一株H5N6亚型禽流感病毒对鸭和小鼠的致病性研究

为了研究一株从鹭中分离到的禽流感病毒(AIV)A/Heron/Guangdong/C1/2013(H5N6)对鸭和小鼠的致病力,本研究通过对鸭和小鼠滴鼻点眼和鸡的颈静脉注射进行攻毒试验,观察其致病力和组织病理学等变化,对其生物学特性进行初步研究。结果显示,该毒株的鸡胚半数感染量(EID₅₀)为10^-8.16/0.1 mL,静脉接种致病指数(IVPI)为2.76。对鸭的半数致死量(LD₅₀)为10^-4.0/0.2 mL,对小鼠的LD₅₀为10^-4.67/0.05 mL。以10⁶ EID₅₀/只滴鼻点眼感染鸭,主要表现为食欲下降、精神萎靡、肿头流泪等症状,大多数鸭在感染后4~7 d死亡,感染后第7 天肝脏、肺脏、肾脏仍在排毒,解剖可见心包积液、肺脏淤血、肾脏肿大等症状,病理切片可见心脏、肝脏、脾脏、肾脏炎性细胞浸润,脑细胞核固缩等病变。以5×10⁵ EID₅₀/只滴鼻感染小鼠,主要表现为食欲下降、精神萎靡、被毛粗乱、聚堆等症状,大部分小鼠在感染后5~7 d死亡,第7天时只有肺脏仍在排毒,各脏器解剖学病变不明显,病理切片可见心脏、肾脏、肺脏炎性细胞浸润,脑细胞核固缩等病变。研究结果表明,该H5N6亚型AIV毒株对鸭和小鼠具有很强的致病力,IVPI大于1.2,为高致病性AIV,本研究为H5N6亚型AIV研究和防控提供了理论基础。     

H5N1亚型禽流感病毒低剂量感染小鼠发病模型的建立

为模拟哺乳动物感染H5亚型高致病性禽流感病毒(HPAIV)的发病进程,本研究采用对哺乳动物高度致病的H5N1亚型HPAIV株A/bar-headed goose/Qinghai/3/05 (BHG/3/05),以低剂量鼻腔接种小鼠,观察发病、存活、病毒复制及组织病理损伤情况.结果显示,100.4 EID50即能够100％感染小鼠,但发病表现缓慢,死亡延迟至8d以后,存活达60％;体内病毒复制可持续10 d以上,感染后前3d病毒的增殖限于呼吸道,随后扩散至脑、脾、肾等其他器官;组织病理学观察肺脏早期表现出渗出性炎症,第10d发展为典型的间质性肺炎.本研究结果为探讨人禽流感的病理发生机制提供了具有价值的模型.     

H5N1亚型高致病性禽流感病毒对鸽的致病性分析

为评估H5N1亚型禽流感病毒对鸽的致病性,用我国2004年分离的一株H5NI亚型禽流感病毒A/pigeon/GD/C2/2004( H5NI)人工感染4周龄鸽,进行了致病性试验.结果表明,该株病毒以106EID50/I00μL剂量感染能致死鸽,致死率为22.2％,病毒能在感染鸽体内广泛分布,其中肺脏和肾脏中病毒含量达到...     

两株鸭源H5N1亚型禽流感病毒的序列分析及致病性研究

本研究对2010年在湖北活禽市场监测分离到的两株鸭源H5N1亚型禽流感病毒(AIV) (HuB/495/10和HuB/513/10)进行了序列分析和致病性试验研究,以了解湖北地区H5N1亚型AIV的生物学特性差异.序列分析显示:2株病毒全基因组核苷酸同源性在97.3 ％～98.6％,2株病毒的8个节段基因均与青海和香港分离的野鸟源病毒A/great crested-grebe/Qinghai/1/2009 (H5N1)和A/black-crowned night heron/Hong Kong/659/2008 (H5N1)的核苷酸高度同源,HA蛋白裂解位点序列基序为341RRRKR345,呈现典型的高致病力分子特征.以105 EID50/100 μL病毒剂量感染4周龄SPF鸭发现:HuB/495/10和HuB/513/10对鸭的致死率分别为100％和20％,病毒在鸭体内呈全身性复制并可通过呼吸道和消化道向外排毒;不同滴度的病毒感染6周龄BALB/c小鼠,HuB/495/10和HuB/513/10的MLD50分别为1.38 log10 EID50和1.68 log10 EID50,对小鼠表现为高致病力,均在肺脏中高拷贝复制.     

