马杜霉素在鸡组织中残留检测方法的研究

本文用混合酸酐法和活化酯法合成４各马杜霉素结合抗原。用其中一和免疫原,。用其中一种作名单原,免疫家兔产生抗体;用其余三种包被原,探讨不同包被原用于ＥＬＩＳＡ检测马杜霉素残留时,对其灵敏度和方法回收率的影响。试验结果表明,马杜霉素结合抗原免疫家兔制备的抗体对马杜霉素具有很高的特异性,亲合性和选择性。在间接免疫ＥＬＩＳＡ中,使用Ｍ－Ｃ６－ＯＶＡ（ＡＥ）、Ｍ－ＯＶＡ（ＭＡ）和Ｍ－ＯＶＡ（ＡＥ）作包被原时     

雌二醇多克隆抗体的制备与鉴定

制备雌二醇完全抗原,并通过免疫家兔得到多克隆抗体,为下一步制备雌二醇单克隆抗体和雌二醇检测ELISA试剂盒奠定基础。试验以牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA)为载体,采用碳化二亚胺法,合成了雌二醇(E2)的2种免疫偶合物:免疫原E2-BSA和包被原E2-OVA;通过紫外光谱定性证明偶合物偶联成功与否,并对偶合物的蛋白含量、结合比进行测定并以免疫原E2-BSA免疫家兔,制备多克隆抗体,用包被原E2-OVA进行ELISA,对多克隆抗体特异性及效价进行检测。结果表明成功合成了雌二醇人工抗原即免疫原E2-BSA和包被原E2-OVA,二者的蛋白浓度分别为5.455和7.533mg/mL,结合比分别为7:1和8:1;制备的多克隆抗体特异性好,血清效价为1:106。     

二氟沙星人工抗原的合成与鉴定

通过化学方法合成了二氟沙星人工免疫原和包被原；采用碳二亚胺法将半抗原二氟沙星与载体蛋白BSA连接制备人工免疫原；并采用氯甲酸异丁酯法将二氟沙星与载体蛋白OVA连接制备人工包被原，经FeCl3显色反应、紫外扫描分析和动物免疫试验证实人工抗原合成成功。这对抗二氟沙星单克隆抗体的制备具有重要意义。     

氟罗沙星单克隆抗体的制备及鉴定

采用碳二亚胺(EDC)法将氟罗沙星(FLE)与载体蛋白BSA、OVA分别偶联合成人工抗原BSA-FLE、OVA-FLE,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳法和紫外分析法对合成的人工抗原进行了鉴定。BSA-FLE用作免疫抗原免疫Balb/C小鼠,OVA-FLE用作检测抗原包被酶标板检测抗体效价。免疫小鼠的脾细胞与SP2/0细胞融合获得了5株(4F11、2C3、8G2、3C1、2G8)稳定分泌抗FLE抗体的杂交瘤细胞株,抗体亚型鉴定均为IgG1。将3C1接种小鼠制备腹水,用辛酸-硫酸铵法对腹水进行纯化,纯化后腹水效价1∶1 024 000。抗体分子量160.766 KD,亲和常数为8.57×108M-1。     

己烯雌酚免疫分析技术研究进展

己烯雌酚为人工合成的二苯乙烯类雌激素药物,曾经作为促生长剂广泛应用于畜牧业。但国内研究表明,己烯雌酚存在着潜在的致癌性。因此,近年来,其在饲料及动物性食品中的残留检测倍受关注,但己烯雌酚属于小分子化合物,不具备免疫原性。己烯雌激酚人工抗原主要采用混合酸酐反应(氯甲酸异丁酯法)将半抗原己烯雌酚与载体蛋白牛血清蛋白连接制备人工免疫原,并采用碳二亚胺法将半抗原己烯雌酚与载体蛋白卵清蛋白连接制备人工包被原。文章对己烯雌酚的免疫分析技术进行了综述。     

甲硝唑人工抗原的制备及其ELISA检测

采用碳二亚胺法将甲硝唑半抗原与牛血清白蛋白(BSA)连接制备人工免疫原,同样方法将其与卵清蛋白(OVA)连接制备人工包被原.经紫外扫描分析,两种方法合成的免疫原和包被原的结合比分别为8∶1、2∶1和6∶1、2∶1;动物免疫试验分析偶联物,小鼠抗体效价达1∶5 000,与3种硝基咪唑类药物的交叉反应率均小于10%.表明制备的抗体可以用于甲硝唑残留的检测,同时为检测试剂盒的研制奠定了基础.     

