三种犬科动物脑源神经营养因子基因克隆与进化分析

从犬、赤狐（Vulpes vulpes）、貉三种犬科动物基因组中克隆脑源神经营养因子基因，经测序验证扩增片断长度为800bp，包含全部编码序列和部分5、非翻译区。序列分析表明，犬与狐、犬与貉的核苷酸序列同源性都超过99％，推测氨基酸序列犬与貉完全相同，赤狐在信号肽区有一个氨基酸与犬不同。使用MEGA3．0软件的邻接法构建犬科动物的系统发生关系，犬和狐聚为一类，貉比犬和狐分化时间更早。     

三种犬科动物脑源神经营养因子基因克隆与进化分析

从犬、赤狐(Vulpes vulpes)、貉三种犬科动物基因组中克隆脑源神经营养因子基因,经测序验证扩增片断长度为800bp,包含全部编码序列和部分5`非翻译区。序列分析表明,犬与狐、犬与貉的核苷酸序列同源性都超过99%,推测氨基酸序列犬与貉完全相同,赤狐在信号肽区有一个氨基酸与犬不同。使用MEGA3.0软件的邻接法构建犬科动物的系统发生关系,犬和狐聚为一类,貉比犬和狐分化时间更早。     

动物细小病毒感染症快速诊断盒研制成功

近年来,通过病毒分离鉴定,发现犬细小病毒性肠炎、猫泛白细胞减少症和水貂、貉出血性肠炎等细小病毒感染症,在我国的军犬、警犬、狮、虎、豹、猫以及水貂、貉等犬科、猫科、鼬科动物中广为存在,危害严重。为能迅速确定诊断,及时采取有效防疫     

猪白细胞介素-15基因的克隆及生物信息学分析

参照GenBank登录的猪白细胞介素-15(IL-15)基因序列自行设计1对特异性引物，运用RT PCR技术从由刀豆蛋白A(ConA)诱导培养的荣昌猪外周血淋巴细胞扩增出猪IL-15基因的完整CDS序列，全长489 bp。同源比对结果表明，荣昌猪IL-15基因与已公布的2个猪种IL-15基因核苷酸同源性均为99.4%,与哺乳动物的同源性较高，与鸡的同源性较低。密码子偏爱性分析显示，荣昌猪IL-15基因在密码子使用上存在一定的偏爱性；分子进化分析结果表明其与人及哺乳动物IL-15基因的进化关系较近，而与禽类鸡的IL-15基因进化距离较远；结构域预测分析显示其与人的IL-15存在很大的相似性，可能在功能上有相似性。     

长白猪IL-6基因的克隆及其序列分析

用PHA和LPS诱导猪脾和淋巴结淋巴细胞，提取细胞总RNA，利用RT—PCR技术克隆猪1L-6的cDNA并进行序列测定与分析。测序结果及同源性分析表明，已扩增到IL-6基因，大小约为669bp，含有1个639bp的开放阅读框，编码212个氨基酸，其中前28个氨基酸为信号肽，且碱基序列在不同种属动物间差别较大。分组诱导表明，LPS效果更佳，PHA和LPS联合诱导能使更多的IL-6转录表达。     

荣昌猪白细胞介素15成熟肽基因的克隆、表达及其表达产物活性检测

运用RT—PCR技术从由刀豆蛋白（ConA）诱导培养的荣昌猪外周血淋巴细胞（PBMC）扩增出猪白细胞介素15（pIL-15）完整开放阅读框（ORF），共489bp，编码162aa。与已公布的2个猪IL-15基因核苷酸同源性均为99．4％。分子进化分析表明其与人及哺乳动物IL-15基因的进化关系较近，而与鸡的IL-15基因进化距离较远。运用PCR技术从含荣昌猪IL-15开放阅读框序列质粒中扩增其成熟蛋白编码基因，共345bp。将其定向克隆于原核表达载体pET-32a（＋）后在E．coli BL21中诱导表达，SDS-PAGE结果显示表达的融合蛋白约为34ku，重组蛋白以包涵体形式表达，表达产物约占菌体总蛋白的38．7％；Western blot分析表明，在相对分子质量34ku处有一条特异性带；对诱导重组菌进行转录检测得到约356bp的特异性片段。MTT法试验证实，表达产物初步纯化、透析复性后，可明显增强淋巴细胞的增殖。荣昌猪IL-15成熟肽成功在体外表达，获得的高效表达的产物具有一定的生物学活性。     

乌苏里貉早期死亡的原因和防治对策

乌苏里貉别名貉子、狸子、土狗、狗獾子等，属食肉目犬科的一种。貉是一种珍贵毛皮动物，养貉业是现代畜牧业中一项新兴的养殖业，具有很高的经济价值，但初养者大部分失败，主要是繁殖率和成活率低造成的。     

