牛病毒性腹泻/粘膜病(BVD/MD)的微量中和试验

随着检疫方法向微量、快速方向发展,微量中和试验用于牛病毒性腹泻/粘膜病(BVD/MD)的检疫已日见增多,但是各国在其方法和判断标准上又各不一样,所以使用起来很不方便。我们根据西德、英国、丹麦、荷兰等国方法,经过反复比较研究,摸索出一个更适合于BVD/MD检疫的微量中和试验方法。在国内外864份样品的检疫中,该法与BVD/MD的常量中和试验相比,符合率达98.8%。因此,我们认为,该法完全可以代替常量中和试验用于BVD/MD的临床检疫。     

猪繁殖与呼吸障碍综合症的防治(下)

(接上期)5.1.3血清学检查可用四种方法检测血清中的PRRS病毒抗体。免疫过氧化物酶试验(IPMA):本方法特异性和敏感性较好,但操作复杂、费用高;间接荧光抗体试验(免疫荧光染色法-IFA):本方法可最早于感染后6d,一般于感染后两周检出抗体,抗体效价于感染后5～6周达到峰值(1∶40000);血清中和试验(SN):因SN抗体比IFA出现得晚,所以本法对急性感染的检出率较低。Yoon氏等于1994年对本法进行了改进,加入了20%的新鲜猪血清,从而提高了本法的敏感性,可于感染后10d左右检出抗体;酶联免疫吸附试验(ELISA):本法的特异性比IPMA法更敏感,且操作…     

狂犬病病毒核蛋白的原核表达及间接ELISA方法的建立

将狂犬病病毒核蛋白(N)与麦芽糖结合蛋白(MBP)在大肠杆菌中融合表达。采用Western blot和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测该重组融合蛋白的抗原性,并建立了间接ELISA方法检测狂犬病病毒特异性抗体。ELISA结果与快速荧光抑制试验(RFFIT)检测的中和抗体进行比较,RFFIT检测的中和效价与ELISA检测的OD值相关性很好(r=0.943 6),并且ELISA的敏感性和特异性分别为93.4%和100%。     

三种猪伪狂犬病抗体监测方法的比较

本试验以伪狂犬病病毒(PRV)Bartha-k61制备灭活疫苗,接种PRV抗体阴性猪,然后用g B ELISA抗体检测法、中和抗体指数法和中和抗体法进行效果监测。结果显示:三种方法都能检测到疫苗接种后发生了免疫应答,但以中和指数值和中和抗体值来表示猪群免疫效果更为准确,g B ELISA抗体阳性率不能作为群体免疫效果指标。     

犬瘟热鉴别诊治(四)

(接上期) 3.3.3 血清学检查 中和实验、荧光抗体法、琼脂扩散试验和酶标抗体法都可用于诊断本病. 血清中和实验:将被检血清稀释后加入病毒,25℃作用2h后,与制备好的犬肾或绿猴肾细胞悬液混合接种于微量培养板,5%CO2条件下,35℃～36℃培养3d,染色检查CPE.     

应用三种方法筛选猪瘟抗体阴性猪的比较试验

为了寻找筛选猪瘟抗体阴性猪更简便的方法,本试验应用猪瘟中和试验(SN)、阻断ELISA和正向间接血凝(IHA)三种方法分别对170份未经猪瘟活疫苗免疫的仔猪血清进行猪瘟抗体检测。结果显示,SN、ELISA和IHA检测出的猪瘟阴性血清分别为144份、150份和131份,表明三种检测方法有较好的符合率,其中SN与ELISA的检测符合率为90.59%,SN与IHA的检测符合率为82.94%,而ELISA法与另两种方法比较阴性符合率最高。本结果表明,ELISA法具有较高的敏感性,适合应用于猪瘟活疫苗安全检验抗体阴性猪的筛选。     

