犬瘟热病毒H、F、N基因试验免疫研究

以构建的真核表达载体pVAXLPH、pVAXLPF和pVAXLPN为基因疫苗,分组进行了免疫小鼠试验,对免疫鼠体内免疫应答水平进行了检测。结果显示:所构建的基因疫苗可以诱导小鼠产生特异性免疫应答反应,pVAXLPH pVAXLPF pVAXLPN 3个基因混合免疫小鼠诱导产生了较强的体液免疫和细胞免疫应答,免疫3次后血清中抗CDV ELISA抗体效价为0.332,而免疫前为0.158;抗CDV中和抗体效价为1∶(4~16);CD4 T/CD8 T比值为2.05±0.38,而对照组为1.99±0.56;免疫小鼠脾细胞对CDVLP及ConA刺激的增殖反应值分别为0.384和0.356。基因疫苗免疫犬试验中,进行了单用基因疫苗免疫和基因疫苗与CDV弱毒疫苗联合免疫效果的比较研究。结果显示,基因疫苗免疫3次后,血清中抗CDV ELISA抗体效价为0.296,抗CDV中和抗体效价为1∶(8~32)。基因疫苗免疫2次,再使用弱毒疫苗加强免疫1次,血清中抗CDV ELISA抗体效价为0.433,抗CDV中和抗体效价为1∶(16~64)。     

犬瘟热RT-POR快速诊断方法的建立

本研究建立了快速诊断犬瘟热感染的RT-PCR方法，并应用该方法对犬瘟热病死犬的脏器及感染犬体表采集样品进行了检测。为确定犬瘟热最佳的隔离检疫周期及采样部位，本研究对一例CDV攻毒犬感染病程收集的口鼻液、粪便、尿液样品进行了对比检测，结果证实粪便、口鼻液等易于获取的样品中CDV病毒滴度较高，并可在发病全程检测到，因此，它们可作为理想的受试样品。     

犬瘟热RT-PCR快速诊断方法的建立

本研究建立了快速诊断犬瘟热感染的RT-PCR方法,并应用该方法对犬瘟热病死犬的脏器及感染犬体表采集样品进行了检测。为确定犬瘟热最佳的隔离检疫周期及采样部位,本研究对一例CDV攻毒犬感染病程收集的口鼻液、粪便、尿液样品进行了对比检测,结果证实粪便、口鼻液等易于获取的样品中CDV病毒滴度较高,并可在发病全程检测到,因此,它们可作为理想的受试样品。     

犬瘟热的治疗体会

随着人们生活水平的提高和饮食结构的日趋完善,观赏犬、食用犬的饲养不断扩大,由犬瘟热病毒引起的犬瘟热已成为对犬危害最大的疾病之一。犬瘟热是由犬瘟热病毒(CDV)引起的一种高度接触性传染病。俗称狗瘟,3月龄至1岁最易感。死亡率极高。笔者在临床过程中曾治愈多例此病,效果比较理想。现简介如下：     

犬瘟热的发生情况分析及预防

犬瘟热是由犬瘟热病毒引起的一种高度接触性传染病,该病毒是副粘病毒科、麻疹病毒属的成员。我们对2003年2～4月份共诊治的犬瘟热及疑似病例55例进行了分析,其发病情况多种多样,较为复杂。现报道如下,供参考。     

犬瘟热的诊治

通过对犬瘟热的病原、流行病学特点、发病机理、临床症状、病理变化以及诊断的阐述,提出对该病应加强综合防疫措施,并根据具体症状进行对症治疗。     

犬瘟热的诊治

通过对犬瘟热的病原、流行病学特点、发病机理、临床症状、病理变化以及诊断的阐述,提出对该病应加强综合防疫措施,并根据具体症状进行对症治疗.     

