宁夏部分养猪小区病毒病流行现状调查及分析

针对宁夏2007年以来部分地区调入生猪频繁发生猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)、猪瘟(classic swine fever,CSF)等疫情,对猪存栏较为集中的地区进行PRRS、CSF等的病原学调查,并对其发展趋势进行分析。采用ELISA方法对297份血清样本进行抗体检测;采用RT-PCR方法对297份血清和送检的78份病料组织进行病原学检测。血清学调查结果显示,PRRSV隐性感染阳性样品111份,阳性率为37.4%。其中母猪带毒率较高,仔猪次之,育成猪最低,均不表现临床发病;病原学调查结果表明,对血清学检测的111份PRRSV阳性样本进行RT-PCR检测,阳性率为100%;病料组织中单重感染PRRSV阳性样品18份,阳性率为23.0%,属于美洲型,与CH-1a遗传关系较近,归属同一基因亚型;猪群中PRRSV、CSFV、PCV-2、PRV和PPV的混合感染情况比较严重,以二重感染为主,三重感染次之。调查发现,PRRSV隐性感染十分普遍,严重危害着宁夏的养猪业;同时由于其它病原微生物的混合感染日趋复杂化,使得对猪病的防控难度也越来越大。     

宁夏猪流感血清学调查

采用血凝抑制试验对宁夏22个县（区、市）43个规模猪场、10个屠宰场、197个散养户的1710份猪血清样品进行了猪流感病毒H1、H3亚型抗体的检测。结果显示,被调查的样品中,H1亚型抗体阳性率为11．81％,H3亚型抗体阳性率为0．46％,HI＋H3亚型抗体阳性率为0．35％。表明在所调查的宁夏猪场中,猪流感病毒的感染较为普遍,大部分猪场都曾被H1、H3亚型感染。     

H1和H3亚型猪流感病毒二重TaqMan-MGB探针荧光RT-PCR检测方法的建立

根据H1和H3亚型猪流感病毒(SIV)血凝素(HA)编码基因的保守序列,分别设计合成特异性引物和Taq Man-MGB探针,建立了一种检测H1和H3亚型SIV的二重荧光RT-PCR方法。结果显示,该方法仅对H1和H3亚型SIV呈特异性扩增,对H9亚型SIV、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(SFV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)无交叉扩增反应;用该方法检测H1和H3亚型SIV的HA基因的RNA标准对照(SIV-H1-RNA,SIV-H3-RNA),最适线性检测范围分别为3.7×10~1~3.7×10~8拷贝数/反应和3.4×10~0~3.4×10~8拷贝数/反应,最低检出限分别为38和34个拷贝数;该方法的组内试验和组间试验的变异系数均小于2.0%,显示其具有良好的可重复性。用该方法对520份进口猪的鼻拭子样本和78份国内猪鼻拭子样本进行SIV检测发现,进口猪鼻拭子样本的SIV检测结果均为阴性,12份国内猪鼻拭子样本的H1亚型SIV检测结果为阳性,5份国内猪鼻拭子样本的H3亚型SIV检测结果为阳性。本方法的建立为H1和H3亚型SIV检测提供了一种快速、敏感和特异的技术手段。     

一株H1N1亚型猪流感病毒的分离鉴定及生物学特性分析

为调查南京地区猪流感流行情况,本研究于2011年2月～5月期间从南京某屠宰场采集健康猪的鼻拭子和肺脏组织样品共690份,常规无菌处理后进行RT-PCR检测,将检测为阳性的样品接种9日龄～11日龄SPF鸡胚分离猪流感病毒(STV).对分离株进行血凝试验、EID50测定、HA及NA基因测序分析和感染小鼠及猪体试验.结果有18份样品RT-PCR显示为SIV阳性,但只有一株可在SPF鸡胚中稳定增殖.该病毒分离株具有凝集0.5％鸡红细胞的活性,EID50为10-6.32/0.1 mL,基因测序显示其HA、NA基因片段均与09年H1N1型流感流行株A/California/04/2009 (H1N1)高度同源,将其命名为A/Swine/Nanjing/50/2011 (H1N1).小鼠人工感染试验表明该分离株可引起小鼠死亡(3/10),猪体人工感染实验显示该分离株还能够引发猪体明显的流感症状及肺部病变.该病毒的分离鉴定及HA、NA基因序列分析为进一步调查SIV的流行规律提供了基础数据.     