β-受体激动剂类药物人工抗原合成方法研究进展

开展动物性食品中β-受体激动剂监测,对保障食品安全具有重要意义。免疫分析技术操作快速、灵敏度高、检测成本低,被广泛用于大批量畜禽产品的快速筛查。抗体特性是免疫检测的核心,而人工抗原合成的质量直接影响特异性抗体性能。本文主要综述了碳二亚胺法、活泼酯法、混合酸酐法、重氮化法、戊二醛法等β-受体激动剂类药物人工抗原合成方法,以及紫外光谱法、核磁共振法等人工抗原鉴定方法,以期为免疫分析等相关工作研究提供参考。     

己烯雌酚免疫抗原的合成与鉴定

通过重氮化法引入羧基,再用碳二亚胺法偶联BSA获得己烯雌酚(DES)免疫抗原.经紫外光谱、电泳图谱分析确证获得DES-BSA偶联物.间接酶联免疫法分析证明其免疫鼠所获得的抗体与己烯雌酚有良好的特异性.     

莱克多巴胺人工抗原的合成与鉴定

用戊二酸酐将盐酸莱克多巴胺活化成莱克多巴胺-戊二酸酐半醛,用混合酸酐法将莱克多巴胺-戊二酸酐半醛与KLH和BSA偶联,合成免疫原和包被抗原,经核磁共振法和紫外吸收法鉴定,偶联成功.用紫外吸收法测定免疫原和包被抗原的偶联比分别为24：1和2.5：1.用免疫原免疫新西兰白兔,采用间接ELISA法检测抗体效价,采用间接竞争ELISA法检测IC50值,获得了效价为1：6 000以上、IC50值为10 ng/mL的多克隆抗体,证明合成的人工免疫原具有免疫原性.     

氨基脲人工抗原的合成及其多克隆抗体的制备

目的合成氨基脲人工抗原并制备其多克隆抗体。方法以氨基脲(SEM)和对醛基苯甲酸(CP)为原料合成半抗原(CP-SEM),并采用碳化二亚胺法和混合酸酐法将其分别与牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清蛋白(OVA)偶联,合成氨基脲人工抗原。以氨基脲人工抗原(CPSEM-BSA)为免疫原免疫Balb/c小鼠,利用间接ELISA法测定其抗体效价。结果经薄层层析、红外光谱和元素分析等方法鉴定合成半抗原即为CP-SEM。紫外扫描、聚丙烯酰胺凝胶电泳结果表明人工抗原合成成功。免疫获得抗氨基脲的多克隆抗体,其抗体效价为1:64000。结论氨基脲人工抗原合成成功,并获得抗氨基脲的多克隆抗体。     

沙丁胺醇人工抗原的合成与鉴定

通过沙丁胺醇(SAL)与琥珀酸酐的醇解反应制备SAL的琥珀酸衍生物,用EDC法将SAL琥珀酸衍生物偶联于载体蛋白BSA和OVA,合成免疫原BSA-SAL和包被原OVA-SAL,用紫外扫描(UV)、SDS-PAGE进行鉴定;用BSA-SAL免疫BALB/C小鼠,间接ELISA测定多抗上清(pAb)效价,阻断ELISA鉴定其敏感性,交叉反应试验鉴定其特异性。结果表明,BSA-SAL的UV与BSA、SAL的相比发生了改变;通过UV分析,SAL-HS与BSA的分子结合比约为7.2∶1;通过系列ELISA鉴定,获得了高价、敏感、特异的pAb,为SAL残留免疫学检测方法的建立奠定了基础。     

沙丁胺醇人工抗原的制备及ic-ELISA方法的建立

以合成沙丁胺醇(SAL)完全抗原为基础获得针对SAL的多克隆抗体,建立检测SAL的间接竞争ELISA(ic-ELISA)检测方法,为进一步开发SAL快速检测试剂盒奠定基础。为此,分别用混合酸酐法和活化酯法制备SAL-BSA免疫原和SAL-OVA检测原,免疫新西兰大白兔获得SAL多抗血清,建立检测SAL ic-ELISA检测方法。结果显示,成功合成了SAL-BSA和SAL-OVA,其偶联比分别为17∶1和6.4∶1;免疫后兔血清抗体效价为1∶102400,所建立ic-ELISA的半数抑制浓度(IC₅₀)为24.84μg/L,最低检测限(IC₁₀)为0.78μg/L,线性范围IC₂₀~IC₈₀为3.16μg/L~80.1μg/L;精密度(CV)%<10%,回收率在98%~110%之间。特异性鉴定结果显示,SAL多抗血清除与侧链上含有叔丁基官能团的结构类似物具有较强的交叉反应外,不存在与其他同类分子的交叉反应。以上结果表明,成功建立了检测SAL的ic-ELISA检测方法,为进一步开发SAL快速检测试剂盒奠定了基础。     

