人血清注入感染鼠体内，可以清除体内虫体，使感染鼠得到保护。人血清对接种１０３个锥虫感染鼠的最小保护剂量为０．２ｍＬ，感染后５ｄ注入人血清，血中虫体数量逐日下降，至第１０天全部消失。对体外伊氏锥虫不同变异株，人血清均有同样的溶虫效果。经ＤＥＡＥ层析和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２００过滤后，人血清中只有富ＩｇＭ的Ｆ－１有溶虫活性，而富ＩｇＧ的Ｆ－２和富ＨＤＬ的Ｆ－３均无溶虫活性，表明人血清对伊氏锥虫的溶虫活性与ＩｇＭ类天然抗体有关。另外，去补体的人血清体外溶虫活性明显减弱，而体内保护仍然有效。     

伊氏锥虫单一或混合抗原免疫小鼠保护性试验

采用广东克隆（广东水牛伊氏锥虫单虫克隆）、安徽克隆１（安徽水牛伊氏锥虫单虫克隆）、安徽克隆２、新疆克隆（新疆骆驼伊氏锥虫单虫克隆）作单一抗原或混合抗原免疫小鼠试验。用安徽克隆１和新疆克隆单一抗原免疫小鼠，再用相应同株克隆攻击，其保护率在８０％以上，而用异株克隆攻击（安徽克隆１、新疆克隆或广东克隆），保护率低于１７％，表明安徽、新疆和广东伊氏锥虫各株间免疫原性存在差异。用新疆克隆抗原和安徽克隆２抗原混合免疫，再用新疆克隆和安徽克隆２攻击，保护率在８０％以上，用新疆克隆抗原和广东克隆抗原混合免疫，再用新疆克隆和广东克隆攻击，保护率亦在８０％以上，且在免疫后１～２个月仍有效。对新疆克隆抗原和广东克隆抗原混合免疫小鼠脾细胞作体外增殖试验，用不同抗原按５００ｍｇ／Ｌ和１２５ｍｇ／Ｌ高低２种剂量刺激，均产生明显增殖，表明各锥虫抗原存在免疫交叉，但在高剂量组，用同株克隆的刺激增殖效果（ＳＩ）高于异株克隆。     

锥虫的表面包被

锥虫的表面包被李国清，沈永林（南京农业大学动物医学系）锥虫的体表覆盖一层致密的表面包被，由基本一致的可变糖蛋白分子（ｒａｒｉａｂｌｅｓｕｒｆａｃｃｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ，即ＶＳＧ）所组成，占细胞总蛋白约５％～１０％。这层包被对于锥虫在宿主体内的存活...     

伊氏锥虫安锥赛抗药性相关基因-TbTA1的分析

为探讨伊氏锥虫对安锥赛抗药性的分子机理，以布氏锥虫对砷剂药物抗药性相关的TbTA1基因设计引物，以55℃、57℃、60℃、63℃和65℃不同退火温度，分别从伊氏锥虫敏感株的cDNA和基因组DNA中扩增出TbTA1基因的全长序列，但是从安锥赛抗药株伊氏锥虫的cDNA和基因组DNA中都未扩增出TbTA1基因，这表明基因TbTA1可能与伊氏锥虫安锥赛抗药性的产生有关。伊氏锥虫与布氏锥虫的，TbTA1基因序列比较，它们有10个碱基不同，即第88位的G（T.e）-A（T.b）、第144位的T（T．e）-C（T．b）、第224位的C（T．e）-T（T．b）、第471位的C（T.e）-T（T.b）、第472位的A（T．e）-G（T.b）、第549位的G（T．e）-T（T．b）、第1008位的C（T．e）-T（T.b）、第1033位的A（T．e）-G（T．b）、第1293位的A（T．e）-G（T．b）和第1384位的T（T．e）-C（T．b），其中有5个碱基所编码的氨基酸不同，即Val^30（T.e）Ile（T．b）、Ala^75（T．e）-Val（T．b）、Ile^158（T．e）-Val（T．b）、Thr^345（T．e）-Ala（T．b）和Ser^462（T.e）-Pro（T．b），这表明伊氏锥虫与布氏锥虫的TbTA1差异可能是它们的种间差异。     

伊氏锥虫不同株的表面变异糖蛋白提取和重要特性比较

抗原变异是锥虫的重要特征，主要表现于锥虫表面变异糖蛋白（VariableSurfaceGlycoprotein，VSG）的变化，而且锥虫的VSG变异非常频繁，国外对布氏锥虫的VSG研究较多，对中国伊氏锥虫的VSG，杨汉春［1］、李国清等［2］曾作过分离和生化分析，但对中国不同地理宿主株VSG的分离比较尚无报道。而我国北方新疆骆驼伊氏锥虫和南方牛、马伊氏锥虫存在来源、地理、宿主和生化特性的变异[3,4]，我们对这两个虫株的VSG进行了分离、纯化和特性比较研究，以期为伊氏锥虫的抗原变异和伊氏锥虫病的防治研究提供依据。1材料与方法1．1材料和试剂…     

