鱼腥草提取液在鸡胚内抗新城疫病毒试验

为证明鱼腥草抗新城疫病毒的作用效果,通过接种鸡胚方法,对病毒接种前、接种同时、接种后加药三种方式处理的鸡胚尿囊液血凝效价进行测定。结果显示,在三种不同的加药方式中,不同浓度的鱼腥草提取液都能够降低新城疫病毒感染鸡胚尿囊液的血凝效价;鱼腥草提取液和新城疫病毒同时注入鸡胚时,鱼腥草原液抗病毒效果最好;鱼腥草提取液于新城疫病毒接种后注入鸡胚时,2倍稀释液抗病毒效果最好;鱼腥草提取液先于新城疫病毒注入鸡胚时,4倍和8倍稀释液抗病毒效果最好。结果表明,鱼腥草提取液能够抑制新城疫病毒在鸡胚尿囊液中的增殖;鱼腥草提取液在鸡胚内抗新城疫病毒活性与其加药方式及浓度有关。     

金银花不同器官提取液抗鸡新城疫病毒效果研究

为了研究金银花不同器官(花、叶、茎)提取物的抗鸡新城疫病毒效果,试验制备了金银花不同器官提取液,在给SPF鸡胚接种鸡新城疫病毒前、接种后、接种同时接种金银花不同器官提取液,收取鸡胚尿囊液测定其血凝效价。结果表明:在3种不同的加药方式中,金银花不同器官提取液均能有效降低新城疫病毒感染鸡胚尿囊液的血凝效价,且作用效果与提取液浓度呈正相关。金银花不同器官提取液的抑制效果为:花茎叶。说明金银花不同器官的提取液均能够抑制新城疫病毒在鸡胚尿囊液中的增殖,其抑制效果与金银花的不同器官提取液加药方式和浓度有关。     

新鱼腥草素钠对新城疫La Sota疫苗免疫效果的影响

将96只非免疫健康三黄肉雏鸡随机分为4组,分别接种新城疫病毒La Sota株弱毒活疫苗,同时将新鱼腥草素钠按照不同的剂量皮下注射;在第二次免疫后的第7、14、21、28天分别测定各组动物的抗NDV血凝抑制抗体、免疫器官指数以及外周血CD4 /CD8 淋巴细胞比值.结果表明,新鱼腥草素钠对提高鸡体抗NDV血凝抑制抗体效价和外周血CD4 /CD8 淋巴细胞比值具有一定作用,且与对照组差异显著(P＜0.05);但不同给药剂量的新鱼腥草素钠影响不同,其中以中等剂量(2 mg/kg)效果最为明显.免疫器官指数的测定表明,新鱼腥草素钠对新城疫疫苗免疫效果的影响不是通过促进免疫器官发育实现的.     

新城疫与禽流感(H9亚型)二联油乳剂灭活苗免疫效力试验

用新城疫病毒（NDV）LaSota株与禽流感病毒（AIV）F株尿囊腔接种非免疫难胚，取72－120小时死亡鸡胚液。灭活后分别制成新城疫油乳剂灭活苗、禽流感（H9亚型）油乳剂灭活苗、新城疫与禽流感（H9亚型）二联油乳剂灭活苗，免疫7日龄非免疫雏鸡，一周后开始检测ND、AI血凝抑制（HI）抗体体，两周时各免疫组鸡的抗体效价都达到6log2以上，3周达到高峰，后维持在较高水平达45天以上，在65日龄进行攻毒，结果单苗和二联苗免疫鸡全部得到保护。     

金银花提取液在鸡胚内抗新城疫病毒试验

为证明金银花抗新城疫病毒的作用效果,通过接种鸡胚方法,对病毒接种前、接种同时、接种后加药3种方式处理的鸡胚尿囊液血凝效价进行测定。结果显示,在3种不同的加药方式中,不同浓度的金银花提取液均能够降低新城疫病毒感染鸡胚尿囊液的血凝效价,其作用效果与提取液浓度呈正比例相关。结果表明,金银花提取液能够抑制新城疫病毒在鸡胚尿囊液中的增殖;金银花提取液在鸡胚内抗新城疫病毒活性与其加药方式及浓度有关。     