猪IL-2基因的克隆、序列分析及其杆状病毒表达载体的构建

参照GenBank发表的猪IL-2 cDNA基因序列设计1对引物,将猪脾淋巴细胞在伴刀豆球蛋白A(Con A)的刺激下体外培养27 h后,提取激活淋巴细胞总RNA,进行反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增,克隆到pGEM-TEasy载体上并测序.测序结果显示,克隆的猪IL-2 cDNA全长为516 bp,开放阅读框(ORF)包含465 bp,编码154个氨基酸,相对分子质量为17 400,等电点为5.27,此cDNA与已报道的猪IL-2同源性为100%.与猫、牛、鸡、犬、鸭、山羊、马、人、家鼠等的IL-2基因进行比较分析,核苷酸同源性分别为83.7%、82.6%、28.2%、80.6%、29.6%、83.4%、81.3%、82.0%和61.5%.将此IL-2基因亚克隆到杆状病毒转移载体pFastBacDual后获得了重组质粒pFBD-IL2,进而转化进含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac中,发生转座作用;经抗性及蓝白斑筛选得到了含猪IL-2基因的重组DNA,将其命名为Bacmid-IL2.本试验为进一步在昆虫细胞中表达猪IL-2基因、开发研制新型免疫佐剂奠定了基础.     

犬白细胞介素18基因的克隆与序列分析

为研究犬白细胞介素18(IL-18)的生物学功能,从犬外周血中分离白细胞,经Con A刺激后,提取总RNA,通过反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增犬IL-18基因,连接pMD19-T simple vector,转化DH5α感受态细胞,经双酶切鉴定,获得阳性重组质粒后进行序列分析。结果表明,获得的犬IL-18基因全长为582bp,编码氨基酸194个。将犬与GenBank中牛、猫、羊、猪、鼠、兔、狐、貉IL-18基因进行同源性比较,发现犬IL-18与红狐和貉IL-18的同源性最高,氨基酸序列同源性分别达96.4%、91.2%,与其他物种则存在较大种属差异。     

一起貉犬瘟热的诊断与控制

犬瘟热俗称犬瘟，可引起犬科、釉科和浣熊科的大部分动物发病死亡。是毛皮动物养殖的最重要疫病，常引起犬、狐、貉、貂大批死亡，给养殖户造成严重的经济损失，甚至倒闭。现将接诊的1例貉犬瘟热的诊断和控制情况介绍如下。     

北极狐及乌苏里貉抑制素α亚基基因克隆及生物信息学分析

试验旨在克隆北极狐及乌苏里貉抑制素α（inhibin α,INHα）亚基基因并对其进行生物信息学分析。根据GenBank中犬科INHα预测mRNA序列（登录号：XM_545660.5）设计1对引物,用RT-PCR技术从北极狐及乌苏里貉的卵巢组织中扩增出INHα亚基基因,同时将其插入到克隆载体中,进行测序及生物信息学分析。测序结果表明,北极狐及乌苏里貉的INHα亚基基因CDS序列全长为1 107 bp,编码369个氨基酸。北极狐及乌苏里貉的INHα亚基基因与犬的同源性最高,分别为97.9%与97.6%。系统进化树分析表明,北极狐及乌苏里貉与犬亲缘关系较近,同时也说明INHα亚基基因在不同物种及进化过程中具有高度保守性。对INHα亚基蛋白的高级结构预测发现,由于半胱氨酸间形成的二硫键导致其采用"蝴蝶形"或"开放手"构型,其中α-螺旋形成分子的"手腕"结构,β-折叠形成分子的"手指"结构。本研究成功克隆了北极狐及乌苏里貉的INHα亚基基因,同时进行了系统的生物信息学分析,为今后研究抑制素在卵母细胞-颗粒细胞同步发育过程中的生物学功能奠定了基础。     

猪白细胞介素-12的分子克隆与序列测定

为研究白细胞介素-12在机体免疫应答中的作用。从猪外周血提取单个核细胞（PBMCs)，用含LPS的培养基培养细胞，从培养2h和12h的活化细胞中分别提取总RNA，用RT-PCR方法扩增出编码猪IL-12两个亚基的基因，其大小分别为720bp(P35)和1044bp(P40)，将扩增产物经琼脂糖凝胶电泳后，回收纯化，用SacI和SalI双酶切后，分别将其连接至pUC18质粒上，进行质粒PCR和SacI,SalI双酶切鉴定后筛选阳性克隆，并进行序列测定和分析，序列分析表明P35基因开放阅读框含有669个核苷酸，序列与人，小鼠和羊同源性分别为79.2%,37.6%,86.1%,P40基因开放阅读框含有975个核苷酸，与人和小鼠，羊基因序列的同源性分别为79.5%,53.1%,84.3%。结果表明克隆到了猪白细胞介素-12P35和P40两个亚基的基因，得到的P35基因序列与国外报道完全一致，P40基因序列与发表的序列有4个碱基差异，提示P40基因可能存在多态性。     

Gene Structure Prediction and Molecular Evolution Analysis of Raccoon Dog agouti Gene based on RNA-Seqs

To in-depth analyze the molecular structure characteristics of agouti gene,using bioinformatic methods for RNA-Seqs test to get the complete coding sequence of raccoon dog agouti gene,and its coding protein structure was forecasted and analyzed.The results showed that the length of raccoon dog agouti gene cDNA was 530 bp which contained 396 bp open reading frame (ORF),encoded 131 amino acids.Predicting the weight of the raccoon dog agouti protein molecular was 14.41 ku and isoelectric point (pI) was 9.68,as the unstable hydrophohbic protein;It contained 11 phosphorylation sites,1 glycosylation sites and a long reach 24 amino acid signal peptide;Random coil was the main secondary structure.Phylogenetic tree showed that the raccoon dog had a close genetics distance to vuipe and canis familiaris which was consistent with the traditional animal taxonomy.Through the analysis of the molecular structure characteristics of raccoon dog agouti gene,to provide the oretical basis for revealing the influence of the colour diversity molecular genetics mechanism.     