氟虫腈单克隆抗体的制备及其在牛乳检测中的应用

合成氟虫腈人工完全抗原,制备氟虫腈单克隆抗体,以氟虫腈及氟虫腈类似物为半抗原,分别采用戊二醛法和碳二亚胺法合成人工完全抗原;利用紫外光谱扫描法、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法进行鉴定;使用氟虫腈-牛血清蛋白人工完全抗原免疫BALB/c小鼠,得到杂交瘤细胞株,采用小鼠体内诱生腹水方法制备单克隆抗体;使用酶联免疫吸附测定法测定氟虫腈在牛乳中的加标回收率及精密度。结果表明：氟虫腈的人工完全抗原合成成功,制备的单克隆抗体3F6质量浓度为8.5 mg/mL,效价为2.0×106,亚型为IgG1,与氟甲腈、氟虫腈砜、氟虫腈亚砜的交叉反应率分别为9.21%、14.02%、21.46%;氟虫腈在牛乳中的加标回收率为87%～118%,变异系数低于15%,方法具有较高准确度和精密度。     

间接ELISA检测奶牛乳房炎多联苗抗体方法的研究

利用超声波破碎法制备无乳链球菌、停乳链球菌和金黄色葡萄球菌可溶性抗原。对3种破碎抗原最佳包被浓度及包被条件、血清样品工作浓度、封闭液、酶标二抗的最佳工作浓度及作用时间等反应体系进行筛选和优化，初步建立了间接ELISA法检测奶牛乳房炎多联苗3种菌血清抗体的方法。对24头泌乳牛进行抗体检测，结果表明该3种抗原反应体系一致，3种抗原最适包被浓度为4—6μg／mL．血清样品最佳稀释度为1：200，该方法具有快速、简单、特异性和重复性好等优点。     

Selection for immune response in goats: the effect of immunization procedure on antibody response to diphtheria toxoid and human serum albumin.

The serum antibody titers to diphtheria toxoid and human serum albumin were determined in 103 goat kids from lines selected for 12 yr for high or low antibody response to diphtheria toxoid. In the 12th yr, six groups of kids were immunized with different preparations of the antigens. In all groups but one, the antigens were emulsified in Freund's incomplete adjuvant with added sonicated Mycobacterium paratuberculosis. The groups received the following treatments: Group 1 was immunized with both antigens mixed in the same syringe, Group 2 got both antigens injected separately, Group 3 got both antigens injected separately, but with a lower concentration of M. paratuberculosis, Group 4 was immunized with diphtheria toxoid only, Group 5 was immunized with human serum albumin only, and Group 6 was immunized with both antigens mixed, but without any M. paratuberculosis. The animals were immunized at 4 wk of age, and the antibody titers were determined 3 wk later by ELISA and passive hemagglutination. The mean antibody titers to both antigens were different between the selected lines (P less than .03). There was no effect of separate vs combined injections of antigens. However, there were indications of antigen suppression or competition between the antigens. Animals receiving only one antigen seemed to mount a higher antibody response to that antigen than did animals immunized with two antigens.     

N-羟乙酰神经氨酸IgY抗体的制备及鉴定

本试验旨在建立N-羟乙酰神经氨酸(Neu5Gc) IgY抗体的制备及鉴定方法。通过碳二亚胺法将Neu5Gc和载体蛋白进行偶联,制备Neu5Gc人工完全抗原,用制备的完全抗原免疫海兰褐蛋鸡制备Neu5Gc-IgY抗体,经ELISA检测分析鉴定抗体活性。经紫外光谱扫描、琼脂糖凝胶电泳法初步判断Neu5Gc人工完全抗原制备成功,获得的特异性Neu5Gc-IgY抗体经ELISA检测分析,首次免疫后第7天产生抗体,抗体效价呈动态变化,随着免疫次数的增多,血清效价和抗体效价逐步上升,至初次免疫后63 d达到高峰,效价达1:10 000,停止加强免疫后抗体效价可持续一个月左右,1号鸡产生的IgY抗体具有很好的抗原竞争活性,获得竞争回归方程y=30.28x+16.923,线性系数R²=0.9581。以上结果表明,本试验制备的Neu5Gc IgY抗体取得了理想效果,为红肉、牛奶及肿瘤组织中Neu5Gc的检测奠定了基础。     

Antigen requirements and specificity of enzyme-linked immunosorbent assay for detection of canine IgG against canine distemper viral antigens

An enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was developed for detection of specific immunoglobulin G (IgG) against canine distemper virus (CDV) antigens. Sucrose gradient separation of viral and cellular proteins was required to produce coating antigens for the ELISA. The specificity of the ELISA was demonstrated by blocking CDV-positive canine sera with CDV-specific antisera produced in goats and rabbits and adsorption of positive sera with CDV antigens. A comparison of the ELISA with the serum-neutralization technique for the detection of CDV antibodies was conducted. Anti-CDV IgG was detected in conventional dogs as early as 6 days after inoculation with a commercial vaccine to CDV. Paired sera from the immunized dogs were evaluated by both techniques and a statistically (P less than 0.01) significant agreement between the ELISA and the serum-neutralization technique was shown (r = 0.6121, n = 75).