反刍动物饲用高产蛋白酵母菌株的分离和筛选

青贮饲料和酒糟饲料富含酵母菌,从中分离优化筛选出高产蛋白菌株可作为反刍动物饲用酵母菌。作者通过正交试验,对分离菌株进行培养条件的优化,从中筛选出1株高产蛋白菌株为酿酒酵母菌（saccharomyces cerevisiae）,在温度30℃、初始pH为5、葡萄糖浓度2%、大豆蛋白胨浓度1%、麦芽汁粉0.3%、酵母膏0.3%、接菌量3%,转速180 r/min时,生物产量达到最高,细胞蛋白达到60.54 mg N/dl,菌体细胞达到1.7×10⁹个/ml。     

白术、灵芝、黄芪多糖对鸡脾淋巴细胞增殖的影响

为探讨白术多糖(PAM)、灵芝多糖(GLP)及黄芪多糖(APS)对雏鸡脾脏淋巴细胞体外增殖的影响,试验用不同浓度的3种多糖培养液体外培养雏鸡脾脏淋巴细胞,选出适合的多糖浓度,分别在37℃和47℃环境下培养淋巴细胞,并用MTS法测定淋巴细胞增殖的变化。结果表明:3种多糖对淋巴细胞增殖的影响与浓度之间并无线性关系,高浓度的多糖会抑制淋巴细胞的增殖,PAM、GLP和APS的最适添加浓度分别为12.5 mg/L、25 mg/L、6.25 mg/L;在热应激环境下,12.5 mg/L的PAM可显著提高淋巴细胞的增殖能力,与热应激对照组OD490值相比,提高了38.00%,而25 mg/L的GLP和6.25 mg/L的APS分别提高32.67%和36.67%。说明白术多糖抗应激能力最好,可提高淋巴细胞在热应激环境继续增殖的能力。     

天门冬多糖对小鼠脾脏淋巴细胞体外增殖的影响

本试验旨在研究天门冬多糖对小鼠脾脏淋巴细胞体外增殖的影响。从正常小鼠分离脾脏淋巴细胞体外培养,在细胞培养体系中分别加入终浓度为50、100、200、400 mg/L天门冬多糖或配合刀豆素(5 mg/L)作用24、487、2 h,以MTT法测定细胞的增殖程度。结果表明,天门冬多糖可显著促进体外培养的小鼠脾脏淋巴细胞增殖,并与ConA有协同作用。     

白花蛇舌草提取物对肉鸡淋巴细胞增殖功能的影响

为了研究中药白花蛇舌草对肉鸡免疫力的调节作用,探讨其作用机理。在体外培养的肉鸡血液和脾脏淋巴细胞中加入不同浓度的白花蛇舌草水煎剂、粗多糖和总黄酮等成分,观测其对淋巴细胞增殖功能的影响。白花蛇舌草水煎剂、粗多糖和总黄酮分别在浓度为4 000 mg/L、1 000 mg/L~2 000 mg/L和5 mg/L~100 mg/L时对鸡血液淋巴细胞有明显的刺激增殖作用(P0.05),在浓度为200 mg/L~800 mg/L、10 mg/L~1 600 mg/L和25 mg/L~50 mg/L时对鸡脾脏淋巴细胞的增殖具有明显的刺激作用(P0.05)。研究结果说明白花蛇舌草水煎剂、粗多糖和总黄酮对体外培养的肉鸡淋巴细胞的增殖均有促进作用。     

黄芪多糖对巨噬细胞活化及其吞噬功能的影响

为研究黄芪多糖对巨噬细胞增殖、抗原呈递与吞噬活性的影响，揭示黄芪多糖免疫调节作用机制，试验采用不同浓度的黄芪多糖（0、0.1、1、10、50、100μg/mL)处理巨噬细胞12 h，用CCK-8比色法检测细胞增殖活性，用流式细胞仪检测细胞表面CD80、CD86、MHC-II分子表达及细胞吞噬活性。结果发现：与对照组相比，50μg/mL的黄芪多糖能够促进巨噬细胞增殖（P<0.001），提高细胞表面CD80、MHC-II分子的表达水平（P<0.001）和单个细胞吞噬能力（P<0.05）;100μg/mL的黄芪多糖能够促进巨噬细胞增殖（P<0.001），提高细胞表面CD80(P<0.001)、CD86(P<0.05)、MHC-II(P<0.001)分子的表达水平，增加细胞吞噬率（P<0.05）及单个细胞吞噬能力（P<0.001）。结果表明，50和100μg/mL黄芪多糖能显著活化巨噬细胞并增强其吞噬功能，但黄芪多糖活化巨噬细胞的分子机制仍需进一步探究。     

