蛋鸡禽流感和新城疫母源抗体消长规律的研究

为了探讨种鸡场禽流感和新城疫母源抗体消长规律,制定科学的免疫程序,本试验对父母代种鸡和出壳当日蛋雏鸡进行禽流感和新城疫抗体检测以及对1、8、15、22及29日龄蛋雏鸡进行禽流感H5、H9亚型和新城疫母源抗体跟踪检测。结果表明,父母代种鸡禽流感和新城疫免疫抗体水平较高,且通过卵黄传递给蛋雏鸡,使其产生较高的母源抗体抵抗病毒侵袭。同时发现蛋雏鸡在出壳当日禽流感和新城疫母源抗体水平最高,均达到6log2以上,且群体抗体合格率均达90%以上,随后母源抗体逐渐下降,在15日龄时禽流感H5亚型和新城疫母源抗体下降到抗体保护水平以下,22日龄时禽流感H9亚型母源抗体也已下降到抗体保护水平以下,因此在15日龄时进行禽流感H5亚型和新城疫首免,在22日龄时进行禽流感H9亚型首免,可以有效降低禽流感H5和H9亚型和新城疫的发生风险。     

海兰褐蛋鸡新城疫、禽流感母源抗体消长规律的研究

本研究应用血凝抑制试验对不同日龄的海兰褐蛋鸡进行新城疫、禽流感母源抗体水平的检测,掌握雏鸡AI和ND母源抗体的分布和消长规律。结果表明,雏鸡出壳后,新城疫、禽流感母源抗体水平大都在7日龄内出现高峰,之后随着日龄的增长,抗体水平逐渐下降,新城疫、禽流感H9亚型母源抗体35日龄已基本消失,而禽流感H5亚型Re-4株和Re-5株母源抗体下降较快,20日龄左右母源抗体水平接近0。     

商品肉雏鸡H5亚型禽流感母源抗体变化规律

通过血凝抑制(HI)试验,对市售商品肉雏鸡血清H5亚型禽流感母源抗体进行调查,结果显示,该批商品肉雏鸡H5禽流感母源抗体仅持续13d,峰值出现在3～5日龄,达到6.4～6.6(log2)。从6日龄起母源抗体水平开始下降,13日龄后下降到临界值4(log2),从20日龄开始几乎检不出母源抗体。     

肉鸡H5、H7亚型禽流感病毒母源抗体消长规律及其对禽流感疫苗接种的影响

为了规范罗斯308肉鸡H5亚型和H7亚型禽流感疫苗免疫程序的制定,研究对不同免疫程序的商品肉鸡进行了血清学调查。结果表明:非免疫肉鸡的H5亚型(Re-8)和H7N9亚型禽流感病毒抗体阳性率均随日龄增长而逐渐下降,两种母源抗体的保护时间均较短。接种H5+H7二价禽流感灭活疫苗前肉鸡的这两种母源抗体阳性率均在70%以上,平均滴度均≥4 log2;接种后各监测时间的两种禽流感抗体阳性率均在70%以下,抗体平均滴度均4 log2,但接种疫苗肉鸡抗体保护时间比不接种肉鸡保护时间长。提示部分商品肉鸡饲养后期存在被H5亚型和H7亚型禽流感病毒感染的风险。     

吕梁地区H5亚型禽流感母源抗体消长规律的分析

吕梁地区某大型种鸡场的海兰褐父母代种鸡注射H5亚型禽流感油乳剂灭活苗后,其孵出的雏鸡随机抽取一部分,检测HI抗体效价。结果显示：H5亚型Re-5株抗体平均效价1日龄为7.40log2,5log2以上一直持续到20日龄,抗体滴度呈缓慢下降;H5亚型Re-4株抗体平均效价1日龄为6.83log2,13日龄为4.90log2,抗体滴度下降相对较快,本试验旨在绘制H5亚型禽流感母源抗体消长曲线,为商品蛋鸡禽流感的首免日龄提供参考依据。     

