禽流感-新城疫重组二联活疫苗(rL-H5株)接种肉鸡后免疫抗体水平消长规律分析

我国对高致病性禽流感采取了强制免疫措施,对有效防控该病发挥了重要作用.但是由于肉鸡生长周期短、疫苗接种工作量大的压力导致一些肉鸡养殖户对禽流感的预防工作怀着侥幸心理,设法逃避疫苗接种,给我国禽流感的防控带来一定的隐患.     

一株鸡源H9N2亚型禽流感病毒的致病性及其HA基因遗传进化分析

为了解H9N2亚型禽流感病毒在新疆蛋鸡养殖场的致病性及遗传进化特点,对一株分离自蛋鸡的禽流感病毒A/Chicken/Xinjiang/01/2010(H9N2)进行了致病性及遗传进化分析。结果显示,分离株的MDT为92h,ICPI指数为1.125,IVPI指数为0.14,HA裂解位点处氨基酸序列为335 RSSRGLF342,这些特征均证实该分离株为低致病性AIV。HA基因遗传进化分析表明,该分离株在系统进化树上与A/swine/XJWLMQ/7/09(H9N2)及3株野生鸟类新疆分离株的亲缘关系最为接近,该分离株HA基因属于欧亚谱系的A/chicken/Beijing/94(H9N2)和A/chicken/Hongkong/G9/97(H9N2)的一个分支。     

鸡传染性支气管炎病毒XJ株N基因的克隆表达及抗原性初步鉴定

根据发表的鸡传染性支气管炎病毒N基因序列设计一对引物，经RT—PCR扩增得到1230bpDNA片段，将其克隆到表达载体pET-28a（＋）中，构建重组质粒pET—N，经测序鉴定正确后，将其转化感受态细胞E．coli BL21（DE3），并进行IPTG诱导表达，结果表明，重组菌可表达分子质量为50kD的融合蛋白。Western-blotting结果显示，该重组蛋白能与IBV阳性血清发生特异性的免疫印迹反应，表明该重组蛋白具有良好的免疫原性。     

2009—201O年新疆地区家禽禽流感免疫抗体监测与分析

2009--2010年,对新疆部分地区蛋鸡、肉鸡、家养水禽的养殖场随机采集血清样品10193份,活禽市场采集血清样品1620份。用HI方法对禽流感免疫抗体进行检测,结果表明：蛋鸡的H5免疫抗体合格率为33．33％～100％,其中0效价率为33．33%-80．00％;H9免疫抗体合格率为62．4%-100％,20%-33％蛋鸡场存在100％的0效价现象。肉鸡H5免疫抗体合格率为0％-100％,其中7．69%-69．6％肉鸡群中H5抗体0效价率为100％。水禽的H5免疫抗体合格率为0%-100％,有25％33．33％鸭群全部是0效价。活禽市场H5抗体效价≥410g2的比例为10．59％-83．57％,H9抗体效价至410醇的比例21．70％-67．14％。     

巴斯德毕赤酵母多拷贝整合表达组装禽流感病毒样颗粒

【目的】构建多拷贝整合表达禽流感病毒样颗粒的重组巴斯德毕赤酵母,为H5N1亚型禽流感基因工程疫苗提供基础。【方法】以巴斯德毕赤酵母GS115株18S rRNA基因(rDNA)部分序列,插入pPIC9K载体上XbaⅠ和Bsp1407Ⅰ位点间,构建多拷贝整合表达质粒p8K。再以禽流感病毒H5N1毒株基因组RNA为模板,RT-PCR扩增HA、M和NA基因,分别插入多拷贝载体p8K,构建表达质粒 p8K-HA/M/NA。表达质粒分别扩增后线性化,按比例混合,电转化GS115感受态细胞。增菌后,经遗传霉素G418抗性平板筛选、PCR鉴定携带HA、M和NA基因序列的多拷贝整合菌株。阳性菌株增菌、诱导表达、高压均质破碎后,Western-blot检测表达产物。【结果】PCR鉴定阳性的重组菌株,其细胞裂解蛋白,免疫印迹试验可检测到与HA、M₁和NA分子量一致的蛋白条带;电子显微镜可观察到大小约为80~120 nm 的病毒样颗粒,免疫鸡能产生抗禽流感病毒中和抗体。【结论】重组毕赤酵母能够多拷贝整合、表达、组装禽流感病毒样颗粒。     

