华南虎皮肤成纤维细胞的分离培养

应用酶消化法（胶原酶消化：0.1%胶原酶Ⅰ型＋0.1%BSA;胰蛋白酶消化：0.25%胰蛋白酶＋1mM EDTA）和植块法从华南虎皮肤组织中分离成纤维细胞。研究结果表明,植块法较适合分离华南虎皮肤成纤维细胞,胶原酶消化法次之,而胰蛋白酶消化法不宜用于分离华南虎皮肤成纤维细胞。DMEM/F12（1：1）培养基＋10%FCS＋10 ng/ml EGF＋5μg/ml胰岛素＋100 IU/ml青霉素＋100μg/ml链霉素组成的培养体系适用于华南虎皮肤成纤维细胞的体外培养。     

肺动脉高压肉鸡肺小动脉中膜5-HT量及其与肺血管重构的关系

静脉注射纤维素粒子复制肉鸡肺动脉高压模型,观察肺小动脉中膜5-羟色胺(5-HT)表达和肺小动脉管壁病理形态学变化,探讨5-HT与肺血管重构的关系。80羽科宝肉鸡分为对照组(n=30)和试验组(n=50)。20日龄时,试验组每羽鸡静脉注射0.3 mL的纤维素悬液;对照组每羽鸡静脉注射等体积生理盐水。记录肺动脉高压综合征(PHS)发病率,并分别于21、28、35、42 d从各组随机抽样,测定右心室/全心室质量比(RV/TV)、红细胞压积(PCV)、血红蛋白(Hb)、肺小动脉管壁面积/管总面积(WA/TA)、平均中膜厚度(mMTPA)和肺厚壁末梢血管百分比(TWPV%);采用免疫组化方法标记5-HT,并用病理图像分析软件检测肺小动脉5-HT的量。结果表明:试验组肉鸡PHS发病率显著高于对照组(P<0.05);RV/TV值在35、42 d时显著升高(P<0.05);PCV在28、35 d时显著升高(P<0.05);Hb值在35 d时显著升高(P<0.05);血管mMTPA、WA/TA和TWPV%在35、42 d时均显著升高(P<0.05);肺小动脉5-HT含量升高,在各时间点均差异显著(P<0.05),且5-HT含量...     

Ghrelin对雌激素诱导雄性小鼠胸腺萎缩的逆转及对相关细胞因子基因表达的影响

SPF级6周龄Balb/c雄性小鼠60只,随机分为3组,每组20只,适应饲养1周后进行动物试验.雌激素+Gh-relin试验组:前2周隔日腹腔注射苯甲酸雌二醇注射液(含苯甲酸雌二醇0.1 mg)0.05 mL/只,后2周按每日腹腔注射Ghrelin(含Ghrelin 60 μg)0.1mL/只；雌激素+生理盐水对照组:前2周隔日腹腔注射苯甲酸雌二醇注射液(含苯甲酸雌二醇0.1mg)0.05mL/只,后2周按每日腹腔注射0.9％生理盐水0.1 mL/只；生理盐水对照组:前2周按0.05 mL/只隔日腹腔注射0.9％生理盐水,后2周按0.1 mL/只每日腹腔注射0.9％生理盐水.动物试验结束后,统计小鼠胸腺指数,应用光镜观察胸腺形态学变化,采用实时荧光定量PCR法检测胸腺中12种细胞因子mRNA表达量的变化.结果显示,注射Ghrelin后,雌二醇诱导的小鼠胸腺萎缩在形态学上基本恢复到正常水平,胸腺中白细胞介素1(IL-1)、IL-2、IL-4、IL-6、IL-12、干扰素(1FN-γ)、白血病抑制因子(LIF)、抑瘤素(OSM)、干细胞因子(SCF)、胸腺体液因子(THF)、肿瘤坏死因子(TNF-α) mRNA含量显著降低(P＜0.05),而IL-7 mRNA含量稍微升高(P＞0.05).结果表明,Ghrelin对雌激素诱导的小鼠胸腺萎缩具有逆转作用,其机制可能是:一方面通过抑制IL一6、OSM、LIF、SCF等细胞因子的表达,从而促进胸腺细胞的增殖；另一方面通过抑制IL-1、IL-2、IL-4、IL-12、THF等细胞因子的表达,从而减少TNF-α和IFN-γ的分泌,进而抑制胸腺细胞的凋亡.     

不同培养液对体外培养的小鼠胸腺上皮细胞增殖的影响

分离纯化小鼠胸腺上皮细胞（mTEC）,以DMEM、DMEM/F12、RPMI 1640 3种基础培养液加10%胎牛血清完全培养液进行培养, MTT法和流式细胞术分别检测mTEC的增殖及细胞周期,筛选出最适合mTEC生长的培养液。结果表明,DMEM培养的mTEC增殖快,细胞增殖指数明显高于DMEM/F12、RPMI 1640培养液,表明DMEM是mTEC体外培养的最佳培养液。     