吕梁地区H5亚型禽流感母源抗体消长规律的分析

吕梁地区某大型种鸡场的海兰褐父母代种鸡注射H5亚型禽流感油乳剂灭活苗后,其孵出的雏鸡随机抽取一部分,检测HI抗体效价。结果显示:H5亚型Re-5株抗体平均效价1日龄为7.40log2,5log2以上一直持续到20日龄,抗体滴度呈缓慢下降;H5亚型Re-4株抗体平均效价1日龄为6.83log2,13日龄为4.90log2,抗体滴度下降相对较快,本试验旨在绘制H5亚型禽流感母源抗体消长曲线,为商品蛋鸡禽流感的首免日龄提供参考依据。     

重组禽流感病毒灭活疫苗(H5N1亚型,Re-1株)免疫鸡抗体消长规律及免疫程序的初步研究

研究新型重组H5N1亚型禽流感灭活疫苗对种鸡和肉鸡的免疫原性,并对雏鸡母源抗体和免疫后的抗体进行动态观察,根据试验结果推荐该疫苗对鸡的免疫程序。用HI方法检测种鸡、肉鸡的母源抗体和免疫抗体,根据母源抗体的衰减和免疫抗体的消长规律确定首免和再免日龄。结果表明种鸡的母源抗体约能维持10 d多;0.3 mL/羽首免后10 d HI抗体就可达到6.40 log2,3-5周达到高峰期,至免疫17周后(19周龄)HI抗体水平仍然维持在4.88 log2;19周龄时0.5 mL/羽进行二免,有效抗体能维持约20周;280日龄0.5 mL/羽三免后抗体水平均一,下降缓慢,至种鸡淘汰时(三免后29周)抗体水平仍能维持在5.32 log2。肉鸡母源抗体约能维持7d,10日龄时0.3 mL/羽免疫,有效抗体能维持到上市。新型重组H5N1亚型禽流感灭活疫苗对鸡的免疫原性确实。     

商品代肉雏鸡禽流感母源抗体的检测

对新疆某一种鸡场的商品代肉雏鸡进行了禽流感母源抗体的跟踪监测。结果显示,2004年4个批次商品代肉雏鸡的禽流感母源抗体持续期随着种鸡免疫后时间的推移呈递减趋势,将同批种鸡进行二次免疫后商品代肉雏鸡抗体持续期明显增长,表明禽流感母源抗体的消长与种鸡的免疫状况具有密切的关系。2006年～2007年5个批次的商品代肉雏鸡禽流感H5母源抗体持续期与2004年相比明显缩短。     

广西地方麻鸡、三黄鸡禽流感与新城疫母源抗体消长规律的研究

为有效地防控禽流感与新城疫,在生产实践中制定科学合理、因地制宜的免疫程序。本研究采用血凝及血凝抑制试验,对雏鸡的母源抗体进行跟踪检测。结果表明,H5(Re-6)亚型及ND均在第3d龄达到高峰,H9则在第5d龄达到高峰;H5(Re-6)亚型、ND母源抗体的半衰期时间短(3~5d),而H9亚型母源抗体的半衰期则较长(8~9d)。该研究为确定雏鸡首免日龄提供了重要的参考依据。     

饲料中添加构树叶对1～9周龄蛋鸡新城疫和H5N1亚型(Re-4株和Re-5株)禽流感抗体的影响

为了研究饲料中添加构树叶对1～9周龄蛋鸡新城疫和禽流感H5N1亚型(Re-4株和Re-5株)抗体的影响,试验测定了海兰灰雏鸡的新城疫和H5N1亚型(Re-4株和Re-5株)禽流感抗体效价。结果表明:在3～9周龄时,与对照组相比,添加1.5%和2.0%构树叶组新城疫抗体效价均有不同程度的提高。在4～9周龄时,与对照组相比,添加1.5%和2.0%构树叶组H5N1亚型(Re-4株和Re-5株)禽流感抗体水平均有不同程度的提高。     

两株H6N2亚型鸡源禽流感病毒的分离鉴定

本研究利用血凝抑制试验(HI)、反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)、基因测序等方法,对广东省某活禽交易市场进行流行病学调查时获得的两株非H5、H9亚型禽流感病毒65株和C7株进行了亚型鉴定。结果表明这两株病毒均具有血凝活性,且能被抗H6亚型禽流感病毒标准阳性血清特异性抑制。用针对禽流感病毒的M基因、H6亚型禽流感病毒HA基因、N2亚型禽流感病毒NA基因特异性鉴定引物对65株和C7株进行RT-PCR扩增,分别获得特异性目的片段。测序及BLAST分析表明两株分离株与H6N2亚型禽流感广东分离株的HA基因和NA基因核苷酸序列相似性均高达95%以上。将该两分离株鉴定为H6N2亚型禽流感病毒,并命名为A/Chicken/Guangdong/65/2009、A/Chicken/Guangdong/C7/2009。     