犬瘟热病毒融合蛋白、血凝蛋白、基质蛋白和核衣壳蛋白基因DNA联合免疫的研究

为研究犬瘟热病毒(CDV)融合蛋白(F)、血凝蛋白(H)、基质膜蛋白(M)和核衣壳蛋白(N)基因核酸联合免疫的效力,本研究分别构建了表达经哺乳动物密码子优化的CDV F、H、M和N蛋白基因的真核重组表达质粒p CAGG-CDVF、p CAGG-CDVH、p CAGG-CDVM和p CAGG-CDVN;将其分别转染BHK-21细胞后通过间接免疫荧光试验表明,目的蛋白均获得正确表达。此外,将等量混合的重组质粒p CAGG-CDVF、p CAGG-CDVH、p CAGG-CDVM(3组份DNA疫苗)或重组质粒p CAGG-CDVF、p CAGG-CDVH、p CAGG-CDVM、p CAGG-CDVN(4组份DNA疫苗),分别以500μg/只经肌肉注射途径免疫A组(6只)或B组(6只)比格犬,间隔4周以相同剂量、途径加强免疫一次,并于初次免疫前、后不同时间检测血清CDV中和抗体。中和试验结果显示,A组和B组免疫犬,二免4周时,CDV中和抗体滴度平均值达到峰值,分别为6 log2和5.64 log2;在初免54周时,CDV中和抗体滴度均仍然维持5 log2。因此,3组份DNA疫苗为具有良好应用前景的犬瘟热候选疫苗。     

一例哈士奇犬犬瘟热的诊治

对一例确诊为犬瘟热的病犬用犬瘟热单克隆抗体和抗犬病毒基因工程干扰素进行综合治疗,取得了较好的效果。     

同时检测犬瘟热病毒和犬细小病毒双重PCR方法的建立

为建立可以同时检测犬瘟热病毒(CDV)和犬细小病毒(CPV)的双重PCR方法,本研究根据GenBank登录的CDV N蛋白序列和CPV NS基因保守序列,设计合成2对特异性引物。通过优化反应条件,对CDV阳性病毒株反转录后的cDNA模板和CPV的DNA模板进行双重PCR扩增,同时得到2条与试验设计相符的669 bp(CDV)和392 bp(CPV)特异性条带,建立了同时检测CDV和CPV的双重PCR方法。实验结果表明:在同一PCR反应体系中可以同时检测这2种病毒,而对犬腺病毒Ⅰ型、犬腺病毒Ⅱ型、狂犬病毒检测均为阴性;CDV和CPV的最低检出限分别为101.8TCID50和101.4TCID50。采用该方法对在黑龙江省不同地区所采集的30份犬病料样品进行检测,CDV阳性率为30%;CPV阳性率为23.33%,表明建立的PCR方法可以用于临床诊断。     

用半套式PCR检测犬瘟热病毒的研究

根据ＧｅｎＢａｎＫ中Ｂａｒｒｅｔｔ报道的犬瘟热病毒Ｏｎｄｅｒｓｔｅｐｏｏｒｔ弱毒株的附着或血凝蛋白基因序列,设计合成了能扩增７６０ｂｐ基因片段的半套式引物。用异硫氰酸胍－－酚－－仿一步抽取法提取细胞总ＲＡＮ进行反转录,再以此产物进行半套式ＰＣＲ扩增,并筛选出最佳ＰＣＲ扩增。结果经半套式ＰＣＲ扩增能得到与设计片段大小相同的产物,并且不扩增犬细小病毒、犬腺病毒、犬冠状病毒、狂犬病病毒的核酸。敏感性试验     

犬瘟热的诊断及其预防免疫的研究进展

本文对犬瘟热（CD）的诊断、预防免疫和免疫失败的影响因素及犬瘟热病毒（CDV）的宿主范围进行了综述。CDV不仅感染陆生食肉动物，而且也感染水生食肉动物，并且其宿主范围还在不断扩大。CDV感染主要采用病毒分离、特异性病毒抗原或特异性核酸检测等方法确诊。疫苗包括灭活的CDV疫苗、麻疹病毒（MV）异源苗及CDV弱毒活苗。疫苗接种犬的免疫反应主要取决于毒株特性及犬的应答能力，只有弱毒活苗能诱导产生持久而坚强的保护力。尽管多年来CDV弱毒活苗的使用控制了CD的发生，但最近免疫过的犬发生CD的病例并不少见。分析免疫失败的原因，主要是母源抗体干扰、疫苗质量差、其它病毒的免疫抑制以及CDV流行株可能发生了变异等因素的影响。     