军曹鱼MHC-Ⅱα基因全长cDNA的克隆及其组织表达分析

本研究根据其他鱼类MHC-Ⅱα基因的保守序列设计兼并引物,运用同源克隆和末端快速扩增方法扩增了军曹鱼MHC-Ⅱα基因的全长cDNA序列,并对cDNA及其氨基酸序列进行了分析,比较了军曹鱼和其他物种的MHC-Ⅱα氨基酸序列的差异,分析了军曹鱼MHC-Ⅱα基因的组织分布及经LPS刺激后头肾组织中MHC-Ⅱα基因的表达变化。结果表明,军曹鱼MHC-Ⅱα cDNA全长998 bp,包括53 bp的5′末端非编码区（5′UTR）、234 bp的3′末端非编码区（3′UTR）及711 bp的开放阅读框（ORF）,编码236个氮基酸,其蛋白质分子质量约为25.94 ku,等电点为4.39;军曹鱼MHC-Ⅱα蛋白质序列具有一些重要的特征,包括前导肽、α1、α2、CP/TM/CYT区和保守的半胱氨酸等;军曹鱼MHC-Ⅱα与鼠、人及其它鱼类的氨基酸同源性在25.0%～69.5%之间。Real-time PCR检测结果显示,MHC-Ⅱα基因在正常军曹鱼组织中均有表达,但其表达量在各种组织中存在差异,其中较强表达于头肾、鳃,中等程度表达于脾脏、肠,在心脏、脑、肌肉中表达较弱;经LPS刺激后,头肾中MHC-Ⅱα基因表达下调。     

免疫组织化学法定位猪脾脏中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的研究

利用免疫组织化学法研究了脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)在猪脾脏分布定位,为DON体内残留及DON对免疫系统影响进一步研究提供依据。选用10头健康阉公猪,随机分为二组,一组经乳静脉注射DON标准品,注射剂量为75μg/kg体重,另一组经乳静脉注射相当体积生理盐水。注射完成后开始计时,并观察记录猪的反应情况,待30min后放血宰杀,并迅速取脾脏,4%多聚甲醛固定,经脱水、包埋及切片后,采用免疫组化法定位脾脏中DON的分布情况。免疫组化法定位结果显示,在75μg/kg体重给药组中,脾组织中的血管壁周围见有DON阳性反应颗粒,而对照组未见阳性反应颗粒。     

一株鸭源H5N1亚型禽流感病毒人工感染鸡的病理学研究

鸡经肌肉或眼-鼻-口腔-泄殖腔接种禽流感病毒A/duck/Guangdong/220/2004(H5N1)后,发病率和死亡率均为100%,死亡发生在接种后6 d内.全身多数器官出现充血、淤血、出血、血栓形成、组织水肿和炎症,主要有血管炎、病毒性心肌炎、病毒性肝炎、气管炎、出血性卡他性肺炎、肾小管性肾炎、肾小球性肾炎、坏死性胰腺炎、坏死性胸腺炎、坏死性法氏囊炎、脾炎、非化脓性脑炎、溃疡性肠炎等.电镜下可见心、肝、肾、胰、脾、胸腺等器官的实质细胞发生坏死和凋亡两种变化.鸡接种该病毒后,通常血清中的天门冬氨酸氨基转移酶(谷草转氨酶)、γ-谷氨酰基转移酶、碱性磷酸酶先升高,后下降;而肌酸激酶则升高,α-淀粉酶则下降.结果表明,许多器官的严重损伤是造成鸡死亡的原因,而该病毒的致病机制可能与细胞坏死和细胞凋亡有关.     

鸽用保健砂的配制技术

<正>鸽属于禽类,口腔内没有牙齿、嘴唇和软腭,角质喙是主要的采食器官。与一般的家禽不同,鸽舌体上味蕾比较发达,嗅觉也极为灵敏,能感受喜好的味道和拒绝带异常气味的食物。鸽的祖先为生活在海边的岩鸽,具有嗜盐性和嗜砂性,散养或放飞群养的鸽喜欢自行啄食盐土和砂粒,以补充身体所需的多种微量元素,     

广西新黄鸡腔上囊和胸腺的发育及其T淋巴细胞的分布

10日龄鸡胚腔上囊开始形成囊腔和皱褶,并偶尔见到T淋巴样细胞;12日龄鸡胚出现淋巴滤泡;17日龄鸡胚滤泡髓质基本形成;3日龄雏鸡滤泡皮质出现。18日龄鸡胚开始形成DIA,随日龄的增长,DIA由腔上囊背侧近导管开口处逐渐扩展到导管背侧;7周龄前后到达与泄殖腔相连处。随着滤泡及DIA的形成,T淋巴样细胞分别出现于其中。滤泡中T淋巴样细胞的百分率,胚胎期大于孵出后。出生后T淋巴样细胞主要聚集于DIA内。9～11周龄腔上囊生长达到最大值,21.5～52周龄腔上囊消失。 14日龄鸡胚胸腺开始出现髓质,并可在其中检出ANAE细小颗粒型细胞,其百分率出生后大于胚胎期。但10～12日龄鸡胚胸腺中有大量的未成熟的胸腺细胞呈ANAE斑点型反应     

玉米赤霉烯酮对小鼠脾淋巴细胞凋亡的影响

采用MTT法、DNA ladder分析、流式细胞仪分析等方法,离体研究玉米赤霉烯酮对小鼠脾淋巴细胞增殖与凋亡的影响,结果发现:ZEA对离体培养LPS活化小鼠脾淋巴细胞增殖具有显著抑制作用(P<0.05),且抑制强度与其剂量和处理时间均呈依赖性关系;小鼠脾淋巴细胞经ZEA处理后,出现DNA断裂等典型细胞凋亡特征;ZEA对离体培养LPS活化小鼠脾淋巴细胞具有显著促凋亡作用(P<0.0 5),且促进强度与其剂量呈依赖性关系。这些结果表明,玉米赤霉烯酮对小鼠脾淋巴细胞有直接毒害作用。