口蹄疫灭活疫苗中蛋白质含量测定方法的比较

口蹄疫灭活疫苗中蛋白质含量的测定,可以反映出疫苗生产工艺的优劣以及疫苗质量。采用凯氏定氮法、改良Lowry法和考马斯亮蓝法三种较常见的蛋白质含量测定方法,对全国六个不同口蹄疫灭活疫苗生厂家共计15批疫苗的总蛋白质含量进行测定,并对测定结果进行比较,同时采用SDS—PAGE对样品中蛋白质含量进行定性,验证以上三种方法测定结果。结果表明,这些疫苗的总蛋白质含量差异比较大,1mL水相样中蛋白质含量在50—2000μg范围内。三种检测方法比较表明,改良Lowry法能较真实的反映口蹄疫灭活疫苗中蛋白质含量;与凯氏定氮法相比,此方法操作简单,工作效率高,而且低耗。     

三种酶纯化常用试剂对Bradford法的干扰研究

为了研究常用酶纯化试剂对考马斯亮蓝法(Bradford法)测定蛋白质含量的影响,试验以牛血清白蛋白(BSA)为标准蛋白,探索硫酸铵、乙醇和丙酮对该方法的干扰规律和消除这些干扰的方法,然后在丙酮沉淀脂肪酶试验中进行验证。结果表明:硫酸铵对蛋白质含量测定值影响较小,而高浓度的丙酮、乙醇造成测定值偏高数倍;将蛋白质样品稀释5倍可基本消除丙酮、乙醇的干扰。在验证试验中,将上清液稀释5倍,然后测定蛋白质含量,解决了随着丙酮浓度升高,沉淀和上清液蛋白质含量测定值同时增加的问题。说明稀释是解决高浓度乙醇、丙酮对Bradford法干扰的有效方法。     

高效体积排阻色谱检测口蹄疫灭活疫苗中146S抗原含量的疫苗前处理方法比较

为提高高效体积排阻色谱检测口蹄疫灭活疫苗146S抗原含量的准确性、适用性和操作性,分别采用正戊醇、正丁醇和三氯甲烷对9批口蹄疫灭活疫苗进行破乳处理,对三种方法的破乳后水相得率和146S抗原含量的色谱检测结果进行比较。结果表明,破乳后水相得率分别为:正戊醇38%~49%,正丁醇42%~44%,三氯甲烷50%;9批疫苗的色谱结果均检测到146S特征峰,146S含量在0.7~12.5μg/mL,3次测定的相对标准偏差最大值为4.0%,9批疫苗不同前处理方法的检测结果均值具有统计学意义,三氯甲烷组与正戊醇组数据一致性强,正丁醇组测定值偏低。使用三氯甲烷对疫苗进行破乳,不仅操作简便快速,而且破乳水相得率稳定,是最优的破乳方法。实验进一步优化了口蹄疫灭活疫苗146S抗原含量检测的高效体积排阻色谱法,为该方法的科学应用提供了数据支撑。     

高效体积排阻色谱检测口蹄疫灭活疫苗中146S抗原含量的疫苗破乳方法比较

为提高高效体积排阻色谱检测口蹄疫灭活疫苗146S抗原含量的准确性、适用性和操作性,分别采用正戊醇、正丁醇和三氯甲烷对9批口蹄疫灭活疫苗进行破乳处理,对三种方法的破乳后水相得率和146S抗原含量的色谱检测结果进行比较。结果表明,破乳后水相得率分别为:正戊醇38%～49%,正丁醇42%～44%,三氯甲烷50%;9批疫苗的色谱结果均检测到146S特征峰,146S含量在0.7～12.5μg/mL,3次测定的相对标准偏差最大值为4.0%,9批疫苗不同前处理方法的检测结果均值具有统计学意义,三氯甲烷组与正戊醇组数据一致性强,正丁醇组测定值偏低。使用三氯甲烷对疫苗进行破乳,不仅操作简便快速,而且破乳水相得率稳定,是最优的破乳方法。实验进一步优化了口蹄疫灭活疫苗146S抗原含量检测的高效体积排阻色谱法,为该方法的科学应用提供了数据支撑。     

