贵州鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定及耐药性分析

从贵州省临床疑似鸭传染性浆膜炎发病鸭鹅中分离病原菌,经细菌分离培养、细菌形态、培养特征及生化试验,初步鉴定出疑似鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)20株,经PCR和动物接种试验,其中9株鉴定为RA。对不同地区分离到的这9株菌进行血清型鉴定和15种常规抗菌药物的药敏试验。结果发现,9株RA中4株为血清2型,其余5株暂未鉴定出血清型;9株分离株中,对吡哌酸、链霉素、卡那霉素和红霉素等耐药的菌株比例为80%以上,对先锋霉素高度敏感的菌株比例较高。结果表明,本次分离的RA菌株生化试验鉴定结果与其他地区存在一定差异,不同地区分离到的RA对不同抗菌药的敏感程度存在较大差异性。本研究结果为该地区鸭传染性浆膜炎的药物防制提供了很好的理论依据。     

湖北部分地区鸭疫里氏杆菌的分离鉴定

对湖北省部分地区鸭疫里氏杆菌(RA)进行分离鉴定.应用胰蛋白大豆琼脂(TSA)培养基的分离培养及染色试验、生化试验、PCR鉴定,得到86株RA.染色观察各地RA分离株的细菌形态一致,符合RA特征;生化试验显示86株RA的生理生化特征相似,基本符合RA特征;应用建立的PCR技术均可从这些菌株扩增到RA的特异性基因片段.通...     

鸭疫里默氏杆菌贵州分离株的耐药性及致病性分析

从贵州三穗地区某鸭场临床疑似鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)感染的病死鸭体内分离得到6株病原菌,经细菌形态观察、生化试验和PCR鉴定确定为RA。对6株RA分离株的血清型鉴定、耐药性及致病性试验,结果表明:6株分离菌中有4株为血清2型,其余2株血清型未定;所有分离株对大环内酯类和氨基糖苷类药物耐药,而对青霉素类和头孢类药物高度敏感;将血清2型RA菌株以9×107cfu/m L剂量经肌肉注射后可导致雏鸭发病死亡,病死鸭表现典型的鸭疫里默氏杆菌病临床症状。结果表明,贵州三穗地区主要流行血清2型RA,且对多种抗生素呈多重耐药且致病性强,应加强对血清2型RA的监测和防控。     

沧州地区鸭疫里默氏菌分离鉴定及其药敏性分析

从河北沧州地区不同养鸭场的病死鸭中分离到7株细菌,经染色镜检、生化试验和血清型鉴定,确定7株均为2型鸭疫里默氏菌(RA)。经药敏试验发现7株RA分离株对氟苯尼考、恩诺沙星、硫酸卡那霉素均敏感,而对青霉素、环丙沙星、磺胺间甲氧嘧啶钠及黏杆菌素耐药。     

Ⅰ型鸭疫里默氏杆菌的分离与鉴定

从扬州仪征某樱桃谷肉鸭鸭场病死鸭的肝、脾、脑、心血中分离到9株细菌,经对分离菌进行染色、形态观察、生化鉴定及凝集试验,其中5株鉴定为Ⅰ型鸭疫里默氏杆菌（Rimerella anatipestifer,RA）。经动物回归试验,表明该菌对雏鸭有较强的致病力。     

鸭疫里默氏菌的分离鉴定及其对SPF鸭的致病性研究

为研究鸭疫里默氏菌(RA)对SPF鸭的致病性,本实验室从不同省份疑似RA感染鸭场分离到4株细菌,经菌落形态观察、染色镜检、生化鉴定确定为RA。药敏试验表明这4个分离株对嗯诺沙星、氧氟沙星和先锋霉素V相对敏感,但对卡那霉素和庆大霉素均耐药。外膜蛋白A(OmpA)基因的克隆测序结果显示,4个RA分离株的ompA基因全长均为1 164 bp,编码387个氨基酸;核苷酸同源性为89%～100%。将5×108cfu的HLG1分离株经颈部皮下接种SPF鸭,病死SPF鸭的心、肝、脾、肺、脑和肾具有典型的病变。RA的分离鉴定技术为SPF鸭群RA的检测和监测以及为培育和净化SPF鸭作为RA的致病机理和疫苗研究中的实验动物模型奠定了基础。     