法氏囊疫苗免疫效果三种不同评价方法的比较

为了选出法氏囊疫苗免疫效果评估的合适方法,本研究使用酶联免疫吸附试验(ELISA)、琼脂糖扩散试验(AGP)和中和抗体检测3种方法对6种法氏囊灭活疫苗免疫后28 d的抗体水平进行评估,同时,对采血鸡进行攻毒,攻毒后4 d剖检所有鸡,观察法氏囊病变,评估3种抗体水平与攻毒保护之间的相关性;结果显示,ELISA和AGP方法检测免后血清结果相对较高,中和试验方法检测免后抗体值较低;ELISA和AGP方法检测疫苗免后抗体水平与攻毒保护结果基本一致,使用中和试验方法检测免后抗体与攻毒保护相关性较差;建议在实际生产中使用ELISA和AGP方法进行法氏囊疫苗免疫效果的评估。     

ELISA与FAVN方法检测犬狂犬病抗体的比较

比较酶联免疫吸附试验(ELISA)与细胞培养病毒中和试验(FAVN)检测狂犬病疫苗免疫后血清抗体.将40只犬免疫兽用狂犬病疫苗后,第14 d静脉采血分离血清,分别采用ELISA法和国际贸易指定试验FAVN法检测血清样品,试验犬免疫第21 d攻击狂犬病毒BD06株.结果表明,两种方法检测结果差异不显著(p≥0.05,p=0.19),FAVN、ELISA法检测狂犬病抗体与攻毒试验结果的阳性符合率均为100%.     

伪狂犬病病毒囊膜蛋白ISCOMs免疫原性测定

应用伪狂犬病病毒囊膜蛋白与Quil A结合制备囊膜蛋白免疫刺激复合物(PRV-ISCOMs)，并通过ELISA、血清中和试验和淋巴细胞转化试验(Brdu-ELISA法)测定其诱导小鼠体液和细胞免疫应答水平。结果如下：1)小鼠分别接种3、7、10ug的PRV-ISCOMs后，于接种后PI7d血清中可测出ELISA IgG而抗体，随后抗体水平逐渐升高。间隔21d加强免疫后，FLISA IgG抗体水平进一步提高，且中和抗体效价均在1：22以上，而未加佐剂的囊膜蛋白对照组均无中和抗体；2)淋巴细胞转化试验初步结果表明PRV-ISCOMs能诱导小鼠的细胞免疫应答。3)免疫保护力测定显示免疫鼠能抵抗强毒攻击。上述结果表明PRV-ISCOMs具有良好的免疫原性，能诱导小鼠的体液免疫和细胞免疫应答。     

鸡马立克氏病病毒(MDV)单克隆抗体(McAb)的研究——Ⅰ.抗血清Ⅰ型MDV-McAb的制备及其主要特性的研究

将MDV京-1株强毒高温致弱毒株(B-1/at)感染的鸡胚成纤维细胞(CEF)培养物经冻融、超声波裂解和差速离心制成粗提高毒抗原,免疫6～8周龄雌性BALB/C小鼠。取免疫鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,融合率为66％。用间接免疫荧光(IFA)法和间接ELISA法进行筛选,结果阳性率为25％,特异性阳性率为10.7％。通过有限稀释法克隆出D_(11)~3、D_(12)~3、和H_9~3三个分泌抗血清Ⅰ型MDV的McAb杂交瘤细胞株,其核内染色体数D_(11)~3为103±6条,D_(12)~3为96±6条,分泌的抗体均为IgG_1,k链。琼脂扩散试验(AGP)表明,无论有无聚乙二醇(PEG6000)存在,这些McAb均不产生特异性沉淀线,其IFA阳性反应能被特异性阳性血清阻断,经IFA、ELISA试验、IFA吸收试验和IFA、ELISA阻断试验等证明,这些McAb只与血清Ⅰ型MDV反应,不能与血清Ⅱ型MDV、血清Ⅲ型HVT和鸡的多种其它病毒发生交叉反应,也不与猪伪狂犬病病毒(Prv)双城株发生交叉反应,D_(12)~2株McAb有较明显的中和活性。经体内、外连续传代和冻存、复苏,两株细胞的分泌抗体能力稳定,     