黄芪水煎液诱导大鼠肠黏膜微血管内皮细胞增殖以及分泌IFN-γ的研究

为了探讨黄芪水煎液能否诱导大鼠肠黏膜微血管内皮细胞(RIMVECs)表达IFN-γ,采用MTT和双夹心ELISA分别检测了黄芪水煎液对体外培养的RIMMVECs增殖以及表达IFN-γ的影响。结果显示,黄芪水煎液在25mg/L~3 200mg/L时促进RIMVECs增殖。为更好的研究黄芪水煎液诱导效果,将不同浓度的黄芪水煎液(0.1、1、6、30mg/mL)诱导RIMVECs 6、12、24h检测IFN-γ含量,结果显示,在各检测时间点0.1、1mg/mL组和空白组差异显著(P0.05),6mg/mL组差异极显著(P0.01),30mg/mL组差异不显著(P0.05)。说明黄芪水煎液的抗病毒作用可能与诱导微血管内皮细胞表达IFN-γ有直接的关系,为黄芪"益气解毒"功效的现代阐释提供了试验依据。     

3H-TdR掺入法检测鸡不同组织淋巴细胞增殖反应的条件优化

为了检测感染免疫抑制病毒后鸡群的细胞免疫变化,以建立的3H-TdR掺入法观察了外周血、脾脏、胸腺、法氏囊中淋巴细胞的增殖反应,对影响该方法的细胞密度、丝裂原浓度(ConA或LPS)、犊牛血清(FCS)浓度等条件进行优化.结果表明,外周血淋巴细胞增殖试验的最佳条件细胞105～106/mL,ConA 5 mg/L,FCS 10%;脾脏中淋巴细胞最佳条件细胞5×106/mL,ConA 10 mg/L,FCS 10%;胸腺中淋巴细胞最佳条件细胞106/mL,ConA 40 mg/L,FCS 10%;法氏囊中淋巴细胞最佳条件细胞5×106/mL,LPS 40 mg/L,FCS 10%.     

黄芪多糖对鸡体液免疫增强作用

为研究提高体液免疫效果和有效降低免疫原剂量的可行性,本研究将黄芪多糖、灭活新城疫病毒及油乳剂按不同比例配制疫苗后分别免疫鸡,以无佐剂苗和油乳苗为对照,分别于免疫后第7、14、21、28、35和48天时,在各免疫组随机抽取10只鸡进行ND-HI抗体效价的检测;将黄芪多糖分成5个浓度加入体外培养的鸡脾脏淋巴细胞中,以MTT法检测其对脾脏淋巴细胞增殖的影响.结果显示,加入不同剂量黄芪多糖的油苗组在一些时间点均能显著提高抗体效价,其中中等剂量组效果最好;加入黄芪多糖0.375 mg/只而疫苗减半组的抗体效价与单纯油苗组相当;黄芪多糖在300 mg/L时能显著促进鸡脾脏淋巴细胞的增殖.黄芪多糖可以作为体液免疫增强剂.     