石河子垦区规模猪场H1N1亚型猪流感血清学调查

为了解石河子垦区规模猪场猪流感病毒H1N1亚型(SIV)感染情况,采集石河子垦区6个规模猪场血清,采用血清学方法进行HIN1亚型猪流感病毒抗体检测,同时调查混合感染情况。结果:186份血清样品H1N1亚型SIV抗体阳性率为27.42%(51/186),6个猪场感染阳性率为50%(3/6);51份阳性血清中,82.35%(42/51)感染了猪肺炎支原体(Mhp),80.39%(41/51)感染了猪圆环病毒2型(PCV2),29.41%(15/51)感染了猪胸膜肺炎放线杆菌(APP),50.98%(26/51)感染了副猪嗜血杆菌(HPS),62.74%(32/51)感染了猪链球菌2型(SS2)。说明垦区部分规模猪场存在H1N1亚型SIV感染情况,且混合感染情况比较严重。     

宁夏猪流感血清学调查

采用血凝抑制试验对宁夏22个县(区、市)43个规模猪场、10个屠宰场、197个散养户的1710份猪血清样品进行了猪流感病毒H1、H3亚型抗体的检测。结果显示,被调查的样品中,H1亚型抗体阳性率为11.81%,H3亚型抗体阳性率为0.46%,H1+H3亚型抗体阳性率为0.35%。表明在所调查的宁夏猪场中,猪流感病毒的感染较为普遍,大部分猪场都曾被H1、H3亚型感染。     

广东省部分地区规模化猪场猪流感病毒感染的血清学调查与分析

为了解广东省规模化猪场猪流感病毒(SIV)感染情况,本研究采用ELISA方法和血凝抑制试验(HI),对2011年～2012年采集的1 050份血清样品进行SIV血清学检测.两种检测方法结果显示1 050份血清样品中SIV抗体阳性率分别为50.4％(ELISA)和50.2％(HI).其中珠三角地区和粤东地区的感染率高于粤西地区.SIV亚型调查结果显示该地区流行的SIV主要为H1和H3亚型,抗体阳性率分别为39.2％和18.2％(ELISA).部分猪场存在H9亚型SIV抗体.部分猪群中同时存在H1和H3两种亚型SIV抗体,表明猪群中存在不同亚型SIV混合感染.本研究为广东省猪流感的预防提供参考依据.     

2014年-2015年粤北规模猪场H1亚型猪流感血清学调查与分析

为调查粤北地区规模化猪场H1亚型猪流感病毒的流行和感染情况,采用H1亚型猪流感抗体检测试剂盒检测2014年-2015年采自粤北25个未进行SIV免疫的规模化猪场的376份猪血清.结果表明,2014年和2015年H1亚型猪流感感染总抗体率分别为13.04％和14.58％,而 1月~3月的感染抗体阳性率分别为19.05％和25.00％.该地区H1亚型猪流感感染抗体阳性率相对较低,表现出一定的区域性特征,1月~3月感染抗体阳性率均明显高于其他月份,该地区冬季抗体阳性率相对较高.     

PCR方法对昆明地区猪流感感染状况调查

为了解昆明地区猪流感（SI）感染情况,本研究采用PCR检测方法对昆明地区的猪群进行猪流感感染状况的调查.对2013年3～5月期间的107头猪的肺脏样本进行PCR检测.SIV抗原阳性有25份,平均阳性率为23.36％,其中：昆明地区家庭散养户SIV感染率为14.58％,规模化养殖场猪SIV感染率为30.51％.这说明昆明地区SIV的感染较为普遍,尤其城市规模化猪场感染最为严重.     

2007—2011年新疆地区生猪猪瘟病毒监测初步分析

本文对2007—2011年新疆生猪的猪瘟疫病进行摸底调查,选择规模养猪场、散养户和屠宰场随机采样,采集规模场猪群的组织、血清样品2847份;采集散养户猪群的组织、血清样品3187份;采集屠宰场组织样品5643份.用RT-PCR方法进行病原学检测.结果表明,规模场猪瘟阳性检出率为4.19%;散养户猪瘟阳性检出率为6.29%;屠宰场猪瘟阳性检出率为2.82%.分析表明,散养户发病率高于规模场,屠宰场存在隐性感染猪瘟的隐患,新疆猪瘟疫病防控形势依然严峻.     

广西猪圆环病毒2型感染的流行病学调查

结合流行病学、临床症状、病理变化，采用PCR技术，对2004年1月至2005年5月采自广西14个市97个疑似猪圆环病毒2型（PCV2）感染发病猪场的197份组织病料（脾、肺、淋巴结）进行了PCV2检测；同时，对鉴定为PCV2阳性的组织病料和猪场进行了猪生殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪瘟病毒（CSFV）、猪流感病毒（SIV）和猪伪狂犬病病毒（PRV）的检测，另外，对6个地（市）11个生猪屠宰场采集的外观健康屠宰猪的295份组织样品（脾、肺、淋巴结）进行了PCV2检测。结果显示，在197份组织样品中检出PCV2阳性病料108份，平均阳性率为54．82％（108／197），阳性猪场62个，平均阳性率为63．92％（62／97）。PCV2与PRRSV、CSFV、SIV、PRV混合感染的组织病料总阳性率为42．13％（83／197），混合感染的猪场总阳性率为57．73%（56／97）。从21头外观健康屠宰猪的组织样品中检测到PCV2，阳性率为7．10％。由此可见，PCV2感染在广西猪群中已普遍存在，混合感染和健康带毒现象使病情更加复杂。     