重组禽流感病毒灭活疫苗(细胞源)破乳方法对比及应用

为寻找适合重组禽流感病毒灭活疫苗(细胞源)油包水剂型疫苗的破乳方法,进而能够快速、有效的提取疫苗中的水相,通过析出的水相,尝试进行一些关于疫苗质量的试验,寻找合适的破乳方法并进行检测方法的运用。破乳采用三种方法进行对比,即:冻融法、水浴法、丙酮沉淀法,提取的水相进行细菌内毒素测定和红细胞凝集试验。结果表明:通过冻融的方法能够提取水相,而水浴方法和丙酮沉淀方法未出现水相析出,故采用冻融的方法更适合重组禽流感病毒灭活疫苗(细胞源)油包水剂型水相的析出并且操作简便。对提取的水相进行细菌内毒素测定和红细胞凝集试验:细菌内毒素测定结果均小于10 EU/m L,与乳化前半成品细菌内毒素测定结果相一致。通过乳化前半成品的红细胞凝集试验结果和乳化后破乳析出水相的细胞凝集试验结果对比,无明显变化,符合乳化时水相各组分配比情况,通过两组试验说明乳化后灭活病毒细菌内毒素未增加,HA效价无变化,疫苗仍保持良好的质量。     

猪重组IL-2、IL-4和IFN-γ对口蹄疫合成肽疫苗的免疫增强作用研究

为了研究猪IL-2、IL-4和IFN-γ对口蹄疫合成肽疫苗的免疫佐剂效应,将经测定具有生物学活性的猪重组IL-2、IL-4和IFN-γ与口蹄疫合成肽疫苗配伍免疫仔猪,检测仔猪抗口蹄疫抗体水平和血清细胞因子IL-4、IL-10、IL-17和IFN-γ含量的变化,观察其免疫佐剂效应。结果表明:制备的IL-2、IL-4和IFN-γ重组蛋白质均有较好的生物学活性,其中IL-2和IFN-γ重组蛋白质均能极显著提高仔猪抗口蹄疫抗体水平(P0.01),而IL-4重组蛋白质抑制口蹄疫抗体的产生(P0.01)。血清细胞因子检测结果发现口蹄疫疫苗+IL-4组的IL-4和IL-10含量均较空白疫苗免疫猪显著升高(P0.05),口蹄疫疫苗+IL-2组及口蹄疫疫苗+IFN-γ组的IFN-γ含量较空白疫苗免疫猪极显著升高(P0.01)。结果提示,重组细胞因子IL-2和IFN-γ分别作为免疫佐剂与口蹄疫疫苗联用,能显著增强机体的体液和细胞免疫应答。     

应用高效体积排阻色谱法测定市场抽检口蹄疫灭活疫苗中的抗原（146S）含量

应用高效体积排阻色谱法对5批市场抽检口蹄疫灭活疫苗中有效抗原(146S)含量进行检测,并使用口蹄疫O型、A型和亚洲1型抗原测试卡对5批疫苗中的抗原进行鉴别。结果显示高效体积排阻色谱法测定146S标准品浓度与峰面积线性关系良好,5批疫苗均检测到146S特征吸收峰(R2=0.9937,n=7),经计算得到灭活疫苗中有效抗原含量分别为2.05、3.73、2.03、4.87、3.41μg/m L;使用抗原测试卡鉴别了5批疫苗中的抗原类型。结果表明,高效体积排阻色谱法简便、高效,准确度较高,有望在口蹄疫灭活疫苗的质量控制中发挥重要作用。     