一起番鸭鸭疫里默杆菌与新城疫病毒混合感染的诊断

为了对吉林省查干湖地区某番鸭养殖场的患病番鸭进行诊断,将经临床诊断疑似新城疫(ND)的番鸭组织病料通过细菌与病毒分离试验,成功分离到1株细菌和1株病毒。通过镜检观察、生化试验、HA与HI试验、分子生物学试验等,鉴定分离到的细菌和病毒为鸭疫里默杆菌(RA)和新城疫病毒(NDV)。结合临床诊断与实验室诊断,确诊番鸭死亡原因系RA与NDV混合感染所致。     

沛县鸭传染性浆膜炎的病原分离鉴定及药敏试验

收集沛县具有典型鸭传染性浆膜炎症状的34份病死鸭进行细菌的分离培养。总共得到18株疑似鸭疫里默氏杆菌（RA）,从中随机选取10株RA进行生化鉴定及动物回归试验,经确认后使用本地区常见的抗菌药进行了纸片法药敏试验,结果发现RA分离菌株对头孢噻肟、氧氟沙星、阿莫西林＋棒酸等药物敏感度较好,对氟苯尼考、丁胺卡那、阿奇霉素等药物敏感度很低。研究结果为该地区鸭传染性浆膜炎的药物防治提供了很好的理论依据。     

鸭疫里默氏菌的分离鉴定及病理组织学观察

从吉林某鸭场疑似鸭疫里默氏菌感染病/死鸭的脑部、心血分离到一株革兰阴性小杆菌,经细菌形态、生理生化、病理学观察、血清型鉴定与动物回归等试验,结果均证实分离株为RA,并将其命名为JL-RA1。该分离株对青霉素、替米考星、氟苯尼考高度敏感;而对头孢他啶、头孢曲松、磷霉素等多种药物完全耐药。     

徐州地区鸭疫里氏杆菌的分离鉴定与药敏试验

对2010年8—10月间来徐州市畜牧兽医站禽病门诊部就诊病例中具有典型"三炎"症状的42份病死鸭进行细菌的分离培养,共得到36株疑似鸭疫里氏杆菌(RA),从中随机选取12株细菌进行生化鉴定及动物回归试验,均确定为RA;用本地区常用抗菌药进行了纸片法药敏试验,结果发现本地区RA分离菌株对磷霉素、阿莫西林+棒酸、氧氟沙星等药物高敏,对多西环素、庆大霉素、氟苯尼考、阿米卡星等常规药物低敏,对头孢曲松、红霉素、新霉素等的敏感率均有所下降。     

Studies on the prevalence of Riemerella anatipestifer in the upper respiratory tract of clinically healthy ducklings and characterization of untypable strains

A total of 44 bacterial strains obtained from 49 clinically healthy ducklings of different ages originating from four different farms were identified as members of the species Riemerella anatipestifer (RA) using conventional biochemical test methods. Numerical analysis of the whole-cell fatty acid patterns of these isolates resulted in two different clusters, one of which showed a similar pattern to that of the type strain of RA. Strains having a different fatty acid methyl esters (FAME)-profile (cluster II) were designated R. anatipestifer-like (RA-like). Sequencing of 16S rRNA genes of RA-like field isolates revealed 99% identity to RA. The significance of these observations are discussed. The present findings document for the first time that RA seems to represent a normal part of the pharyngeal flora of healthy Pekin ducks.     

乳白香青内生解磷菌的筛选鉴定及解磷特性研究

选择东祁连山高寒草地优势植物乳白香青为试验材料,分离和筛选内生解磷细菌,并对筛选的解磷细菌进行了鉴定,在此基础上,研究了其对玉米的促生作用。结果表明,从乳白香青植株中分离到4株内生解磷菌,解磷量(P₂O₅)为65.24～315.36 mg/L,其中菌株RA8的解磷能力最高;经形态特征、生理生化特性和16S rDNA 序列系统发育学分析,初步鉴定RA8为副球菌属细菌;RA8代谢产酸,但解磷能力与培养液的pH值之间无相关性,产生的非酸类代谢物质是其解磷的主要机制;RA8可以与土壤中的土著微生物互惠协作,增强RA8的解磷能力;经RA8处理的玉米在第70天和第100天生物量显著高于对照(P<0.05),第100天株高极显著高于对照(P<0.01),即RA8对玉米的生长有明显的促进作用。     