影响病毒补体结合试验与中和试验的因素

补体结合试验与中和试验是血清学的诊断方法,许多家畜病毒病如口蹄疫、狂犬病,马脑脊髓炎可用补体结合试验帮助诊断,补体结合试验已被广泛的应用于人类及动物病毒疾病的流行病学及病原学的研究。中和试     

单克隆抗体捕捉ELISA法检测法氏囊病毒抗体

本文建立了单克隆抗体捕捉ELISA法(mAb-ELISA)来检测鸡血清中传染性法氏囊病病毒(IBDV)抗体,并与常规ELISA进行了比较。用上述两种ELISA法和血清中和试验(SN)检测鸡血清,发现SN与mAb-ELISA之间相关率为100％(49/49),而SN与常规ELISA之间的相关率为81.6％(40/49)。在 mAb-ELISA中,所有SN抗体阴性血清的光密度值都很低(<0.05),其光密度值与SN的滴度密切相关。而在常规ELISA中,SN抗体阴性血清出现不同的光密度值,其范围为0.06—0.32。因此,对于IBD阴性鸡血清来说,mAb-ELISA比常规ELISA非特异性反应更低。     

应用LSDV-ELISA抗体检测试剂盒检测羊痘疫苗免疫牛血清抗体水平

目前国内尚无商品化的牛结节性皮肤病疫苗，对于该病的防控，我国采用羊痘疫苗进行紧急免疫。为了验证牛结节性皮肤病病毒ELISA抗体检测试剂盒对羊痘疫苗免疫血清抗体水平检测的适用性，本研究采用实验室试制的牛结节性皮肤病病毒ELISA抗体检测试剂盒和病毒中和试验对羊痘病毒活疫苗免疫血清、在研牛结节性皮肤病灭活疫苗（山羊痘AV41株）免疫血清进行抗体水平评价。结果显示，对于羊痘活疫苗免疫血清，ELISA方法和病毒中和试验方法对免疫15d抗体阳性率分别为84.4%和75.6%，免疫30d抗体阳性率分别为100%和95.6%，免疫60d抗体阳性率分别为97.8%和91.1%；与病毒中和试验符合率为86.1%。对于牛结节性皮肤病灭活疫苗（山羊痘AV41株）免疫血清，ELISA方法和病毒中和试验方法对一免28d抗体阳性率分别为64%和56%，二免28d抗体阳性率分别为94%和88%，二免42d阳性率均为100%；与病毒中和试验符合率为86.5%。试验证明，实验室试制的牛结节性皮肤病病毒ELISA抗体检测试剂盒与病毒中和试验符合率较高，检测结果较为一致，且本试剂盒敏感性高于病毒中和试验。因此本试剂盒可用于...     

ABC-ELISA检测桑蚕浓核病毒(DNV)简报

生物素——亲和素系统(Biotin-AvidinSystetem.BAS)最近几年发展起来的一种新型生物反应放大系统,具有很高的灵敏度、特异性和稳定性,在免疫化学等领域得到广泛应用。BAS与酶联免疫吸附试验(ELISA)相结合的ABC-ELISA法可提高普通ELISA的敏感性,能同放射免疫     

用单克隆抗体分析牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的抗原变异

牛病毒性腹泻(BVD)在世界上是经济损失比较严重的牛病毒性疾病,尽管可用疫苗来预防但结果不甚理想。究其原因,可能是由于疫苗保护力差,也可能是由于BVD毒株抗原变异。本研究的口的就是利用单抗中和试验和免疫荧光试验检测收集于不问地区BVD病毒分离物,从而找出病毒抗原变异的证据。     