对多种口蹄疫疫苗有效抗原（146S）、总蛋白、内毒素三者含量测定的比较研究

对市场上流行使用几种口蹄疫灭活疫苗进行有效146S抗原、总蛋白及内毒素含量测定,同时对疫苗破乳后的水相进行了SDS-PAGE分析。不同疫苗的质量差异极其显著,有效146S抗原含量从未检出至8.53μg/头剂;总蛋白含量从未检出至4 325μg/头剂;内毒素含量从0.55至15.65 EU/头剂。运用SDS-PAGE、Western bolt技术分析表明各种疫苗所含杂蛋白含量及有效抗原量差异较大。部分疫苗的有效146S抗原含量不足,非抗原蛋白含量较大,大多数国产疫苗146S含量与非抗原蛋白之比在0.3%以下,这是造成很多口蹄疫疫苗免疫过程产生的副作用及免疫失败的主要原因之一。     

口蹄疫疫苗对奶牛保护力的研究

本试验比较了口蹄疫三价灭活疫苗（亚洲-I型、A型、O型）与口蹄疫二价灭活疫苗（亚洲-I型、O型）＋口蹄疫A型灭活疫苗对奶牛的免疫效果。选取8～16月龄的荷斯坦母牛300头,随机分为两组,每组150头,分为三价疫苗组及二价疫苗＋A型疫苗组,皮下免疫,三价疫苗免疫组注射剂量为3mL／头;二价疫苗＋A型疫苗免疫组注射剂量分别为3mL／头和2mL／头;免疫后第21天采集尾根动脉血液,利用液相阻断ELISA测定1：7蹄疫亚洲-I型和A型抗体效价,IHA方法测定口蹄疫。型抗体效价。结果显示,口蹄疫亚洲-I型抗体效价在1：128以上的比例,二价疫苗＋A型疫苗组为55．33％,三价疫苗组为58．00％,差异不显著（P〉0．05）;口蹄疫A型抗体效价在1：128以上的比例,二价疫苗＋A型疫苗组为56．67％,三价疫苗组为60．00％,差异显著（P〈0．05）;1：7蹄疫。型抗体效价在26以上的比例,二价疫苗＋A型疫苗免疫组52．67％,三价疫苗免疫组为79．34％．差异极显著（P〈0．01）。     

猪口蹄疫O型合成肽疫苗免疫效果试验

目前防制口蹄疫是采用常规灭活疫苗进行免疫预防，但灭活苗免疫后常出现食欲减退、体温升高等不良反应．免疫效价持续时间不长。我们对猪口蹄疫O型合成肽疫苗从其免疫原性、安全性、抗体持续性进行了试验和临床应用，结果较满意。     

Asia I型口蹄疫疫苗效力检验替代方法的初步研究

使用三株针对AsiaⅠ型口蹄疫146S抗原的杂交瘤细胞株(1#G3C2、2#G6B9、10#C2G1)大量生产腹水单克隆抗体,粗提纯化并按一定的比例进行混合。初步建立混合腹水单克隆抗体介导的间接夹心ELISA方法,使用该方法测定AsiaⅠ型病毒灭活抗原、O型病毒灭活抗原、正常BHK21细胞培养液,结果表明该方法特异性好,所测定OD值和AsiaⅠ型抗原稀释倍数呈明显线性关系。用该方法对11批AsiaⅠ型、O型单价或双价成品疫苗破乳抗原进行测定,结果表明不同批次不同企业生产的疫苗完整病毒颗粒抗原含量有差异,进一步完善有望用于AsiaⅠ型口蹄疫成品疫苗中有效颗粒抗原含量的测定,从而发展成一种疫苗效力检验替代方法。     

猪口蹄疫、猪瘟、猪蓝耳病疫苗最佳免疫方法研究

为探索生猪重大疫病的科学免疫方法,确定最佳免疫程序,笔者设计并开展了口蹄疫（FMD）合成肽苗（或灭活苗）、猪瘟（HC）脾淋苗、高致病性蓝耳病弱毒疫苗（或灭活苗）的不同组合注射、单独注射、不同疫苗类型注射的试验研究.结果表明：3种疫苗不同组合注射或单独注射,以及使用不同类型疫苗注射,其免疫副反应均无明显差异;平均免疫抗体效价及群体合格率各组间存有差异;采用猪口蹄疫、猪瘟、猪蓝耳病3种疫苗同时分点注射,以及仔猪首免口蹄疫、猪蓝耳苗,再免疫口蹄疫、猪瘟苗的免疫效果最佳.     