不同毒株鸡传染性支气管炎病毒与鸡新城疫病毒接种鸡胚联合培养相互作用研究

本实验目的在于探讨不同毒株鸡传染性支气管炎病毒和鸡新城疫病毒混合接种同一鸡胚尿囊腔培养时二者之间的相互作用。分别将按２００倍、５００倍、１０００倍不同浓度稀释的鸡传染性支气管炎病毒Ｆ３株、肾型Ｊ株、Ｈ１２０２８／８６株,Ｈ５２和Ｈ１２０株和１００倍稀释的Ｌａｓｏｔａ鸡新城疫病毒联合接种到１０日龄鸡胚尿囊腔,同时设单独培养作对照,９６小时后收取尿囊液,用对流免疫电泳法检测鸡传染性支气管炎病毒效价,用血球凝集试验检测尿囊液鸡新城疫病毒效价。结果表明,鸡新城疫病毒对鸡传染性支气管炎病毒增殖无明显促进作用,但无抑制现象;鸡传染性支气管炎病毒浓度过大时,对鸡新城疫病毒有一定抑制作用,在适当浓度时二者之间无干扰作用。以ＮＤＶ１００倍ＩＢＶ１０００倍稀释混合作用后联合接种培养对二者效价均无明显干扰,ＮＤＶ血凝效价可达１１ｌｏｇ２,ＩＢＶ对流免疫电泳沉淀效价可达９ｌｏｇ２,效果最佳。联合培养省时、省力、节约鸡胚损耗。     

松乳菌多糖在鸡胚水平抗新城疫病毒研究

对松乳菌多糖(胞内多糖和胞外多糖)在鸡胚水平上进行了抗新城疫病毒研究。接种致死量的新城疫病毒和不同浓度松乳菌胞内多糖(或胞外多糖)混合液到9～11日龄鸡胚。通过测定鸡胚平均死亡时间(MDT)、死亡鸡胚尿囊液血凝效价评价多糖对病毒的抑制作用。结果表明松乳菌胞外多糖对病毒没有抑制作用,不能延长新城疫病毒对鸡胚的致死时间,也不能降低血凝效价;松乳菌胞内多糖对新城疫病毒有一定的抑制作用,减缓了鸡胚的死亡,降低了血凝效价,但是对病毒不能完全杀灭。     

鸽新城疫病毒中等毒力株感染的实验室诊断

将临床初诊为新城疫的送检病鸽组织匀浆 ,接种SPF鸡胚。用致死鸡胚的尿囊液做血液凝集试验 ,并用鸡新城疫阳性血清进行血凝抑制试验。结果含毒尿囊液的血凝反应可以被新城疫阳性血清抑制 ,鸡胚半数感染剂量 (EID50 )为 1 0 - 3/ 0 1mL ,鸡胚平均死亡时间 (MDT)为 72 8h ,证明所分离的病毒为具中等毒力的鸽新城疫病毒     

中草药在鸡胚水平上抗病毒作用研究

试验对地锦草、黄连、蒲公英提取液在鸡胚水平上进行了抗猪流感病毒和新城疫病毒作用研究.猪流感病毒(或新城疫)病毒分别和地锦草、黄连、蒲公英提取液混合接种到9～11日龄鸡胚,继续孵化,记录鸡胚死亡时间和测定死亡鸡胚尿囊液血凝价.结果表明:地锦草对猪流感病毒没有作用,蒲公英对新城疫病毒没有作用;黄连和蒲公英对猪流感病毒有一定的抑制作用.地锦草和黄连对新城疫病毒有一定的抑制作用,减缓了鸡胚的死亡,降低了血凝效价,但是不能完全杀灭病毒.     