宁夏中南部地区牛支原体病原学检测及分离鉴定

为了解宁夏中南部地区牛支原体感染及遗传变异情况,采用PCR方法,对来自宁夏中南部9个县区规模场、屠宰场和交易市场的495份牛鼻拭子样本进行PCR检测及菌株分离鉴定.结果显示:495份样本中,经PCR检出阳性59份,总体阳性率为11.92％,9个县区的阳性率为1.82％～21.82％,规模场、屠宰场、交易市场阳性率分别为...     

河南省部分地区猪流感血清学调查

采用血凝抑制试验对河南省新乡、焦作、漯河等地采集的139份猪血清样品进行了猪流感病毒H1、H3、H5、H9亚型抗体的检测。结果显示,在被调查的139份血清中,H1亚型SIV抗体阳性率为43．17％,H3亚型SIV抗体阳性率为0,H5亚型SIV抗体阳性率为2．16％,H9亚型SIV抗体阳性率为1．44％;H1＋H5亚型SIV抗体阳性率为1．44％：H1＋H9亚型SIV抗体阳性率为1．44％;H1＋H5＋H9亚型SIV抗体阳性率为0。表明在所调查的猪群中,猪流感病毒的感染较为普遍,大部分猪场都曾被H1亚型感染,部分猪群有多种亚型混合感染存在。     

2019年我国部分地区屠宰生猪旋毛虫和弓形虫检测

为了解我国部分地区屠宰生猪旋毛虫和弓形虫感染情况,2019年在广东（5个）、山东（4个）、云南（6个）等省份的15个大型、中小型生猪屠宰场,采集猪膈肌样品315份,用PCR方法进行旋毛虫和弓形虫病原学检测;在以上3省15个大型、中小型生猪屠宰场（每省5个）,采集血清样品254份,用ELISA方法进行旋毛虫和弓形虫血清学检测。结果显示：经PCR检测,采样地区所有膈肌样品均为旋毛虫阴性,仅在云南省120份膈肌样品中检出1份弓形虫阳性;经ELISA检测,采样地区血清样品的旋毛虫和弓形虫抗体阳性率分别为1.97%和2.36%,不同省份的阳性率分布不一致,中小型屠宰场阳性率均高于大型屠宰场。结果表明,广东、山东、云南等省份屠宰生猪的旋毛虫和弓形虫携带率极低,基本可以保证猪肉的产品安全;部分地区屠宰生猪存在一定的弓形虫感染抗体,尤其是中小型屠宰场,表明此类猪群需要加强饲养环节的弓形虫感染控制。本研究为保障猪肉食品安全及饲养环节的猪旋毛虫和弓形虫感染控制提供了依据和指导。     

2005～2006年广西地区猪流感的分子流行病学调查

为了解广西猪群中猪流感(Swine influenza,SI)的流行情况,本调查主要采用RT-PCR方法,对2005~2006年从12个规模猪场随机采集的530份猪鼻腔棉拭子(不同年龄段)和108个猪场送检的239份有呼吸道症状病猪的组织病料样品(肺、脾和淋巴结等)进行了SIV检测;同时,对SIV阳性组织病料样品进行了猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪瘟病毒(CSFV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)和猪细小病毒(PPV)的检测,以确定猪群中SIV的感染以及与其他病毒混和感染情况。结果显示:从不同年龄段猪的鼻腔棉拭子中均能检测到SIV,且平均阳性率为15.85%(84/530)。从11个市30个猪场54份的组织病料中检出SIV,组织病料和猪场的平均阳性率分别为22.59%(54/239)和27.78%(30/108)。SIV常常与PRRSV、PCV2、CSFV、PPV和/或PRV二重或多重混和感染,占检测样品的19.25%(46/239),其中以SIV与PCV2和PRRSV混合感染最为常见,阳性率分别占检测样品的13.81%(33/239)和8.37%(20/239)。由此可见,SIV已经感染广西猪群,且SIV常与其他病原体以混合感染的方式对广西养猪业构成潜在危害。     