Immune Effect of Inactivated Vaccines against Foot-and-Mouth Disease and Their Interference on Differential Diagnosis

Vaccination with inactivated vaccine is an important measure to prevent and control foot-and-mouth disease (FMD), however, the immune effect and antigenic purity of inactivated vaccines are two major concerns for the establishment and evaluation of FMD free zones with vaccination. In this study, four groups of FMD type O and type A bivalent inactivated vaccines from 3 FMD vaccine manufacturers (designated as A, B and C) were selected to inoculate healthy juvenile cattle of FMD free. All cattle were immunized 3 or 4 times at a 1-month interval. Serum samples were collected before and after 1 month of every vaccination to determine the level of antibody to structural protein and non-structural protein. Results：(1) The qualified rates of antibody to structural protein: in group a1 (vaccine from company A, different batches), the antibody qualified rate could reach 100% for type O and type A, respectively after each vaccination. In group a2 (vaccines from company A, same batch), the antibody qualified rates were 36.7%, 98.3% and 100% for type O, and 15%, 86.7% and 100% for type A after the first to the third vaccination, respectively. In group b (vaccine from company B, same batch), the antibody qualified rates were 18.3%, 97% and 100% for type O, and 1.7%, 45% and 53.3% for type A after the first to the third vaccination, respectively. In group c (vaccines from company C, same batch), the antibody qualified rates were 26.7%, 96.7% and 100% for type O, and 21.7%, 71.7% and 100% for type A after the first to the third vaccination, respectively. (2) Antibody positive rate to non-structural protein 3ABC (confirmed with second ELISA test): In group a1, the positive rates were 0.7%, 1.4%, 9.5% and 4.8% after the first to the fourth vaccination, respectively; In group a2 and c, no 3ABC antibody-positive animal was detected after 3 repeated vaccination; In Group b, only one animal with a positive rate of 0.6% was detected after the third vaccination. The antibody qualified rates to the structural protein of FMDV in 3 of the 4 groups were far less than 70% after the primary vaccination, however, those were increased significantly after boost and repeated vaccination. The antigen purity of vaccines in three groups (a2, b and c) can meet the requirement of OIE standard on the FMD vaccine, however, the seroconversion to 3ABC antibody was obvious in animals from group a1 after repeated vaccination, which would cause some extent of interference to differential diagnosis. Also, a combination of a primary screening test and a confirmatory ELISA test can further improve the accuracy of differential diagnosis. This study provides an important scientific basis to make a rational program for establishment and evaluation of FMD free zone with vaccination.     