大熊猫犬瘟热病毒（CDV-PA-1421株）微载体悬浮培养工艺研究

根据正交试验对大熊猫犬瘟热病毒(CDV-PA-1421株)在生物反应器中的培养工艺进行优化，确定关键技术参数。结果表明，大熊猫犬瘟热病毒悬浮培养最佳组合条件为：Vero细胞长成单层后，接种到生物反应器，细胞接种浓度为0.2×10⁶/mL~0.4×10⁶/mL，微载体浓度为8.0 g/L，加入MSVP培养基至工作体积。按0.01～0.1 感染复数(MOI)接种病毒，在37 ℃ pH7.2条件下培养96~120 h，细胞病变(CPE)达70%～80%时收获病毒上清液，即可获得高滴度病毒液。3批培养结果显示病毒培养工艺稳定，收获液病毒含量均在10^7.0～10^7.5 TCID50/0.1mL之间。     

黄芪多糖对育肥猪生长性能、血清生化及养分消化率的影响

文章旨在研究黄芪多糖对育肥猪生长性能、血清生化及养分消化率的影响,试验选取80头同批次,初始体重[（91.25±5.41）kg]接近的育肥猪,随机分为4组,每组4个重复,每个重复5头。4组育肥猪分别饲喂基础日粮+0、100、200、300 mg/kg黄芪多糖,试验为期60 d。结果显示：（1）200 mg/kg黄芪多糖组育肥猪的平均日增重和平均日采食量显著高于0 mg/kg黄芪多糖组（P <0.05）,100、200 mg/kg黄芪多糖组育肥猪的料重比显著低于0 mg/kg黄芪多糖组（P <0.05）;(2)100、200、300 mg/kg黄芪多糖组育肥猪血清中白蛋白和葡萄糖含量显著高于0 mg/kg黄芪多糖组（P <0.05）,200 mg/kg黄芪多糖组育肥猪血清中谷丙转氨酶含量显著高于0 mg/kg黄芪多糖组（P <0.05）,200、300 mg/kg黄芪多糖组育肥猪血清中谷草转氨酶含量显著高于0 mg/kg黄芪多糖组（P <0.05）;(3)100、200、300 mg/kg黄芪多糖组干物质消化率显著高于0 mg/kg黄芪多糖组（P <0...     

口服福尔马林对羔羊消化代谢与生长的影响

将8只30日龄、体重(6.9±1.0)kg的小尾寒羊×无角陶赛特母羔羊随机分为2组(每组4只),以研究口服福尔马林对羔羊自由采食、消化代谢、屠宰性能和甲醛残留的影响。结果表明,在55～80、95～120和125～150日龄3个日龄段,对照组羔羊的干物质采食量分别为(567.3±27.5)、(752.4±9.01)和(1044.1±30.8)g/(d.头),口服福尔马林组分别增加22.02%(P0.01)、28.75%(P0.01)和41.79%(P0.01);对照组羔羊的氮保留分别为(12.3±0.8)、(13.6±0.2)和(18.0±0.6)g/(d.头),口服福尔马林组分别增加25.20%(P0.01)、41.91%(P0.01)和46.11%(P0.01);对照组羔羊的日增重分别为(157.1±11.7)、(246.4±24.4)和(250.0±8.3)g/(d.头),口服福尔马林组分别增加18.20%(P0.05)、23.21%(P0.05)和27.16%(P0.01);而两组间的日粮消化率无显著差异。240日龄对照组和口服福尔马林组羔羊的胴体重分别为(20.37±1.78)和(24.55±1.14)kg/头(P0.01),屠宰率分别为48.59%±1.08%和50.46%±1.02%(P0.05),瘦肉率分别为65.22%±1.57%和64.84%±1.11%(P0.05)。羔羊血液、肌肉、肾脏、肝脏、瘤胃组织和小肠组织中的甲醛含量对照组分别为(1.84±0.44)mg/L、(0.35±0.26)mg/kg、(1.10±0.67)mg/kg、(0.74±0.34)mg/kg、(0.91±0.72)mg/kg和(0.79±0.41)mg/kg,在试验组分别为(1.47±0.61)mg/L、(0.54±0.34)mg/kg、(1.65±0.71)mg/kg、(0.91±0.38)mg/kg、(2.03±0.71)mg/L和(0.85±0.42)mg/L。因此,口服福尔马林可增加羔羊的自由采食量而不影响消化率,提高羔羊对日粮的消化量和羔羊日增重;以上这种作用随羔羊的日龄增加而增强;口服福尔马林提高羔羊的胴体重、屠宰率,但不影响胴体的瘦肉率;长期口服福尔马林羔羊的组织器官中甲醛的含量低于2.0 mg/kg。     

