奶牛Y精子膜蛋白的提取与分析

奶牛Y精子膜蛋白的提取与鉴定为深入研究Y精子特异膜蛋白在受精过程中的作用，开发经济、安全、高效的奶牛性别控制方法具有重要意义。本研究采用超声波破碎法将精子膜与精子分离，分离后的精子膜粗品采用蔗糖密度梯度离心法进行纯化。纯化的精子膜经膜蛋白提取液（去污剂）提取，透析浓缩。经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）银盐染色，成功地提取到膜蛋白。BIO—RAD凝胶成像分析仪分析得知Y精子膜蛋白至少有10种，分子量范围为7．94KD-166．65KD，其中尤以15KD的蛋白含量最多。     

奶牛性控精子膜蛋白提取及双向电泳分离技术的研究

本文的研究内容是奶牛性控精子膜蛋白双向电泳平台的建立和优化以及性控X、Y精子膜蛋白表达的差异性分析。分别对性控X精子、Y精子提取膜蛋白并进行双向电泳,用ImageMaster7.0软件对本结果进行比对分析,发现一张图谱上大约有600左右的蛋白点,其中差异蛋白点32个,在差异蛋白点中,上调蛋白19个,下调蛋白13个。说明基于双向电泳的蛋白质组学可以用于性控精子的研究,发生改变的这些差异蛋白可能在性别分化过程中发挥重要作用。     

不孕奶牛宫颈黏液相关ASA免疫印迹分析

为探讨和分析免疫性不孕奶牛和可孕奶牛宫颈黏液ASA能够识别的精子膜抗原及其差异,本试验通过提取精子膜总蛋白,对24头免疫性不孕奶牛和14头可孕奶牛宫颈黏液ASA能够识别的精子抗原进行了比较分析。免疫印迹试验结果显示,不孕奶牛宫颈黏液ASA对分子质量为88-90ku、66ku、55~57ku、25-27ku的精子膜抗原有特殊免疫性反应,识别抗原率为100％（24／24）、100％（24／24）、87．5％（21／24）、70．8％（17／24）;而可孕奶牛宫颈黏液AsA对分子质量为88-90ku、55-57ku、25-27ku的识别率仅为21．4％（3／14）、14．2％（2／14）、14．2％（2／14）,可孕奶牛宫颈黏液不能识别分子质量为66ku#~精子膜抗原。结果表明,不孕奶牛宫颈黏液ASA~g够识别更多的精子膜抗原,这些精子膜抗原可能与免疫性不孕有密切相关,对其深入的研究将有助于免疫性不孕相关精子膜抗原的筛选和鉴定。     

塔里木马鹿不同个体冻融精子酪氨酸磷酸化蛋白的差异表达初报

蛋白的酪氨酸磷酸化对精子运动力的维持,精子获能,超激活运动以及顶体反应等生理过程十分重要。为探讨塔里木马鹿不同生理状态下,不同个体精液精子蛋白酪氨酸磷酸化的关系,以塔里木马鹿冷冻保存的精子为试验材料,采用非离子型去污剂(NP-40)裂解法提取精子膜蛋白,用SDS-PAGE凝胶电泳和Western免疫印迹技术检测精子膜蛋白及发生酪氨酸磷酸化蛋白的表达情况。结果表明:精液异常(黄棕色,黏稠)个体的冻融精子活力,精子蛋白酪氨酸磷酸化水平明显下降(P<0.01);含卵黄稀释液作为冷冻保存稀释时,其冻融精子蛋白的磷酸化水平显著高于无卵黄稀释液的其它个体(P<0.05);另外,相同生理状态下冷冻保存的不同个体的冻融精子酪氨酸磷酸化蛋白的表达水平也有显著差异(P<0.05),但除了精液异常个体外所有公鹿冻融精子的40 ku和47 ku蛋白的磷酸化表现出较强的表达(P<0.05)。以上结果提示,塔里木马鹿冻融精子蛋白酪氨酸磷酸化水平与精液的生理状态有关,并且不同个体之间也存在一定的差异。     

精子膜抗原的研究及其应用

为了研究精子膜抗原并研发避孕疫苗,试验从精子膜抗原结构和功能的角度出发(这是因为精子膜抗原不仅是精子发生、成熟过程的重要标志分子,与受精和胚胎的早期发育关系密切,而且其中部分抗原还可诱导机体产生相应的自身抗体,是导致免疫性不育的主要原因.)在研究精子膜抗原揭示受精过程和不育机制的基础上,将一些精子膜抗原作为候选成分来研...     

