小鼠免疫刺激后乳腺pIgR mRNA转录及乳特异性IgA含量的变化

为了探讨免疫刺激后昆明小白鼠乳腺pIgR基因mRNA转录和特异性IgA含量变化。选择48只健康受孕昆明小白鼠,分为A、B、C、D组,分别于分娩后第4天注射灭菌生理盐水、Lipase+灭菌生理盐水、空ISCOM和Lipase+LTB+ISCOM,每组注射12只,并于分娩后第8天和12天采集小鼠乳样、血样和乳腺组织,用间接ELISA法测定乳和血浆中的特异性IgA含量,用Real Time-PCR检测小鼠乳腺中pIgR基因的相对转录水平。结果表明,免疫刺激对小鼠血浆中特异性IgA的含量无显著性影响(P0.05),但是免疫B组和D组中小鼠分娩后12 d的乳中特异性IgA含量显著高于8 d乳中的特异性IgA含量(P0.05)。RealTime-PCR相对定量也表明,免疫B组和D组中小鼠分娩后12 d的乳腺pIgR基因转录水平显著高于8 d乳腺pIgR基因转录水平(P0.05)。免疫刺激后小鼠乳腺pIgR基因转录水平的提高能增加乳中特异性IgA的含量。     

泌乳阶段与产奶季节对初产奶牛牛乳体细胞数的影响

为探究初产奶牛牛乳体细胞数在不同泌乳阶段和产奶季节的变化规律,旨在为采取合理措施降低牛乳体细胞数和改善乳品质提供理论依据,研究以2012年5月至2013年4月期间选择2126头初产奶牛13168条DHI测定记录,以泌乳阶段和产奶季节及其两者的互作作为研究因子,分析泌乳阶段和产奶季节及其互作对初产奶牛牛乳体细胞数（SCC）变化规律的影响。结果表明,泌乳阶段和产奶季节及其互作对体细胞数评分（SCS）具有极显著的影响（P〈0．0001）。初产奶牛于泌乳早期牛乳SCC较高（294．16×10^3个／mL）,随着泌乳月龄的增加,SCC逐渐降低,泌乳中期（192．71×10^3个／mL）和泌乳晚期（185．51×10^3个／mL）牛乳SCC基本保持稳定;初产奶牛泌乳早期牛乳SCS比泌乳中期和泌乳晚期极显著升高（P〈0．01）;初产奶牛牛乳SCC冬季最高（312．72×10^3个／mL）,春季次之（236．48×10^3个／mL）,秋季最低（168．59×10^3个／mL）;初产奶牛冬春季牛乳SCS比夏秋季极显著升高（P〈0．01）。奶牛乳中体细胞数受胎次、泌乳月龄、产奶季节等因素的影响。产奶季节对SCC的影响主要反映了温度和湿度因素对奶牛的影响。     

BRCA1基因多态性及其与奶牛乳房炎抗性的相关性研究

为了研究BRCA1基因突变与荷斯坦奶牛体细胞数和体细胞评分的关系,试验通过对BRCA1基因外显子13、14进行克隆、序列比对和挖掘已有突变的方法确定该基因的多态位点,采用SNaPshot技术检测了BRCA1基因25025 T>A和46126 G>T突变位点在北京郊区荷斯坦奶牛群体中的分布,并对突变位点与体细胞数和体细胞评分进行了关联分析。结果表明,荷斯坦奶牛BRCA1基因2个位点均检测到3种基因型,其中25025 bp位点TT基因型为优势基因型,46126 bp位点GT基因型为优势基因型。25025 bp位点AA基因型个体体细胞数(P<0.05)和体细胞评分(P<0.01)都显著低于TT和TA基因型;46126 bp位点TT基因型个体体细胞数显著低于GG和GT基因型个体(P<0.05),但3种基因型个体体细胞评分无显著差异(P>0.05)。本研究结果初步表明,BRCA1基因25025和46126 bp位点可作为中国荷斯坦牛乳房炎抗性的标记辅助选择。     

乳及乳制品中IgG含量检测方法的研究进展

牛奶中免疫球蛋白具有良好的免疫保护功能,被越来越广泛的添加到乳制品中,而此类乳制品常常按IgG含量来定价,因此,寻求可靠的IgG检测方法越来越重要。作者就目前国际常用的检测方法进行阐述,包括层析分离法、电泳分离法、免疫学方法和物理方法,并比较了各种方法的优缺点。     

奶牛B2M基因单倍型组合与乳腺Fc受体(FcRn)mRNA表达丰度的相关分析

为研究奶牛B2M基因多态性与FcRn相对表达丰度之间的相关性以提高乳中IgG的转运量.本研究采集40头健康中国荷斯坦奶牛的乳腺组织样本,提取组织DNA后特异性扩增B2M基因片段,回收测序,根据测序结果寻找SNPs位点并分型,提取乳腺组织总RNA并反转录为cDNA,再利用Real-time PCR方法检测FcRn mRNA表达丰度.结果发现了3个B2M基因SNPs位点,能组成4种单倍型组合,其中单倍型组合H4的FcRn mRNA表达丰度最高,显著高于其他3种单倍型组合(P＜0.05),但单倍型组合H1,H2和H3之间差异均不显著(P＞0.05).B2M基因单倍型组合能影响奶牛乳腺FcRn mRNA表达丰度.     