单增李斯特菌ActA的表达、免疫原性研究及单克隆抗体的制备

原核表达单增李斯特菌(Lm)ActA蛋白并进行亲合层析纯化,检测ActA的免疫原性,以表达蛋白为检测抗原制备Lm单克隆抗体,并对单抗的亚型、效价、亲合力及特异性进行测定。结果表明,成功表达了ActA蛋白;表达蛋白诱导了特异性的细胞免疫和体液免疫,具有良好的免疫原性;共获得4株抗Lm ActA单克隆抗体。其中3G6、4E10和2B9为IgG1亚类;腹水抗体效价,3G6和4E10为1∶64000,2B9为1∶32000;3G6、4E10和2B9的亲和常数分别为6.62×107M-1、5.67×107M-1和7.15×106M-1;3G6、2B4和4E10为Lm特异性单抗,2B9为致病性李斯特菌特异性单抗。所制备的单抗可用于Lm检测方法的建立。     

金黄色葡萄球菌诱发建立乳房炎小鼠病理模型

为了建立小鼠乳房炎模型,将30只昆明小鼠随机分成3组,分别经第4对乳腺注入50μL的生理盐水、1.0×105CFU/mL和2.0×105CFU/mL的金黄色葡萄球菌,观察乳腺组织的外形和组织切片的变化;结果表明,注菌后24 h,小鼠出现明显的临床症状,乳腺出现不同程度的炎性症状,组织病理学显示腺泡腔内有大量嗜中性粒细胞浸润,泡腔间隔增宽。说明金黄色葡萄球菌能够诱发试验性乳房炎。     

黑白花奶牛乳腺上皮细胞冻存方法的研究

本试验研究了北方地区黑白花奶牛乳腺上皮细胞的最佳冻存方法。采用内蒙古地区健康黑白花奶牛的新鲜乳腺组织,将组织进行Ⅱ型胶原酶消化后原代培养,培养的细胞经5代纯化后将密度调整为1×106个/mL。采用6种处理方法进行冻存,各设3个重复。液氮冻存1个月后,分别将6种不同方法冻存的细胞复苏后测定细胞活性,包括冻存死亡率、贴壁细胞占活细胞的比率、凋亡率等,同时进行形态学观察。结果显示,处理1组与2、3、5组间冻存死亡率存在极显著差异(P0.01),处理1、4、6组间冻存死亡率无显著差异(P0.05),处理2、6组间冻存死亡率存在极显著差异(P0.01);处理4组的贴比率高于处理2、5、6组,存在极显著差异(P0.01)。形态学观察结果发现,处理1、4组细胞较其它组生长状态良好。因此,处理4可作为黑白花奶牛乳腺上皮细胞的最佳冻存方法。     

常山提取物和常山乙素对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响

为了明确常山提取物和常山乙素的免疫学活性,应用MTT法测定2种药物体外对小鼠脾T、B淋巴细胞增殖的影响。结果显示,常山碱提取物质量浓度达到200mg／L时显著抑制了小鼠脾淋巴细胞的增殖（P〈0．05）;质量浓度在10mg／L时对ConA诱导T淋巴细胞增殖有显著的促进作用（P〈0．05）;质量浓度在10～200mg／L对LPS诱导B淋巴细胞增殖有一定的促进作用（P〉0．05）。常山乙素质量浓度达到0．1mg／L时显著抑制了小鼠脾淋巴细胞的增殖（P〈0．05）;质量浓度在0．001～0．01mg／L时对ConA诱导T淋巴细胞增殖有一定的促进作用（P〉0．05）,质量浓度在0．0001mg／L时具有显著的促进作用（P〈0．05）;质量浓度在0．0001～0．005mg／L对LPS诱导B淋巴细胞增殖有一定的促进作用（P〉0．05）。结果表明,常山提取物和常山乙素具有良好的免疫增强活性,为今后相关研究提供了免疫学参考。     