精子载体转基因技术的最新研究进展

用动物精子作为外源DNA载体已成为转基因的主要方法之一,并在多种动物上获得成功.最近,人们对外源DNA与精子结合的分子机理进行深入研究发现外源DNA可与精子膜上30～35 kDa蛋白质特异结合,结合强度受精子膜上MHCII因子的调节.精清中的IF-1因子能抑制精子结合外源DNA,从而维持物种的遗传稳定性.精子结合外源DNA的量是恒定的,部分DNA能进入精子核内,CD4蛋白具有转运外源DNA进入精子核内的功能.进入核内的外源DNA牢固结合在精子核骨架上,然后整合到染色体的特异位点.但是,精子与外源DNA结合后能激活精子内的核酸酶,进而使外源DNA分子降解,可能是导致这种转基因方法稳定性差的主要原因.     

酪氨酸磷酸化在精子获能过程中的作用

在精子细胞发生顶体反应并使卵母细胞受精之前,获能是一个重要的生理先决条件。获能是精子在雌性生殖道中进一步成熟的复杂现象,其赋予精子以增强活性的能力,使精子能够与卵母细胞透明带（ZP）相互作用,进行顶体反应并与卵母细胞质膜融合,进而完成受精过程。然而精子获能的分子机制十分复杂,目前还未完全明确,但获能后的精子会有诸多结构及生化方面的变化,如蛋白酪氨酸磷酸化、精子膜胆固醇外流、活性氧的产生及精子膜超极化。蛋白质通过磷酸化或去磷酸化调节精子获能和顶体反应等一些重要的现象,这是精子到达、结合、穿透和融合卵母细胞所必需的过程。因此蛋白磷酸化是获能的一个非常重要的过程,尤其是在酪氨酸残基处的磷酸化是获能过程中发生的最重要的事件之一,且酪氨酸磷酸化可能是细胞中信号转导途径的主要甚至是唯一的指标。作者主要针对蛋白磷酸化、精子中酪氨酸磷酸化的发现、作用和定位,以及影响获能过程中酪氨酸磷酸化的几个因素进行阐述。     

哺乳动物精子获能的分子机制

精子获能是精子能够与卵母细胞发生顶体反应和受精的一个重要生理前提。精子获能的分子机制相当复杂,许多报道表明精子获能受到多种细胞信号途径的调控。尽管目前尚未完全明确,但是许多研究表明获能精子发生许多结构和生化变化,包括蛋白酪氨酸磷酸化、精子膜胆固醇外流、活性氧的产生及精子膜超极化,这些变化都有助于精子获能的发生。Ca2 和HCO3-通过对cAMP的调控有助于获能完成,葡萄糖、孕酮和肝素作为获能液的重要添加物,通过不同途径促发精子获能。文章从这些方面对获能做一综述,在此基础上提出以后的研究方向。     

参与调节哺乳动物精子运动的离子通道研究进展

精子运动能力是精子完成自然受精、实现自然条件下精子-卵母细胞融合的必要条件。精子从雄性附睾经生殖道进入雌性生殖道的过程中，其运动形式可以在很短的时间内根据环境的变化而做出改变，表明精子膜蛋白(离子通道)参与精子运动的调节，离子通道的正常表达和受精过程密切相关。目前研究发现Ca²⁺、K⁺、Na⁺等离子通道均参与精子膜极化、运动、获能和顶体反应等生理过程，且通过膜片钳和电生理学等技术初步了解精子离子通道的作用分子机制和拓扑结构。本文就参与调节精子运动的Ca²⁺、pH、电压门控Na⁺、K⁺、Cl^-通道的生理功能和拓扑结构进行了总结，期望能为精子离子通道的调节机制和功能研究提供全面的信息，促进动物生殖生物学的发展。     

哺乳类动物精子的获能和顶体反应

介绍了在生殖过程中的2个重要的生理变化--获能和顶体反应,并综述了最近几年来在生殖生物学领域关于获能与顶体反应机制方面的最新成果.结果显示,cAMP、Ca2+、咖啡因等因素对精子获能有促进作用,ZP3、Ca2+、cAMP、肝素等因素对顶体反应有促进作用.所有研究成果表明,精子的荻能和顶体反应与精子膜的生理变化有着密切关系.