锥虫变异抗原基因的分子生物学

锥虫是单细胞的真核生物,种类很多.寄生于哺乳动物的锥虫,从地域上讲有非洲锥虫、亚洲锥虫和美洲锥虫;从传播方式上讲有唾液传播锥虫(含机械传播锥虫)和粪便传播锥虫.非洲和亚洲锥虫多为唾液传播锥虫,美洲锥虫主要是粪便传播锥虫.能够在哺乳动物体内进行抗原变异的是唾液传播锥虫.唾液锥虫寄生于宿主血液之中,也存在于宿主其他部位,如马媾疫锥虫寄生于马、驴的生殖系统.大部分种类的唾液锥虫能够在昆虫体内发     

锥虫的抗原变异研究进展

二十世纪初，寄生虫学家就注意到，感染锥虫后的动物，早期阶段出现连续的虫血症波动现象，而且各虫血症期具有不同的抗原群体锥虫。此后，用克隆群体的锥虫接种到实验动物身上，发现单个锥虫也具有不断改变抗原而逃避宿主兔疫的能力，这就是锥虫一个重要的生物学特性——抗原变异现象。锥虫可以在实验动物身上继代，同样产生抗原变异，这为实验室研究提供了可能；锥虫的冷冻保藏和体外培养技术的建立，使抗原变异的研究更加方便；现代科学技术特别是免疫学和分子生物学的迅速发展，将锥虫抗原变异的研究不断推向深入，不仅对控制推虫病十分…     

12株中国伊氏锥虫对苏拉明的药敏试验

用体外培养生长抑制试验检测了中国伊氏锥虫安徽水牛株（AHB）、广东阳江水牛株（GDB1）、广东水牛株（GDB2）、广东马株（GDH）、广西骡株（GXM）、湖北骡株（HBM）、湖南水牛株（HNB）、江苏高邮水牛株（JSB1）、江苏盱眙水牛株（JSB2）、新疆骆驼株（XJCA）、云南水牛株（YNB）、浙江水牛株（ZJB）对苏拉明的敏感性。它们的50％生长抑制浓度（IC50）依次为0．114、0．041、0．120、0．1490．752、0．252、0．171、0．127、0．339、0．094、0．106、0．118ng/L。结果显示，不同虫株的伊氏锥虫对苏拉明的敏感性明显不同，提示中国伊氏锥虫不同虫株存在抗药性差异。在12株伊氏锥虫中，GXM株对苏拉明的抗药性水平明显高于其他株。小鼠体内治疗试验显示，GXM株以10mg/kg剂量苏拉明治疗无效，在临床上表现出一定的抗药性，而GDB1株以10mg/kg剂量苏拉明治疗则全部治愈。由此可见，体外药敏试验结果与体内治疗结果一致。这一结果提示，多数中国伊氏锥虫株对苏拉明的敏感性偏低，少数虫株已表现出一定的抗药性。     

泰氏锥虫抗原制备及实验室诊断研究

应用体外培养的泰氏锥虫制备可溶性抗原Ⅰ、抗原Ⅱ和代谢抗原.经测定,其蛋白含量每毫升分别为6.5mg、7.4mg和7.1mg.薄层等电聚焦电泳测定结果表明,抗原Ⅰ出现22条区带,抗原Ⅱ21条区带,代谢抗原28条区带,对照的伊氏锥虫琼脂免疫扩散抗原14条区带.经分析,泰氏锥虫抗原和伊氏锥虫抗原有4条区带在同一迁移率上.琼脂免疫扩散反应中,3种泰氏锥虫抗原均与相应免疫兔血清发生沉淀反应,抗原Ⅰ出现1条致密沉淀线,抗原Ⅱ和代谢抗原出现2～3条沉淀线,抗原效价为1:4～16.免疫电泳显示了类似的结果,抗原Ⅰ与免疫兔血清出现1条弧形沉淀线,抗原Ⅱ和代谢抗原与免疫兔血清出现了3条弧形沉淀线.间接血凝试验结果表明,泰氏锥虫自然感染牛血清效价为1:20～40,免疫兔血清为1:1280～5120.所制泰氏锥虫抗原对伊氏锥虫和媾疫锥虫血清也能很好地发生交叉反应,3份伊氏锥虫病马血清和3份伊氏锥虫人工感染兔血清血凝效价分别为1:10～40和1:8～1024;5份媾疫马血清有4份血凝效价为1:20～320.4份环形泰勒虫病牛血清均为阴性.     

非洲锥虫的非变异表面糖蛋白

非洲锥虫的非变异表面糖蛋白蔡建平沈永林汪志楷（南京农业大学动物医学院２１００９５）众所周知，锥虫可通过其表面变异糖蛋白（ＶＳＧ）的时序性改变而逃避宿主的免疫［１］。现已知每个锥虫携带的ＶＳＧ基因大约有１０００种之多［２］，这些基因以时序表达的方式合成...