犬瘟热—犬冠状病毒双重PCR诊断方法的建立及初步应用

Two pairs of PCR primers were designed according to sequence of canine distemper virus （CDV） and canine coronavirus （CCV） from GenBank, respectively, which could amplify 550 bp fragment for CDV and 225 bp fragment for CCV. The products of PCR were cloned to pMD18-T for sequencing, which proved to be specific. Positive plasma were developed for standard DNA, and the sensitivity result of duplex PCR showed that the method could amplify 0.1 ng/μL nucleic acid for both of viruses. The result of rudimentary application showed that the method was specific, sensitive, efficient, and was a new detecting method for the mixed infection of CDV and CCV.     

犬瘟热的门诊调查研究

对2003年1月～2004年1月在某宠物医院就诊的病犬进行调查,结果表明,犬瘟热病犬占就诊病犬的49.1%,多数病犬以双相热型、结膜炎、呼吸道炎、消化功能障碍及神经症状为特征,犬瘟热发病与犬的年龄、免疫状况、性别及环境、季节等诸多因素有关.     

Antemortem Diagnosis of CDV Infection by RT-PCR in Distemper Dogs with Neurological Deficits without the Typical Clinical Presentation

In dogs with neurological disturbances without myoclonus and extraneural signs, the clinical diagnosis of distemper is difficult perform. Considering the great infectious potential of the disease, the possibility of carrying out an antemortem diagnosis of distemper is important, particularly in hospitalized patients with neurological disease. The present study was carried out to evaluate RT-PCR for antemortem CDV detection in hospitalized dogs with neurological disturbances without the typical findings of distemper. We investigated five dogs with canine distemper virus (CDV) encephalomyelitis, in which the clinical diagnosis was not performed owing to the absence of characteristic signs of the disease, such as myoclonus and systemic signs. We observed an apparent high sensitivity of RT-PCR in urine samples for detection of CDV: four out of five urine samples were RT-PCR positive. The results of the present study suggest that urine is a good biological sample for antemortem CDV detection by RT-PCR in dogs with distemper encephalomyelitis in which the clinical diagnosis is likely to be difficult owing to the absence of suggestive distemper signs. The use of two different body fluids (urine and CSF) may increase the RT-PCR sensitivity for antemortem diagnosis of distemper in such cases.     

犬瘟热的诊断

犬瘟热是危害犬、狐、貂最严重的烈性传染病之一。作者对某试验动物犬饲养厂的病死犬进行临床症状观察,病理剖检及实验室诊断,通过病毒的分离培养及间接免疫荧光鉴定,确诊为犬瘟热病毒感染。鉴于该病的危害程度,建议加强对犬瘟热病的诊断及监控。     

貂犬瘟热病的诊断

貂犬瘟热是危害貂、狐、貉最严重的烈性传染病之一。作者对某貂养殖场的病死貂进行临床症状观察,病理剖检及实验室诊断,通过病毒的分离培养及鉴定,确诊病死貂为貂犬瘟热病毒感染。鉴于养殖场中该病的存在及对养貂业的危害,建议加强对貂犬瘟热病的诊断及监控。     

水貂犬瘟热流行病学调查

为了调查山东省水貂犬瘟热的流行病学情况,对2010年8月－2012年8月期间由诸城、文登等地养貂场送诊的996份水貂病例进行了临床诊断和病原学检查。结果显示,共检出犬瘟热病毒阳性病料223份,阳性率为22.39%。其中,犬瘟热病毒与其他病原混合感染136例,占阳性病例的60.99%;阳性样本中未免疫病例116个;诸城检出阳性病例数最多,为147例;3月龄水貂发病率最高,占阳性病例的43.0%;水貂感染犬瘟热病毒主要症状为眼、鼻黏液性分泌物增多、脚垫增厚、呼吸困难;主要病理变化为肠、脑部出血。结果表明,犬瘟热依然是危害水貂养殖的重要疫病,且犬瘟热病毒易与其他病原混合感染;免疫接种能有效预防水貂犬瘟热,且宜在3月龄以前进行。