基于RNA-Seqs的乌苏里貉agouti基因结构特征预测及分子进化分析

为了进一步分析agouti基因的分子结构特征,利用生物信息学方法对RNA-Seqs试验获得乌苏里貉agouti基因的完整编码区序列的碱基组成及其编码蛋白的结构特征进行了预测和分析,并采用非对组算数平均法（UPGMA）法构建系统发育树。结果表明,获得的乌苏里貉agouti基因cDNA长度为530 bp,含396 bp开放阅读框（ORF）,编码131个氨基酸。预测乌苏里貉agouti蛋白分子质量为14.41 ku,等电点（pI）为9.68,为不稳定疏水性蛋白;含有11个磷酸化位点、1个糖基化位点和1个长达24个氨基酸的信号肽;预测发现无规则卷曲为其主要二级结构。系统进化树结果显示乌苏里貉与赤狐、家犬遗传距离最近,这与传统的动物分类学一致。通过对乌苏里貉agouti基因分子结构特征的分析,为揭示其影响毛色多样性的分子遗传学机制提供理论依据。     

猪白细胞介素-10的分子克隆与序列测定

从LPS活化的猪外周血单个核细胞（PBMC）提取总RNA，用RT-PCR方法扩增出猪白细胞介素-10（IL-10）的编码基因，将其连接到pUC18质粒上，然后进行BamHI和HindⅢ双酶切鉴定筛选阳性克隆，序列分析结果表明该基因开放阅读框由528个核苷酸组成，推测产生的编码产物由175个氨基酸组成。猪IL-10基因与人、大鼠和小鼠基因序列的同源性分别为84%、79%和795，与国外报道的猪IL-10基因序列完全一致，试验成功克隆到了猪IL-10基因。     

Sequence comparison of the dopamine receptor D4 exon III repetitive region in several species of the order Carnivora

It was previously demonstrated that the dog dopamine receptor D4 (DRD4) gene is polymorphic in terms of the repeat number and/or order of 39- and 12-bp sequences located in the third exon. To examine whether or not the repetitive region is present in other species of the order Carnivora, the homologous region of DRD4 genes were sequenced in the gray wolf, raccoon dog, Asiatic black bear, common raccoon and domestic cat. In the family Canidae, the wolf had an identical sequence to that of the dog 447b allele, and a repetitive sequence similar to the dog DRD4 was also recognized in the raccoon dog. On the other hand, no obvious repeated structure was observed in the sequences of the bear, raccoon and cat.     

Molecular cloning and sequencing of equine interleukin 4

We have cloned equine interleukin 4 (IL-4) cDNA using the polymerase chain reaction (PCR) and primers based on the human IL-4 sequence. The cDNA was amplified from mitogen-stimulated equine peripheral blood mononuclear cells (PBMC). The cloned PCR product shares extensive homology with IL-4 sequences from other species.     

牦牛IL-4基因的克隆及其遗传演化关系分析

克隆牦牛白细胞介素-4（IL～4）基因,并对其进行遗传演化分析。从刀豆素（ConA）和脂多糖（LPS）联合刺激培养的牦牛外周血淋巴细胞提取总RNA．利用RT—PCR方法扩增牦牛IL-4全长cDNA,将其克隆到pMD18～T载体上,测序后进行序列分析。成功克隆到牦牛IL-4基因全序列,序列分析表明,克隆的牦牛IL-4基因序列与GenBank所登录的牛IL-4核苷酸序列及推导的氨基酸序列的同源性分别这99．8％和100％,与人、猕猴、猪、山羊、马等物种的核苷酸及其推导氨基酸序列的同源性分别在44．4％～96．3％和27．4％～91．1％之间。在国内首次成功地从牦牛外周血淋巴细胞中克隆到IL-4的基因,其ORF为408bp,推导编码135个氨基酸。     

鸡白细胞介素-15基因克隆、序列分析及表达

根据GenBank上发表的鸡IL-15基因序列设计两对引物,以从鸡脾脏中提取的基因组RNA为模板,采用RT-PCR扩增出鸡白细胞介素-15基因并进行了序列分析。序列分析结果表明,鸡白细胞介素-15基因序列全长580bp,开放阅读框架内564个核苷酸共编码188个氨基酸。所扩增的序列与已报道的序列同源性为99.9%(563/564)。将扩增序列插入大肠杆菌载体pBV220中进行表达,SDS-PAGE显示目的蛋白约为21ku,表达产物经免疫荧光鉴定为阳性。