猪瘟活疫苗(脾淋源)污染外源性兔出血症病毒的检测与启示

在进行2批猪瘟活疫苗（脾淋源）效力检验时,出现效力检验家兔突然死亡现象,为了查明家兔死亡原因,采用无菌检验、支原体检验、血凝试验、兔体中和试验、酶联免疫吸附试验（ELISA）对疫苗或注苗后死亡家兔肝脏、脾脏混合病料进行了检测。结果显示,疫苗的无菌检验、支原体检验结果均为阴性;疫苗及注射疫苗死亡家兔肝脏、脾脏混合病料具有较低的血凝价,血凝试验结果均为可疑;在兔体中和试验中,中和组家兔2／2健康存活,未中和的疫苗对照组家兔2／2死亡;疫苗及注射疫苗死亡后家兔肝脏、脾脏混合病料的ELISA检测结果均为阳性。检测结果证实疫苗中含有兔出血症病毒（Rabbit Haemorrhagic Disease Virus,RHDV）。猪瘟活疫苗（脾淋源）污染RHDV的现象启示：应该加强猪瘟活疫苗（脾淋源）抗原制备过程的控制;同时有必要对猪瘟活疫苗（脾淋源）质量标准进行修订使之进一步补充完善。     

传染性法氏囊炎病毒(IBDV)血清Ⅰ型和血清Ⅱ型抗体的鉴别检测

利用血清中和试验(VN),酶联免疫吸附实验(ELISA)和琼脂扩散沉淀试验(AGP)对IBDV血清Ⅰ型和血清Ⅱ型抗体进行鉴别检测。被检血清来自用活毒攻毒鸡和用灭活油佐剂疫苗免疫鸡,血清Ⅰ型和血清Ⅱ型两者之间抗体的差异用VN试验很容易鉴别检出,但用ELISA方法却不能区分两者之间的差异。AGP试验更不能令人满意。目前用于检测IBDV抗体水平的方法主要有VN、AGP和ELISA等。VN试验不仅可鉴别检测血清Ⅰ型和血清Ⅱ型IBDV抗体,而且可鉴别检测同一血清型内不同毒株的抗体。ELISA也同样用于检测鸡的IBDV抗原和抗体,并被广泛应用于测定大型鸡场IBDV的免疫状态。此报道的主要目的是对比ELISA,AGP试验和VN试验检测IBDV血清Ⅰ型和血清Ⅱ型特异性抗体之间差异的敏感性。     

疫情血清学监测的技术支持

血清中和试验 动物受到病毒感染后,体内产 生特异性中和抗体,并与相应的病 毒粒子呈现特异性结合,因而阻止 病毒对敏感细胞的吸附,或抑制其 侵入,使病毒失去感染能力。中和 试验是以测定病毒的感染力为基 础,以比较病毒受免疫血清中和后 的残存感染力为依据,来判定免疫 血清中和病毒的能力。 酶联免疫吸附试验(ELISA) ELISA 是酶联免疫吸附剂测定 的简称。它是继免疫荧光和放射免 疫技术之后发展起来的一种免疫酶 技 术 。 　　　　　　原理 ELISA 的基础是抗原或抗体的 固相化及抗原或抗体的酶标记。结 合在固相载体表面的抗原或…     

用微量间接血凝试验检出牛传染性鼻气管炎(IBR)病毒血清抗体的试验报告

用于检出牛传染性鼻气管炎病毒血清抗体的最普通方法是病毒——血清中和试验,此法检出的抗体水平较低,且费钱、费时,手续繁锁,很难适应港口检疫的需要.微量间接血凝试验(Micro—Passive hemagglutin～(a)tion·test简写MPH)为我们提供了一种简便、快速、敏感的血清学试验方法,很有希望取代中和试验而成为新的常规检疫手段.本文着重介绍微量间接血凝试验的操作程序,同时,用MPH试验与中和试验进行了比较.     

DOT—ELISA检测猪瘟免疫抗体的研究

本文成功地建立了Dot—ELISA(斑点酶联免疫吸附试验)检测猪瘟免疫抗体,经猪丹毒、猪巴氏杆菌高免血清对照及猪瘟强毒攻毒试验证实;Dot—ELISA检测猪瘟免疫抗体是特异的。Dot—ELISA、ELISA和兔体中和三种方法比较,Dot—ELISA法具有简便、快速、敏感性高,特异性强。用Dot—ELISA法检测115头免疫猪血清抗体,免疫抗体在效价1:2—1:128之间,1:32—1:64以上滴度占95％。猪瘟攻毒试验结果:免疫猪的猪瘟免疫抗体保持在1:32以上,均能抗过猪瘟强毒的攻击。