口蹄疫灭活疫苗的免疫效果及其对鉴别诊断的干扰

灭活疫苗免疫是防控口蹄疫的重要措施,但是灭活疫苗的免疫效果及其对感染与免疫鉴别诊断的干扰一直是口蹄疫免疫无疫区建设评估需要明确的重要问题。本研究中选择了3个企业（代号A、B与C）的4组口蹄疫O型与A型二价灭活疫苗,分别免疫口蹄疫抗体阴性健康未成年牛,免疫3～4次,测定免疫前后结构蛋白和非结构蛋白抗体的应答水平。结果显示：（1）结构蛋白抗体合格率：a1组（A企业多批次疫苗）4次免疫后O型和A型均为100%;a2组（A企业同批次疫苗）一~三免O型为36.7%、98.3%与100%,A型为15%、86.7%与100%;b组（B企业疫苗）一~三免O型为18.3%、97%与100%,A型为1.7%、45%与53.3%;c组（C企业疫苗）一~三免O型为26.7%、96.7%与100%,A型为21.7%、71.7%与100%。（2）非结构蛋白3ABC抗体阳性率（两种方法复核结果）：a1组一~四免分别为0.7%、1.4%、9.5%与4.8%;a2组和c组三次免疫均未检测到阳性;b组仅三免后阳性率为0.6%。3组灭活疫苗首次免疫牛的抗体合格率远不及70%,但加强免疫后抗体合格率均显著提高;非结构蛋白抗体检测结果表明有3组疫苗的抗原纯净度符合OIE的要求,但a1组灭活疫苗免疫后,仍然对感染与免疫鉴别诊断存在干扰;采用两种非结构蛋白抗体检测方法进行复核检验,可以提高感染与免疫鉴别诊断的准确性。本研究为口蹄疫免疫无疫评价方案的制定提供了科学依据。     

口蹄疫灭活疫苗的生产工艺概述

灭活疫苗仍然是当前防控口蹄疫使用的主要疫苗,因此研究灭活疫苗生产工艺具有非常重要的现实意义.详细论述了口蹄疫灭活疫苗生产过程,并对近年来生产工艺方面的一些研究进展做了简要介绍.     

豚鼠动物模型评价牛口蹄疫Asia-1型灭活疫苗效力的研究

以豚鼠为试验动物模型,探索一种应用豚鼠替代牛进行牛口蹄疫Asia-1型灭活疫苗效力检验的方法.豚鼠和牛同步对6批牛口蹄疫Asia-1型灭活疫苗进行PD50效力检验,其中2批进行重复性试验.豚鼠分别在免疫后7、14、21和28天采血检测Asia-1型的中和抗体水平.统计学分析显示,测定的豚鼠PD50和牛PD50之间具有极...     

口蹄疫灭活疫苗研究进展

灭活疫苗仍然是当前口蹄疫免疫控制的主要疫苗,研制口蹄疫灭活疫苗具有重要的现实意义,其研制方法在不断丰富和完善。文章详细描述了口蹄疫灭活疫苗研制的重要步骤及其进展,包括毒株筛选,病毒生产、灭活、抗原浓缩、纯化和配苗及疫苗的质量控制。制苗毒株的选择是研制疫苗的首要问题,直接关系到疫苗的免疫效果;病毒灭活和随后的安全试验是在制备灭活FMD疫苗中最关键的步骤;抗原浓缩纯化和配苗是保证疫苗良好免疫效果的必需。最后阐述了口蹄疫灭活疫苗在口蹄疫防控中的作用。     

The efficacy of FMD vaccine reduced non-structural proteins with a mAb against 3B protein

A monoclonal antibody, 3BIgG, against the prokaryotically expressed foot-and-mouth disease virus (FMDV) non-structural protein (NSP) 3B was obtained. The 3BIgG-sepharose conjugant (3BmAb-6BFF) was prepared by adding the purified 3BIgG into epoxy-activated sepharose 6BFF, incubating with the inactivated FMDV, and then removing the sepharose by centrifugation. The vaccine was made from the supernatant emulsified with oil-adjuvant ISA206. Ten guinea pigs, 26 pigs and six cattle were vaccinated, and a vaccination control group was included without treatment with 3BmAb-6BFF. After 28 days, 9/10 pigs challenged with FMDV were protected, this result was the same as the control group, indicating that the vaccine potency was not reduced after treatment with 3BmAb-6BFF. The other animals were vaccinated weekly for nine weeks, and serum samples were collected to detect 3ABC-antibody titers. The results showed that 3ABC-antibody production was delayed and the positive antibody rates were lower when vaccination was carried out using vaccines treated with 3BmAb-6BFF compared with untreated vaccines. The findings of this study suggest that it is possible to reduce NSPs using a mAb-sepharose conjugant in FMD vaccines without reducing their efficacy.