一株鹅源H5N1亚型禽流感病毒人工感染鸡的病理学研究

鸡肌肉接种鹅源禽流感病毒A/goose/Guangdong/2/1996(H5N1)后,引起约70%发病率和60%死亡率,并表现出一些显微和超微病理学变化,主要为全身性充血、淤血、出血和血栓形成,多种器官的细胞变性、坏死、炎症,以及胰腺、肾脏、肝脏、心脏、肺脏、脑、肠、胸腺、脾脏、法氏囊等的细胞凋亡。     

2株H5N1亚型禽流感病毒人工感染鸭的组织病理学观察

鸭经肌肉接种禽流感病毒A/duck/Guangdong/185/2004（H5N1）和A/duck/Guangdong/221/2004（H5N1）后,2周内未见死亡,但具有一些显微和超微病理学变化,主要表现为呼吸道、消化道黏膜受损,心脏、肝脏、肺脏、肾脏、脑等器官一定程度的充血、淤血、出血、水肿及实质细胞变性、坏死和炎症等。     

两株H6N8亚型禽流感病毒分离株的分离与鉴定

为了解禽流感病毒(AIV)在我国华南地区的流行情况,我们对活禽市场中分离得到的两株鸭源H6N8亚型AIV[A/duck/Fujian/S2191/2011 (H6N8) (FJ/191/11)和A/duck/Guizhou/S4035/2011 (H6N8) (GZ/035/11)]进行全基因序列测定,并进行其对SPF鸡和BALB/c小鼠的致病性试验.序列分析显示:HA裂解位点基序为339pQIETR ↓GLFG348,为低致病性AIV特征.内部基因分别源于两个国内流行的H6亚型病毒家系(ST339-like和HuN573-like).序列分析表明FJ/191/11和GZ/035/11为H6亚型病毒与其他亚型AIV的N8NA基因发生重组,呈现明显的异源性.两分离株的感染性试验显示,它们对鸡和小鼠均呈低致病性;而且不能在鸡体内有效复制;对小鼠的感染性实验结果显示,小鼠肺脏和鼻甲病毒分离结果为阳性,其他脏器病毒滴定结果为阴性.     

H9N2亚型AIV河北分离株Z1对小鼠致病性的研究

为了研究H9N2亚型禽流感病毒河北分离株Z1对哺乳动物小鼠的致病性,试验采用H9N2亚型AIV Z1株感染Balb/c小鼠后,观察小鼠的临床表现和组织病理学变化,通过测量体重、体温、采食量,检测禽流感病毒靶器官肺脏内病毒含量的动态变化及相应血清抗体水平的情况。结果表明:小鼠感染后表现为采食量和体温有一定程度的下降、体重减少等明显的临床发病症状,组织病理学变化特征为肺部严重的淤血、水肿和炎性细胞渗出。14 d后感染小鼠能产生相应的病毒抗体。H9N2亚型AIV Z1株无需适应就能感染哺乳动物小鼠,说明Balb/c小鼠可作为研究人-禽流感病毒的动物模型。     

H5N1亚型禽流感病毒新疆株HA基因的克隆及序列分析

参照已发表的H5N1亚型禽流感的HA基因序列,设计了1对引物,对禽流感病毒新疆株A/Duck/XJ/3(H5N1)、A/Duck/XJ/4(H5N1)、A/CH/XJ/5(H5N1)、A/Goose/XJ/10(H5N1)和A/Duck/XJ/11(H5N1)进行RT-PCR扩增和克隆,获得了5个毒株的HA全长核苷酸序列,分别为1 779 bp、1 774 bp、1 776 bp、1 758 bp和1 740 bp序列分析表明,在HA切割位点处均有多个连续的碱性氨基酸(-R-E-R-R-R-K-K-R-)插入,具有高致病性禽流感病毒的特征.同源性分析表明,新疆分离株之间的核甘酸同源性在96.9%～98.8%;与来自青海湖斑头雁、广西天鹅、香港白鹭和台湾鸽等不同野禽毒株同源性为95.7%～100%;与来自香港、越南、浙江的人源禽流感毒株的同源性为95.2%～98.2%.     

H5N1亚型禽流感病毒感染海兰白鸡模型的建立

为建立H5N1亚型禽流感病毒感染海兰白鸡模型,本研究选取1株鹅源H5N1高致病性禽流感病毒A/goose/guangdong/1/96(H5N1)(简称GD1/96),测定其对4周龄海兰白鸡的半数致死量.感染模型试验中,将30只4周龄海兰白鸡随机分成3组,每组10只,5只直接感染,5只同居,试验组设置一个重复,将病毒液稀释至10^4.5EID₅₀,滴鼻、点眼各0.1 mL,对照组接种PBS,感染后24 h放入同居鸡;感染后连续观察14 d,记录死亡时间,每天采集咽喉拭子和泄殖腔拭子;感染组和同居组第3、5 天各剖解3只鸡,采集气管、肺脏、脑、脾脏、肾脏和十二指肠,进行病毒分离;qRT-PCR法分析感染组和同居组第3、5 天鸡肺组织中IFN-α和TNF-α的相对表达量.结果显示,GD1/96株的鸡胚半数感染量(EID₅₀)为10^-8.167/0.1 mL,对4周龄海兰白鸡的半数致死量为10^4.5 EID₅₀.感染模型试验结果显示,以10^4.5EID₅₀的攻毒剂量感染海兰白鸡,感染组鸡在感染后8 d全部死亡;在感染和同居3 d后,各组鸡的咽喉拭子和泄殖腔拭子均可检测到病毒;感染和同居后第3、5 天,各组鸡的6种组织中均可分离到高滴度的病毒;IFN-α和TNF-α在感染组和同居组的鸡肺脏组织中的表达量均显著增加(P <0.05).本试验建立了海兰白鸡的H5N1亚型禽流感病毒感染模型,为H5N1亚型禽流感病毒的致病机理及表达抗流感基因转基因鸡的研究奠定了基础.     

