泛素激活酶抑制剂对猪精子获能状态、膜重构及体外受精的影响

【目的】评估泛素激活酶（E1）对猪精子获能、膜重构和体外受精的影响。【方法】选取5头长白猪采集精液，以硫醇酯法评估泛素激活酶（ubiquitin activating enzyme，E1）抑制剂（TAK-243）对精子中泛素（ubiquitin，Ub）与E1结合的影响；将精子分为鲜精组（Fresh）、DMSO组（DMSO）、获能组（Capacitated）及2.4、4.8和7.2 nmol/L TAK-243组，鲜精组用2 mL PBS重悬精子沉淀；获能组用2 mL获能液重悬精子沉淀；DMSO组及2.4、4.8和7.2 nmol/L TAK-243组分别用2 mL含0.07% DMSO及2.4、4.8和7.2 nmol/L TAK-243的获能液重悬精子沉淀，使用微生物动（静）态图像检测系统检测精子的动力学参数；以Western blotting法检测精子的酪氨酸磷酸化水平；Zn²⁺荧光探针检测精子的Zn²⁺含量；花生凝集素染色检测精子的顶体膜重构；免疫荧光法检测顶体表面精子黏附蛋白（AQN-1、AWN）的表达；体外受精法检测TAK-243对精卵结合和卵裂率的影响。【结果】硫醇酯分析结果表明，TAK-243处理组精子未形成Ub-E1复合物，说明TAK-243抑制了E1对Ub的激活作用。与鲜精组相比，获能组精子的曲线速度（VCL）和平均鞭打频率显著升高（P<0.05）。3个浓度TAK-243组与获能组精子的各项动力学参数差异均不显著（P>0.05）。与获能组相比，3个浓度TAK-243组酪氨酸磷酸化水平均显著降低（P<0.05），且随着TAK-243浓度的增加，精子蛋白的酪氨酸磷酸化水平逐渐降低。后续试验使用7.2 nmol/L TAK-243进行精子中Zn²⁺水平和顶体膜重构的研究，其结果表明，与获能组相比，7.2 nmol/L TAK-243组Zn²⁺水平、顶体膜完整性及AQN-1和AWN蛋白的表达水平均显著增加（P<0.05），精子与卵母细胞的黏附率和卵裂率均显著降低（P<0.05）。【结论】7.2 nmol/L TAK-243显著降低了精子获能期间蛋白酪氨酸磷酸化水平、精卵结合率和卵裂率，显著增加了Zn²⁺含量、顶体膜完整率及顶体表面蛋白AWN和AQN-1的表达，说明泛素-蛋白酶体信号通路参与了精子的体外获能。     

获能液和DMSO对猪精子获能效率的影响

为了探讨获能液和二甲基亚砜(DMSO)对猪精子获能效率的影响,试验采用SPSS 14.0软件进行分析,各处理平均值采用邓肯氏多重比较。结果表明:CM获能液获能3小时时超激活运动率为57.9%;mTBM获能液获能4小时时超激活运动率为55.7%;0.1%DMSO获能液获能30分钟时精子活率为70.20%,顶体反应率为70.44%,与其他组相比差异显著(P<0.05)。     

基于杭州地域文化的南山村民宿设计方法探析

指出了乡村旅游作为一种亲近自然的生活方式,近年来越来越得到人们的喜爱与推崇,越来越多的游客选择在民宿投宿。不同于传统的酒店住宿,民宿不仅为人们提供舒适的住宿场所,还兼备家庭的温馨氛围以及所在地的浓烈人文气息,为人们提供了多种的在地体验感受。以杭州南山村为研究对象,根据杭州独特的自然地域文化特色,从民宿的格局、尺度、色彩、材料、庭院等方面总结提出了杭州民宿设计的基本方法。     

松辽白鹅PRLR基因5′调控区多态性研究

[目的]通过研究催乳素受体（PRLR）基因多态性,为松辽白鹅的选种与选育提供理论依据。[方法]参照鹅PRLR基因5′调控区序列设计引物,运用PCR-SSCP技术进行多态性分析。[结果]扩增片段存在多态性,得到AA、AB和BB 3种基因型,AA为优势基因型,等位基因A占主要优势;在PRLR基因5′调控区80处发生了单碱基突变（A→G）。[结论]PRLR基因5′调控区存在突变位点。     

双糖对冻融后猪精子质量的影响

在传统的Tris—柠檬酸—葡萄糖(TCG)稀释液基础上,分别添加0.1 mol/L乳糖、蔗糖、海藻糖,并采用细管法对精液进行冷冻,研究不同双糖对冻融后猪精液质量的影响。结果表明:0.1 mol/L的海藻糖和蔗糖相对于对照组和0.1 mol/L的乳糖TCG稀释液能够显著改善冻融后猪精子质量,其冻融后精子的活率、顶体完整率、低渗膨胀率、平均路径速度、运动线速度、平均侧摆幅度和平均鞭打频率均明显提高(P0.05),分别达到42.14%和40.56%,51.48%和49.84%,46.20%和43.01%,32.8μm/s和33.2μm/s,60.80%和59.00%,1.70μm和1.62μm,7.68 Hz和7.62 Hz。TCG稀释液中添加0.1 mol/L海藻糖和蔗糖的猪冷冻精液体外受精的受精能力明显高于0.1 mol/L乳糖组和对照组,其卵裂率分别为41%和38%。     