鸽新城疫病毒分离株的部分生物学特性鉴定及疫苗免疫试验

从暴发疑似鸽新城疫的某赛鸽场分离到1株病毒，通过血凝（HA)试验、血凝抑制（HI）试验及鸡胚中和试验初步鉴定为鸽新城疫病毒，进而进行了鸡胚半数感染量（EID50）、鸡胚平均死亡时间（MDT）测定和对不同动物红细胞的凝集试验，证明该分离株属新城疫强毒力毒株，将该毒株经鸡胚尿囊液增殖后用甲醛灭活，制成油佐剂来活苗，对鸽免疫后检测其血清抗体水平并进行攻毒试验，结果在免疫后21d抗体达到高峰，攻毒试验表明油佐剂灭活苗对鸽新城疫病毒感染有较强的保护力。     

进口法国种鸽新城疫病毒的分离和鉴定

用鸡成纤维细胞和鸡胚从30只进口法国种鸽中分离出一株病毒,细胞培养物的HA效价为3log2,尿囊液的HA效价为4log2,新城疫阳性血清能抑制这种血凝作用,HI效价均为7log2,禽流感阳性血清不能抑制这种血凝作用.通过透射电镜观察、毒力测定等最终确认,分离出的病毒为新城疫病毒.     

母鸽新城疫病毒血清抗体和卵黄抗体的检测及其相关性分析

为了解母鸽新城疫病毒血清抗体和卵黄抗体检测结果的相关性,试验采集了新城疫疫苗免疫母鸽的血液和卵黄,通过血凝抑制试验检测了新城疫病毒的抗体,利用GraphPad Prism软件中的Spearman Analysis分析了血清抗体效价和卵黄抗体效价的相关性。结果表明:绝大多数样品提取的卵黄液抗体效价低于血清抗体效价,而绝大多数样品的卵黄原液抗体效价高于血清抗体效价。血清抗体效价、提取的卵黄液抗体效价与卵黄原液抗体效价两两之间呈显著或极显著正相关(P0.05或P0.01),提取的卵黄液抗体效价与血清抗体效价之间的相关系数最高。说明鸽新城疫病毒血清抗体和卵黄抗体有明显的相关性,提取的卵黄液可代替血清用于母鸽新城疫病毒抗体的检测。     

牛β-干扰素在新城疫病毒La Sota疫苗株中的高效稳定表达及抗病毒活性检测

研究利用新城疫病毒La Sota株作为表达载体,构建表达牛β-干扰素基因的重组新城疫病毒全基因组质粒pFL-BoIFN-β, 与辅助质粒共转染BHK-21细胞后获得表达BoIFN-β的重组新城疫病毒.收获的鸡胚尿囊液内的重组病毒经RT-PCR检验证实重组病毒含有相应外源基因.将重组病毒尿囊液经紫外线照射以灭活新城疫病毒,利用表达绿色荧光蛋白的重组水泡性口炎病毒在牛肾细胞上测定rL-BoIFNβ抗病毒活性, 表达BoIFN-β的重组新城疫病毒能有效抑制重组水泡性口炎病毒在牛肾细胞上的复制, rL-BoIFNβ接种SPF鸡胚所收尿囊液抗病毒活性高达2×107 IU/mL.结果表明:重组新城疫病毒rL-BoIFNβ接种的SPF鸡胚尿囊液具有高效而稳定的抗病毒活性,重组新城疫病毒可以作为外源蛋白的高效表达载体而广泛应用.     

不同剂型禽流感疫苗对蛋鸡免疫效果的分析与讨论

使用重组禽流感病毒灭活疫苗和禽流感-新城疫重组二联活疫苗对鸡禽流感进行免疫攻毒试验,通过血凝和血凝抑制(HI)试验技术检测机体内两种不同剂型疫苗的禽流感抗体水平,从中选出最佳免疫效果的疫苗。结果显示,禽流感病毒灭活疫苗优于禽流感-新城疫重组二联活疫苗,建议在防控禽流感时使用前者。     

新城疫病毒（NDV）在免疫鸡胚中增殖条件的优化

新城疫病毒（NDV）在鸡胚中的增殖受母源抗体，接种日龄，培养时间，接种剂量，种毒及其稀释倍数，孵化温度，孵化湿度等因素的影响，通过对NDV在免疫鸡胚中增殖条件的优化配置，得出如下结果，10日龄的免疫鸡胚，在母源抗体较高的情况下，（7log2-9log2)，接种种毒的稀释倍数为1000－5000倍，经过一定孵育时段，尿囊液量与病毒的血凝效价均可出现了个极值。     