体外转录法制备新城疫病毒荧光定量RT-PCR标准阳性模板

本研究针对新城疫病毒M基因设计了1对荧光定量RT-PCR引物和Taqman探针,在上游引物的5′端引入T7启动子,采用RT-PCR方法获得了体外转录模板,并对转录产物RNA的浓度及D值进行了测定。线性试验和特异性试验结果表明,该模板具有良好的线性范围和特异性,模板稀释度为2.95×104～2.95×108拷贝/L时,相关系数为0.998。该模板稳定性好,-80℃保存30 d后无显著变化。浓度为2.95×104～2.95×108拷贝/μL的标准品的变异系数分别为0.20%、0.28%、1.00%、0.54%、0.52%,表明以此模板进行荧光定量PCR具有较好的重复性。     

年龄和性别对陶赛特×小尾寒羊F1代羔羊屠宰性能与肉品质的影响

试验旨在探讨年龄和性别对陶×寒F1羔羊肉用性能及肉品质的影响。选取同等饲养条件下的7月龄陶×寒F1公羔、母羔;13月龄陶×寒F1公羔各5只,研究其屠宰性能和肉的食用品质。结果表明,13月龄羔羊的宰前活重、胴体重比7月龄高41.85%、56.51%（P<0.01）,屠宰率显著高于7月龄（P<0.05）,13月龄羔羊的屠宰性能高于7月龄。产肉力指标上13月龄羔羊的瘦肉重、眼肌面积、肉骨比较7月龄高30.40%、30.04%（P<0.01）、15.56%（P<0.05）。13月龄羔羊肥肉重、GR值比7月龄高117.23%、263.40%（P<0.01）。肉品质方面,13月龄羔羊背最长肌剪切力值、滴水损失率、胶原蛋白含量、肌纤维直径均显著高于7月龄（P<0.05）。公羔的宰前活重、胴体重比母羔高11.96%、14.36%（P<0.05）,表明7月龄时公羔屠宰性能高于母羔,肉品质指标无显著差异。因此,陶×寒F1羔羊的屠宰性能和肉品质明显受年龄、性别的影响。     

猪β-干扰素的基因改造表达及其抗猪繁殖与呼吸综合征病毒活性测定

本研究根据GenBank上登录的猪β-干扰素基因成熟肽核苷酸序列(mPoIFNβ),在保持原猪β-干扰素蛋白序列不变的基础上,对猪β-干扰素基因进行了毕赤酵母偏嗜性改造,并构建了毕赤酵母重组表达质粒pPICZαC-PoIFNβ。pPICZαC-PoIFNβ经SacⅠ酶切线性化后,电击转化导入感受态的毕赤酵母菌株X-33中,转化子经YPDS+Zeocin抗性平板筛选和PCR鉴定后获得多株阳性菌株。阳性酵母菌株经甲醇诱导分泌表达了重组PoIFNβ,其表达量约为127.9 mg/L。表达产物经SDS-PAGE和Western blotting检测,结果表明,表达产物为分子质量约25和28 ku的混合物,并且二者都可与PoIFNβ阳性血清结合。以细胞病变抑制法测定重组β-干扰素在BHK-21细胞上的抗水泡性口炎病毒活性为2.8×10³ IU/mL;对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)在Marc-145细胞上抗病毒活性达到1.6×10³ IU/mL。     

奶牛β-干扰素在大肠杆菌中高效表达和生物活性分析

提取经植物血凝素诱导培养的中国健康奶牛外周血淋巴细胞总RNA,应用RT-PCR方法扩增出奶牛β-干扰素成熟蛋白基因并将其克隆到pMD18-T载体上。测序结果表明,扩增片段为奶牛β-干扰素成熟蛋白序列,与GenBank上发表的干扰素序列同源性为100%。将其重组到原核表达载体pET32a(+)上,并在大肠杆菌BL21中实现了高效表达。表达产物以His-Tag融合蛋白的形式存在,表达量约占细菌总蛋白的40%。用镍亲和层析法对蛋白进行纯化,并利用VSV-MDBK/IBRV细胞系统分析其生物活性。重组奶牛β-干扰素抗病毒活性分别约3.16×105U/mL,7.5×104U/mL。结果表明,重组奶牛β-干扰素特异性好,而且抗病毒活性比较稳定。本研究为研制和开发重组奶牛β-干扰素类生物制品研发奠定了基础。