鸭疫里默杆菌单克隆抗体的研制及免疫胶体金检测方法的建立

为快速检测临床样品中鸭疫里默氏杆菌（RA）,建立检测RA的免疫胶体金方法。以血清1型和2型RA分别免疫BALB／c小鼠,通过细胞融合技术制备单克隆抗体。经ELISA筛选获得4株单克隆抗体2F7、3G9、5G7和2E6,5G7可与1、2、3、11型RA交叉反应,而其他3株与1、2、3型RA有交叉反应。选取单克隆抗体5G7进行纯化和胶体金标记,制备免疫胶体金试纸条,可检测1、2、3、11型RA,而与禽巴氏杆菌、大肠杆菌、沙门菌无反应。对RA模拟样品最低检出剂量为6×10^3 CFU细菌,与细菌分离方法相比,免疫胶体金试纸条对临床病料中RA检测的敏感性为100％,符合率为88．9％。     

鸭疫里氏杆菌病研究进展

鸭疫里氏杆菌病是一种主要侵害雏鸭、雏火鸡等多种禽类的急性或慢性传染病.2周龄～7周龄雏鸭最易感,主要引起小鸭纤维素性心包炎、肝周炎和气囊炎,发病率为5%～90%,病死率高达90%.鸭疫里氏杆菌为革兰氏阴性、不运动、不形成芽孢、无鞭毛的小杆菌,有21个血清型,且各血清型缺少交叉保护.鸭疫里氏杆菌病已成为危害养鸭业最为严重的细菌性疾病之一,造成了巨大的经济损失.文章对鸭疫里氏杆菌生物学特性、实验室诊断、血清型鉴定和疫苗免疫方面进行了较为系统的综述.     

贵州省三穗县鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定、毒力基因检测及耐药性分析

为了解贵州省三穗县鸭疫里默氏杆菌（Riemerella anatipestifer，RA）的流行血清型、毒力和耐药情况，本试验从贵州省三穗县6个规模养鸭场临床疑似RA感染的病鸭体内分离出6株分离菌，对病原菌进行分离鉴定、毒力基因检测和耐药性分析。细菌分离鉴定结果显示，分离菌在巧克力琼脂培养基上长出表面光滑、圆形半透明的滴状菌落；革兰氏染色呈阴性短小杆菌，瑞氏染色呈两极浓染；分离菌均不具运动性，尿素、触酶和氧化酶试验均为阳性，符合RA生化特性，将6株分离菌分别命名为SS-RA1~SS-RA6；6株分离菌的16S rRNA基因序列与NCBI上RA参考菌株的基因序列相似性≥98%，说明6株分离菌均是RA；SS-RA1~SS-RA4为血清2型且含有8种毒力基因（OmpA、CAMP、wza、AS87_04050、Fur、SIP、TbdR1和luxE基因），SS-RA5和SS-RA6为血清11型，缺失AS87_04050基因，仅含有上述其余7种毒力基因；动物回归试验结果显示，攻毒组雏鸭均全部死亡，对照组雏鸭未表现明显临床症状，表明6株分离菌对雏鸭均有致病力；药敏试验结果显示，6株分离菌仅对羧苄西林、哌拉西林、头孢他啶、头孢氨苄、头孢曲松、头孢拉定和头孢哌酮7种抗菌药物敏感，对其他13种抗菌药物均表现不同程度的耐药，对氨基糖苷类和大环内酯类抗菌药物的耐药率为100%。本试验成功分离得到6株RA，为贵州省三穗县鸭疫里默氏杆菌病的疫苗选择和药物防治提供理论依据。     

Isolation and characterization of atypical Riemerella columbina strains from pigeons and their differentiation from Riemerella anatipestifer