不同bFF对延边黄牛卵母细胞成熟及发育的影响

在成熟液中添加不同处理及来源的牛卵泡液(bFF),以研究其对延边黄牛卵母细胞体外成熟及重组胚发育的影响。结果表明:未抽滤组与抽滤组间成熟率差异不显著(P>0.05),但未抽滤组显著提高囊胚率(P<0.05);卵泡直径2~8 mm组、>8 mm组和混合组(2~8 mm组与>8 mm组的混合)之间成熟率、卵裂率和囊胚发育率差异不显著(P>0.05);两试验组(黄体组、卵泡组)成熟率、卵裂率和囊胚率差异不显著(P>0.05),两试验组与血清组相比囊胚率显著提高(P<0.05)。试验结果提示,未抽滤黄体期卵巢表面卵泡内bFF能有效提高卵母细胞体外囊胚发育率。     

不同核成熟抑制剂对延边黄牛卵母细胞发育的影响

通过在卵母细胞成熟液中单独添加卵母细胞核成熟抑制剂--次黄嘌呤(hypoxanthine,HX)、异丁基甲基黄嘌呤(isobutylmethylxantihine,IBMX),研究其对卵母细胞卵丘扩散程度、极体形态以及后期发育的影响.结果表明:抑制剂(HX、IBMX)组卵母细胞卵丘扩散程度与对照组相比差异不显著(P>0.05),抑制剂组第一极体完整率显著高于对照组,但抑制剂组囊胚发育率与对照组相比差异不显著.最终结果提示,虽然HX和IBMX并未明显提高卵母细胞发育潜力,但仍为两种行之有效的核成熟抑制剂.     

酪氨酸磷酸化在精子获能过程中的作用

在精子细胞发生顶体反应并使卵母细胞受精之前,获能是一个重要的生理先决条件。获能是精子在雌性生殖道中进一步成熟的复杂现象,其赋予精子以增强活性的能力,使精子能够与卵母细胞透明带（ZP）相互作用,进行顶体反应并与卵母细胞质膜融合,进而完成受精过程。然而精子获能的分子机制十分复杂,目前还未完全明确,但获能后的精子会有诸多结构及生化方面的变化,如蛋白酪氨酸磷酸化、精子膜胆固醇外流、活性氧的产生及精子膜超极化。蛋白质通过磷酸化或去磷酸化调节精子获能和顶体反应等一些重要的现象,这是精子到达、结合、穿透和融合卵母细胞所必需的过程。因此蛋白磷酸化是获能的一个非常重要的过程,尤其是在酪氨酸残基处的磷酸化是获能过程中发生的最重要的事件之一,且酪氨酸磷酸化可能是细胞中信号转导途径的主要甚至是唯一的指标。作者主要针对蛋白磷酸化、精子中酪氨酸磷酸化的发现、作用和定位,以及影响获能过程中酪氨酸磷酸化的几个因素进行阐述。     

绵羊FSHR基因生物信息学分析及其器官表达规律研究

为了验证及进一步研究促卵泡素受体(follicle-stimulating hormone receptor,FSHR)基因在绵羊繁殖力中的作用机制,试验采用生物信息学方法分析了绵羊FSHR基因结构、FSHR蛋白性质和结构、同源性、遗传进化、信号通路、蛋白互作网络和器官表达规律。结果表明:绵羊FSHR DNA全长196 149 bp,而编码蛋白质的mRNA序列全长只有2 431 bp,FSHR基因含有10个外显子;FSHR基因编码695个氨基酸,FSHR蛋白属于不稳定的脂溶性蛋白;FSHR蛋白是有7个跨膜结构的膜受体,包含LRR_5、GnRH_trans、7tm_1三种功能结构域,这三种结构域分别行使不同功能,共同激活G蛋白偶联机制,激活腺苷酸环化酶,使细胞内CAMP或Ca~(2+)内流增加,从而对细胞的生命活动进行调节;FSHR基因不但与繁殖相关基因Gdf9、Bmp15有关,还与抑制肿瘤转移基因Kiss1有关;FSHR的同源性分析和进化树构建结果显示,绵羊和山羊亲缘关系最近,其次是牛,与斑马鱼亲缘关系最远;FSHR基因在绵羊睾丸和卵巢中特异性高表达,并在各物种间的表达具有一致性。说明FSHR基因表达可能受内含子极为复杂和重要的调控,且在繁殖中起重要作用。该基因在睾丸中特异性高表达,与促卵泡生成素(FSH)对雄性动物曲细精管的发育、成熟和精子生成作用相吻合。