不同剂量胰岛素、胰高血糖素和甲状腺素处理对奶牛乳腺上皮细胞FcRn mRNA表达的影响

 【目的】采用real-time PCR方法检测体外激素处理对奶牛乳腺上皮细胞FcRn（neonatal Fc receptor,FcRn）mRNA表达的影响。【方法】在乳腺上皮细胞培养液中添加不同浓度胰高血糖素（0.01、0.1和1 μmol•L-1）、胰岛素（0.005、0.1和0.5 μmol•L-1）、甲状腺素T4（0.01、0.1和1 μmol•L-1）,体外培养并收集细胞,提取细胞mRNA后,利用real-time PCR检测FcRn mRNA的相对丰度。【结果】在一定添加剂量范围内,随着添加剂量的增加,甲状腺素和胰高血糖素能够显著地促进FcRn mRNA表达量升高（P＜0.05）,胰岛素在添加量为0.005 μmol•L-1和0.5 μmol•L-1时FcRn mRNA的表达量低,但在0.1 μmol•L-1添加时表达量显著升高（P＜0.05）。【结论】添加外源胰岛素、胰高血糖素和甲状腺素能够影响FcRn mRNA的表达,为进一步研究乳腺内FcRn受体变化以及影响因素提供了依据。     

抗幽门螺杆菌UreB蛋白免疫乳的制备

诱导UreB蛋白克隆菌株表达UreB蛋白,并制备成亚单位疫苗,免疫正常泌乳奶牛,测定乳清中特异性抗体效价以及牛乳常规成分、血清常规成分等健康指标.结果表明:UreB蛋白表达浓度为0.39 mg/mL;乳清特异性抗体IgG和IgM效价显著高于对照组(P＜0.05),IgA效价有所上升,但未达到显著水平(P＞0.05);奶...     

口蹄疫疫苗对奶牛保护力的研究

本试验比较了口蹄疫三价灭活疫苗（亚洲-I型、A型、O型）与口蹄疫二价灭活疫苗（亚洲-I型、O型）＋口蹄疫A型灭活疫苗对奶牛的免疫效果。选取8～16月龄的荷斯坦母牛300头,随机分为两组,每组150头,分为三价疫苗组及二价疫苗＋A型疫苗组,皮下免疫,三价疫苗免疫组注射剂量为3mL／头;二价疫苗＋A型疫苗免疫组注射剂量分别为3mL／头和2mL／头;免疫后第21天采集尾根动脉血液,利用液相阻断ELISA测定1：7蹄疫亚洲-I型和A型抗体效价,IHA方法测定口蹄疫。型抗体效价。结果显示,口蹄疫亚洲-I型抗体效价在1：128以上的比例,二价疫苗＋A型疫苗组为55．33％,三价疫苗组为58．00％,差异不显著（P〉0．05）;口蹄疫A型抗体效价在1：128以上的比例,二价疫苗＋A型疫苗组为56．67％,三价疫苗组为60．00％,差异显著（P〈0．05）;1：7蹄疫。型抗体效价在26以上的比例,二价疫苗＋A型疫苗免疫组52．67％,三价疫苗免疫组为79．34％．差异极显著（P〈0．01）。     

牛奶中β-乳球蛋白的生物学活性及其影响因素

β-乳球蛋白是牛奶乳清蛋白的重要组成成分。本文就牛奶中β-乳球蛋白的结构特点、生物学功能以及影响其生物学活性因素等方面进行了综述,并对β-乳球蛋白的应用前景进行了展望,为今后β-乳球蛋白的应用和加工工艺提供一定的理论依据。     

利用小鼠模型的脲酶免疫刺激物效果评价

建立小鼠模型对制备的脲酶免疫刺激物进行免疫效果及其安全性评价。利用IPTG诱导脲酶基因克隆菌,大量表达脲酶UreB蛋白,用SDS-PAGE及Bradford方法对表达产物进行定性和定量分析;将脲酶UreB蛋白与弗氏(不)完全佐剂混合并乳化,制备成脲酶免疫刺激物。选择健康昆明小白鼠40只,随机分为4组,分别注射脲酶免疫刺激物、弗氏(不)完全佐剂和生理盐水,同时设置非注射为空白对照。利用间接ELISA测定特异性抗体效价,利用血常规分析仪和流式细胞仪测定小鼠血常规。结果表明:构建克隆菌株可以大量表达脲酶B蛋白,质量浓度为0.39 mg/mL。小鼠血清中特异性IgG抗体效价能达到1∶10 000以上,显著高于其他3个对照组(P<0.05),而特异性抗体IgA和IgM效价与对照组比较差异不显著(P>0.05)。脲酶免疫刺激物能显著提高小鼠血中白细胞、淋巴细胞和中间细胞数及比例(P<0.05),而对血液其他指标没有显著影响(P>0.05)。本试验成功制备脲酶免疫刺激物,并能有效刺激机体免疫应答,为后期奶牛免疫试验打下基础。