泉州市2010-2012年猪繁殖与呼吸综合征的病原学调查

为初步了解该病在泉州市的流行情况,以科学有效地防控猪繁殖与呼吸综合征(PRRS),采用荧光定量RT-PCR方法对2010-2012年来自泉州市各县(市、区)养殖场(户)的212份临床疑似病例样品和441份健康生猪拭子进行PRRSV病原学检测,结果显示54份疑似病例样品为阳性,阳性率为25.47%;49份拭子样品阳性,阳性率为11.11%。将PRRSV阳性病料(拭子)进行CSFV、PCV-2、PRV检测,仅有38份样品表现为PRRSV单独感染,其他均有一种或多种其他病毒感染,占样品检测数的36.89%,混合感染的占样品检测数的63.11%。通过调查表明,PRRS感染在泉州市猪群中还普遍存在和流行,并有从单一感染向混合感染扩大的趋势。     

广东省东莞市屠宰场猪群猪链球菌2型感染及环境污染状况调查

为了解屠宰环节猪群猪链球菌2型感染及环境污染情况,评估屠宰环节猪链球菌2型传播风险,在广东省东莞市所有的10个生猪屠宰场采集570份猪扁桃体、1 200份环境拭子样品,以及120份猪胴体和120份猪内脏表面拭子样品,采用荧光PCR方法进行猪链球菌2型核酸检测。结果显示:猪扁桃体样品的猪链球菌2型阳性率为0.88%;屠宰环境拭子样品的阳性率为3.17%,其中待宰区为3.50%,屠宰区为8.50%,分割区为4.00%,屠宰工具为3.00%;在车间出入口的猪胴体和猪内脏表面拭子样品中检出猪链球菌2型阳性,其中猪胴体阳性率为0.83%,猪内脏阳性率为4.17%。结果表明,东莞市屠宰场猪群中存在猪链球菌2型感染,猪群携带的病原对屠宰加工环境以及屠宰加工产品可造成不同程度的污染。因而屠宰场存在传播猪链球菌2型的风险,需要加强对屠宰场环境及屠宰用具的清洗消毒以及相关职业人群的自身防护教育。     

2012—2013年我国部分地区猪伪狂犬病流行病学调查

[目的]了解我国主要生猪养殖地区猪群中猪伪狂犬病毒感染情况。[方法]分别采用PCR和gE-ELISA检测方法,对2012-2013年采集/送检的1127份发病猪群组织样品、14801份猪血清样品进行了病原学、血清学检测。[结果]检出PRV野毒感染病原学样品98份,总体检出率8.69%,猪场的PCR检出率为22.49%;共检测14801份血清样品,野毒感染抗体阳性样品2388份,总体阳性率为16.13%,场的阳性率为44.02%。对检测数据进行分类统计,发现华东、华中等生猪主产区猪群中均存在不同程度的PRV野毒感染,感染率呈逐年上升趋势;分析不同日龄猪群的野毒感染抗体检测数据,发现种猪的感染率较高,其次是哺乳仔猪、育肥猪。[结论]猪伪狂犬病在我国主要生猪养殖地区仍不同程度存在,提示应进一步提升猪伪狂犬病的免疫预防水平,定期进行病原学、血清学检测,做好综合防治工作。     

A型猪流感病毒TaqMan探针荧光RT-PCR检测方法的建立

根据A型猪流感病毒(SIV)的基质蛋白(M)编码基因保守序列设计合成一对特异性引物和一条Taq Man探针,建立了一种检测A型SIV的荧光RT-PCR方法。结果显示,该方法对H1N1、H3N2和H9N2亚型SIV均呈特异性扩增,对猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪流行性腹泻病毒和猪传染性胃肠炎病毒等猪的其他常见病毒无交叉扩增反应;该方法对M基因RNA对照(SIV-M-RNA)的最适线性检测范围为3.8×10~1~3.8×10~8拷贝数/反应,标准曲线方程为Y=-3.4365X+40.091,相关系数(R~2)为0.999 8,最低检出限为38个拷贝数的SIV-M-RNA。对3个不同浓度(3.8×10~3~3.8×10~5 copies/μL)的SIV-M-RNA进行组间和组内重复试验,每个浓度的Ct值变异系数均小于1.5%,具有良好的重现性。用该方法对860份进口猪的鼻拭子样本和78份国内猪场猪鼻拭子样本进行SIV检测,结果进口猪鼻拭子样本的SIV检测均为阴性,17份国内猪场猪鼻拭子样本SIV检测为阳性。本研究提供了一种快速、敏感和特异的A型猪流感病毒检测方法。     

SIV与PRRSV、CSFV、PCV-2和PRV交叉感染的检测

采用RT-PCR方法对37份疑似猪流感病毒(SIV)感染病料进行了病原学检测。同时,还运用PCR和RT-PCR方法对SIV阳性病料进行了猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)和猪伪狂犬病毒(PRV)目的基因片段的扩增。结果,扩增出了SIV特异目的基因片段,且4份病料都为混合感染,感染状况分别为SIV/PRRSV/PRV,SIV/CSFV/PRRSV三重感染,SIV/PCV-2和SIV/PRRSV二重感染。