鸡新城疫诊断抗原制备方法的研究

将疑似新城疫病料无菌采集后进行RT-PCR鉴定,将阳性病料研磨后接种SPF鸡胚,收获的阳性尿囊液进行血凝试验(HA)及血凝抑制试验(HI)检测病毒效价,病毒效价达到2~7~2~8,病毒凝集效价达到10log2。使用10%蔗糖溶液及18-25k Da透析袋对阳性尿囊液进行浓缩,浓缩至原体积的1/5;10%福尔马林灭活诊断抗原,经过6h后灭活达100%;诊断抗原效价测定:血凝效价为2~(10);血凝抑制效价为10log2。利用制备的鸡新城疫诊断抗原和鸡新城疫标准诊断抗原与鸡新城疫标准检测抗体进行血凝试验(HA)与血凝抑制试验(HI),对比结果:鸡新城疫诊断抗原病毒效价为2~(10),高于鸡新城疫标准诊断抗原的2~9,鸡新城疫诊断抗原凝集效价为10log2,等同于鸡新城疫标准诊断抗原,证明所制备鸡新城疫诊断抗原符合要求,可以应用到生产实践中。     

鸡新城疫病毒(NDV-XX08)单克隆抗体的制备与鉴定

本研究采用鸡胚繁殖NDV-XX08,差速离心法纯化NDV,用纯化的病毒免疫BALB/c小鼠。取免疫小鼠的脾细胞与NSO细胞进行融合,用间接ELISA和血凝抑制试验(HJ)进行筛选,挑选效价高的杂交瘤细胞进行克隆和亚克隆,建立阳性杂交瘤细胞株,最终得到一株稳定分泌抗体的杂交瘤细胞,命名为4F12。采用体外细胞培养和体内诱生腹水的方法制备了其McAb。对获得的单克隆抗体采用ELISA,HI,Western-Blotting方法进行鉴定。杂交瘤细胞培养上清和腹水的ELISA效价分别为1:160和1:3.2×10~4。获得的单克隆抗体与NDV具有良好的特异性反应,与鸡胚阴性尿囊液、鸡正常组织、鸡[gG、鸡传染性囊病病毒、鸡传染性支气管炎病毒、禽流感检测抗原均无交叉反应性。HI试验表明,制备的单抗没有血凝抑制活性。Western-Blotting证明获得的单抗与新城疫病毒蛋白有特异性反应。经连续传代20次,冻存、复苏3次,4F12杂交瘤细胞株仍能稳定分泌抗体。     

2000～2004年间广西新城疫病毒强毒株的分离与鉴定

近年来从广西不同地区规模化鸡场的13个肉鸡群病死鸡中分离到13株有血凝性的病毒,这13株病毒的血凝性均能被新城疫标准阳性血清抑制,经过血凝(HA)试验、血凝抑制(HI)试验和RT-PCR检测结果确定为新城疫病毒.13株病毒的生物学特性测定实验结果证明该13株病毒均为新城疫病毒强毒株.     

乌鸡新城疫病毒中发型毒株的分离与鉴定

从发病的43日龄乌鸡群中分离到1株病毒，经鸡胚传代培养后，测定其F3代尿囊液血凝（HA）效价为2^8，HI试验中能被鸡ND阳性血清中和，鸡胚平均死亡时间（MDT）为60．8h，1日龄雏鸡脑内接种指数（ICPI）为0．8，血凝解脱时间小于10min，血凝素热稳定性差。表明该分离株为新城疫病毒中发型毒株。     

米糠凝集素的提取及其对新城疫病毒血凝效价的影响

用萃取、浸泡等方法,提取米糠凝集素,分别测定了对鸡红细胞的凝集作用及对新城疫病毒血凝效价的影响。结果显示,无论萃取法,还是浸泡法提取的植物凝集素,其血凝集价没有差异,均为25;在体外提高新城疫血凝效价2滴度,并能在一定程度上抑制Lasota病毒在鸡胚繁殖。这提示米糠凝集素对鸡新城疫苗血凝效价和繁殖有影响。