Riemerella columbina (RC) and Riemerella anatipestifer (RA) belong to the genus Riemerella within the family Flavobacteriaceae. While RA is a well-described pathogen of waterfowl and other avian species, only little is known about RC. Previous work reporting the isolation of RC from internal organs of clinically diseased pigeons suggested a potential pathogenic role in this avian species. In this study we examined pharyngeal swabs collected from pigeons and found RC to be widely distributed also among healthy birds. Further characterization of 81 RC-isolates revealed several atypical strains, which differed from all previously described RC-isolates by the lack of aesculin-hydrolysis activity (17 isolates) or by expression of yellow or orange pigmentation (6 isolates). Sequence analysis of the 16S rRNA and outer membrane protein A (ompA) gene supported the affiliation of these strains to the species RC. Aesculin-hydrolysis negative isolates were found to be biochemically indistinguishable from RA. We demonstrated that bacterial fingerprinting using matrix assisted laser desorption/ionisation–time of flight mass spectrometry (MALDI–TOF MS) analysis is useful for the identification and differentiation of RC and RA.     

鸭疫里默氏杆菌贵州流行株蜂胶灭活疫苗制备

【目的】制备鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)贵州流行株蜂胶灭活疫苗。【方法】选取RA血清2型贵州流行株(RA-SS-8株)为基础菌株,依次利用分光光度法和平板计数法测定细菌生长曲线,再进行灭活条件筛选,以蜂胶为佐剂制备RA贵州流行株蜂胶灭活疫苗,并进行无菌检验、安全性检验及免疫鸭攻毒保护性试验。【结果】分光光度法测定RA-SS-8株菌液D_{600 nm}值随培养时间变化显示,细菌在0~3 h时增殖缓慢,在3~10 h时增殖趋势明显加快,在10 h以后增殖逐渐趋于平缓,随着培养时间的延长,细菌最终进入衰亡期;平板计数法结果显示,RA-SS-8株D_{600 nm}值为0.1~0.8时,该菌处于对数生长期,且D_{600 nm}值与活菌数呈现良好的线性关系;RA-SS-8株最佳灭活条件为0.2%甲醛溶液、37 ℃灭活12 h;蜂胶灭活疫苗含菌量为3.8×10⁹ CFU/mL,蜂胶干物质含量为10 mg/mL;无菌检验巧克力琼脂培养基上未见菌落生长;安全性检验以2倍免疫剂量接种雏鸭在观察期内未表现出不良反应,大体病变观察未见明显病变;免疫鸭攻毒保护性试验显示,蜂胶灭活疫苗免疫组鸭对RA-SS-8株的攻击后保护率为70%,蜂胶灭活疫苗对试验鸭心脏、肝脏组织均具有良好的保护效果。【结论】本研究成功制备了RA贵州流行株蜂胶灭活疫苗,为蜂胶灭活疫苗制备和动物免疫试验奠定基础。     

黄连汤对鸭疫里默氏菌的抑菌作用及对菌体形态的影响

研究中药复方黄连汤水提醇沉浓缩物(Ethanol extracts ofCoptidis rhizomadecoction,EeCrd)对鸭疫里默氏菌(Riemerella anatipestifer,RA)的体外抑菌规律及其对菌体形态的影响。黄连汤经水提醇沉后,减压浓缩,制成含生药176g.L-1的EeCrd原液。用PBS将原液倍比稀释成88、88×2-1、88×2-2……88×2-9g.L-1等11个梯度浓度的药液。用纸片扩散法和液体倍比稀释法研究EeCrd完全抑菌时的最小抑菌浓度和不完全抑菌时的亚抑菌浓度;取88和88×2-3g.L-1EeCrd浓度组药液分别作用17和3、6、17h后的细菌,用透射电镜观察菌体形态的变化。纸片扩散法和液体倍比稀释法测定的EeCrd完全抑制RA时的最小浓度均为88×2-2g.L-1,不完全抑菌时亚抑菌浓度为88×2-3g.L-1;88×2-4g.L-1以上稀释度EeCrd基本无抑菌活性;50μL的88g.L-1浓度组的EeCrd作用RA17h后,RA菌体浓缩,变小,最终死亡;50μL的88×2-3g.L-1浓度组的EeCrd作用RA3、6、17h后,RA菌体长度变长,细胞壁变薄,菌内颜色变浅,皱褶减少,纹理不均匀,菌体干瘪、折叠、弯曲,最终死亡。EeCrd可能通过破坏RA外膜结构来抑制细菌增殖。