科学认识H_5N_1亚型高致病性禽流感

AIV按其毒力和致病性可分为高致病性禽流感病毒(HPAIV)和低致病性禽流感病毒(LPAIV).所谓的高致病性是指高感染性和高病原性,高感染性体现在病毒经一定途径侵入机体后能在机体各组织器官内快速有效的复制和在不同个体间进行快速有效地传播,并能在极短的时间内(一般为48 h)导致全群鸡发病死亡:高病原性是指少数的病毒粒子进入到机体后可引起全身感染,导致多系统、器官功能衰竭,最终导致死亡.     

Epidemiology of H5N1 avian influenza

High pathogenic (HP) H5N1 avian influenza (AI) infection has been reported in domestic poultry, wildlife, and human populations since 1996. Risk of infection is associated with direct contact with infected birds. The mode of H5N1 spread from Asia to Europe, Africa and the Far East is unclear; risk factors such as legal and illegal domestic poultry and exotic bird trade, and migratory bird movements have been documented. Measures used to control disease such as culling, stamping out, cleaning and disinfection, and vaccination have not been successful in eradicating H5N1 in Asia, but have been effective in Europe.     

全球高致病性禽流感风险评估

H5N1高致病性禽流感暴发的风险管理需要对不同的风险因素进行综合评估,这些因素影响不同地理区域传染病的传播和持续时间。禽流感灾害风险评估的关键是制定风险路径,然后用它来发展一种定性或定量的风险评估模型。本文建立在风险分析模型框架基础之上,利用FAO、WHO以及OIE等国际组织和有关国家政府可公开获得的数据和信息,利用ArcGIS对H5N1高致病性禽流感进行风险评估,并对野生鸟类和家禽贸易在H5N1高致病性禽流感传播中的重要性进行分析。     

Susceptibility of laughing gulls (Larus atricilla) to H5N1 and H5N3 highly pathogenic avian influenza viruses

This investigation detailed the clinical disease, gross and histologic lesions, and distribution of viral antigen in juvenile laughing gulls (Larus atricilla) intranasally inoculated with either the A/tern/South Africa/61 (H5N3) (tern/SA) influenza virus or the A/chicken/Hong Kong/220/97 (H5N1) (chicken/HK) influenza virus, which are both highly pathogenic for chickens. Neither morbidity nor mortality was observed in gulls inoculated with either virus within the 14-day investigative period. Gross lesions resultant from infection with either virus were only mild, with the tern/SA virus causing decreased lucency of the air sacs (2/6), splenomegaly (2/6), and pancreatic mottling (1/6) and the chicken/HK virus causing only decreased lucency of the air sacs (2/8) and conjunctival edema (2/8). Histologic lesions in the tern/SA-inoculated gulls included a mild to moderate heterophilic to lymphoplasmacytic airsacculitis (6/6), mild to moderate interstitial pneumonia (3/6), and moderate necrotizing pancreatitis and hepatitis at 14 days postinoculation (DPI) (2/6). Immunohistochemical demonstration of viral antigen occurred only in association with lesions in the liver and pancreas. In contrast, viral antigen was not demonstrated in any tissues from the chicken/HK-inoculated gulls, and inflammatory lesions were confined to the air sac (3/8) and lungs (3/8). Both viruses were isolated at low titers (<10(1.68) mean embryo lethal dose) from oropharyngeal and cloacal swabs up to 7 days postinoculation (DPI), from the lung and kidney of one of two tern/SA-inoculated gulls at 14 DPI, and from the lung of one of two chicken/HK-inoculated gulls at 7 DPI. Antibodies to influenza viruses as determined with the agar gel precipitin test at 14 DPI were detected only in the two tern/SA-inoculated gulls and not in the two chicken/HK-inoculated gulls.     

亚洲H5N1型禽流感暴发的回顾与反思

亚洲暴发的H5N1型禽流感疫情带给我们很多教训和启示。对发生疫情的国家来说，疫苗接种是一种行之有效的防控措施，但单纯使用疫苗却无法将H5N1从一个国家根除，但是疫苗接种能够显著地降低家禽对病毒的易感性并能减缓病毒扩散的速度。同时，在疫区采取大规模扑杀的措施也能降低当地家禽发生病毒感染的程度。[编者按]