商品代肉雏鸡禽流感母源抗体的检测

对新疆某一种鸡场的商品代肉雏鸡进行了禽流感母源抗体的跟踪监测。结果显示,2004年4个批次商品代肉雏鸡的禽流感母源抗体持续期随着种鸡免疫后时间的推移呈递减趋势,将同批种鸡进行二次免疫后商品代肉雏鸡抗体持续期明显增长,表明禽流感母源抗体的消长与种鸡的免疫状况具有密切的关系。2006年～2007年5个批次的商品代肉雏鸡禽流感H5母源抗体持续期与2004年相比明显缩短。     

新疆猪繁殖与呼吸综合征病毒分离鉴定及Nsp2和ORF5基因遗传变异分析

为探索新疆猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）的变异特征,利用RT-PCR、ORF5 和部分NSP2 基因序列进行分析,鉴定从新疆某猪场疑似猪高热病死亡猪肺脏分离出的一株病毒。分离的病毒株被鉴定为PRRSV 美洲型,命名为XJ-Q 株。该株病毒与香港分离株HK13 亲缘关系最近,与国内变异株（HUB1 和JXA1）同源性较为亲近。与美洲型标准毒株VR-2332 相比,该分离株在481 位和532~560 位共有30 个氨基酸缺失;与国内分离的PRRSV 变异株相比,在487~489 位有3 个氨基酸的独特缺失。结果表明,新疆分离株为PRRSV 美洲型,属于新缺失的PRRSV毒株。     

3种检测方法在野鸟禽流感监测中的应用与比较

分别应用血凝抑制试验(HI)、反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)与病毒分离3种检测方法对260份野鸟样品开展禽流感检测。结果表明,用HI方法检出禽流感样品57份,阳性检出率为21.92%;RT-PCR方法没有检出禽流感样品,阳性检出率为0;病毒分离方法检出禽流感样品15份,阳性检出率为5.77%。     

布鲁氏菌种荧光定量PCR快速检测方法的建立

根据荧光定量PCR原理和技术,通过与Gene Bank数据库中布鲁氏菌基因组进行序列比对,选择不同种属布鲁氏菌的特异性位点,设计3对引物和Taqman荧光探针。将3对引物进行独立的种特异荧光定量PCR实验优化,最终实现在1次荧光定量PCR反应中完成对牛种、羊种、猪种布鲁氏菌的鉴别和定量。该检测方法特异、敏感、快速,既能实现对布鲁氏菌的分种,又能实现定量快速检测,对于布鲁氏菌病的流行病学调查和防治都具有重要意义。     

5株禽新城疫病毒新疆分离株F基因序列测定与遗传进化分析

从新疆乌鲁木齐市郊区养禽场发病禽群中分离到4株鸡源新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)和1株鸽源NDV.经血凝HA试验鉴定,NDv分离株均具有血凝性,5个毒株的血凝特性均口J被NDV阳性血清所抑制.而不能被禽流感病毒(H5亚型与H9亚型)阳性血清抑制.本试验通过RT-PCR扩增了5株NDV全长F基因并进行了序列测定.序列分析表明,5株NDV的核苷酸序列分别为1662、1589、1676、1589和1662 bp,均含有1个开放阅读框,分别编码553、528、553、520和553个氨基酸;根据基因裂解位点的氨基酸序列分析表明.鸡源XJ/10/08株属于强毒株.XJ/3/07株、XJ/7/07株、XJ/9/08株和XJ/11/08株属于弱毒株;同源性分析表明,5个NDV新疆分离株与La Sota疫苗株的核苷酸同源性在83.7%～99.8%之间,与TaiWan95株核苷酸同源性在84.7%～93.3%之间;遗传发育进化树分析表明,分离到的4个弱毒株与La-Sota、Clone30、B1、BEA-45在同一亚群,属基因Ⅱ型,强毒分离株与TaiWan95、广东株(GD-1-98)、江苏株(JS-5-1)在同一进化分支内,属基因Ⅶ型.