| H1和H3亚型猪流感病毒二重TaqMan-MGB探针荧光RT-PCR检测方法的建立 |
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| 引用本文： | 王建华,陈小金,张俊哲,王玉玲,肖妍,赵丹,谭旭菲,王乃福,陈本龙,董志珍,赵祥平.H1和H3亚型猪流感病毒二重TaqMan-MGB探针荧光RT-PCR检测方法的建立[J].中国动物检疫,2016,33(10):90-94. |
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| 作者姓名： | 王建华 陈小金 张俊哲 王玉玲 肖妍 赵丹 谭旭菲 王乃福 陈本龙 董志珍 赵祥平 |
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| 基金项目： | 天津市科技支撑项目（13ZCZDNCO1300）；天津市滨海新区惠民项目（2013-BK15H013） |
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| 摘 要： | 根据H1和H3亚型猪流感病毒(SIV)血凝素(HA)编码基因的保守序列,分别设计合成特异性引物和Taq Man-MGB探针,建立了一种检测H1和H3亚型SIV的二重荧光RT-PCR方法。结果显示,该方法仅对H1和H3亚型SIV呈特异性扩增,对H9亚型SIV、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(SFV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)无交叉扩增反应;用该方法检测H1和H3亚型SIV的HA基因的RNA标准对照(SIV-H1-RNA,SIV-H3-RNA),最适线性检测范围分别为3.7×10~1~3.7×10~8拷贝数/反应和3.4×10~0~3.4×10~8拷贝数/反应,最低检出限分别为38和34个拷贝数;该方法的组内试验和组间试验的变异系数均小于2.0%,显示其具有良好的可重复性。用该方法对520份进口猪的鼻拭子样本和78份国内猪鼻拭子样本进行SIV检测发现,进口猪鼻拭子样本的SIV检测结果均为阴性,12份国内猪鼻拭子样本的H1亚型SIV检测结果为阳性,5份国内猪鼻拭子样本的H3亚型SIV检测结果为阳性。本方法的建立为H1和H3亚型SIV检测提供了一种快速、敏感和特异的技术手段。
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| 关 键 词： | 猪流感病毒 H1亚型 H3亚型 TaqMan探针 荧光RT-PCR |
Development of a Duplex TaqMan-MGB Real-time RT-PCR Assay for Detecting H1 and H3 Subtype Swine Influenza Virus |
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| Wang Jianhu,Chen Xiaojin,Zhang Junzhe,Wang Yuling,Xiao Yan,Zhao Dan,Tan Xufei,Wang Naifu,Chen Benlong,Dong Zhizhen,Zhao Xiaoping.Development of a Duplex TaqMan-MGB Real-time RT-PCR Assay for Detecting H1 and H3 Subtype Swine Influenza Virus[J].China Journal Of Animal Quarantine,2016,33(10):90-94. |
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| Authors: | Wang Jianhu Chen Xiaojin Zhang Junzhe Wang Yuling Xiao Yan Zhao Dan Tan Xufei Wang Naifu Chen Benlong Dong Zhizhen Zhao Xiaoping |
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