陕北地区鸡禽流感免疫监测及免疫方案研究

H5及H9型禽流感是目前养禽业主要防疫的两种流感病毒亚型,为调查陕西省神木县两种亚型流感病毒的防疫情况,本研究在2011年∽2012年间从神木多家种鸡场、商品鸡场及散养户采集血样,测HI效价,评价禽流感的免疫效果.结果表明：2011年在普遍采用单价疫苗免疫的情况下,H5抗体合格率较低,最好免疫效果合格率为82.40％,最差免疫效果合格率只有67.7％,而H9抗体合格率100％;2012年推广H5和H9二联疫苗免疫,H5抗体合格率达100％,而H9抗体合格率有所下降,为H5和H9禽流感免疫提供了临床参考依据,同时也为二联疫苗的使用提供参考.     

鸡群对病毒灭活疫苗免疫后抗体动态检测的不同实验设计和统计学分析的比较研究

面对普遍发生的产蛋下降,许多种鸡场或商品代蛋鸡场往往不得不在产蛋期甚至产蛋高峰期用灭活疫苗强化免疫.但过度频繁的强化免疫,常给产蛋鸡的生产性能带来严重的不良影响.合理的免疫程序应是在抗体滴度刚开始下降时即给以强化免疫.本研究试图比较不同统计学方法对抗体动态分析的影响,以期为免疫程序的设计提供参考.分别按不同的统计学设计和分析方法,在一个大型种鸡场的产蛋期对新城疫病毒、H9-和H5-禽流感病毒抗体滴度动态变化做了比较研究.对免疫后抗体动态变化的动态研究表明,用成对数据比较的t-test比按成组数据平均数的t-test更能准确可靠地确定免疫后抗体滴度的真实下降.在开产前用选择的最好的疫苗免疫后,高滴度的抗体水平可稳定地维持21周.在此期间对3种病毒的疫苗均未做任何强化免疫,直到21周后真正开始下降时才实施加强免疫.按此免疫程序,该种鸡群的产蛋率达到了历史最高水平.成对数据比较的t-test既可避免由于技术误差或系统误差产生某时段抗体下降的假象,也可避免由于个体差异而掩盖了幅度不大但确是真实的抗体滴度下降,可以为制定最合理的免疫程序提供科学的数据.     

免疫剂量和母源抗体对禽流感重组鸡痘病毒活载体疫苗免疫效力的影响

利用表达 H 5亚型禽流感病毒 (AIV)血凝素基因的重组鸡痘病毒 (r FPV- HA)以不同剂量免疫 1日龄 SPF鸡、有或无母源抗体 (FPV、AIV H5)的商品鸡 ,并于免疫后 2 1d利用同亚型 AIV通过肌肉注射进行致死性攻击 ,通过检测免疫后 HI抗体应答、比较攻毒后发病率和死亡率评价免疫剂量和母源抗体对 r FPV- HA免疫效力的影响。结果发现 ,免疫后 2 1d,15 %～ 2 0 %的 SPF鸡和无母源抗体商品鸡可检出 HI抗体 ,而含母源抗体商品鸡检测不到 HI抗体。利用H5亚型 AIV致死性攻击后 ,10 3～ 10 6 PFU的 r FPV- HA可保护 95 %～ 10 0 %的 SPF鸡和无母源抗体商品鸡抵御强毒攻击 ,使之免于发病和死亡 ;而不同剂量 r FPV- HA接种的含母源抗体商品鸡有 80 %～ 90 %发病和死亡。结果表明 ,在较宽的免疫剂量范围内 ,r FPV- HA对 SPF鸡和无母源抗体商品鸡可提供良好的保护 ,显示出一定的应用前景 ;母源抗体影响 r FPV- HA诱导的免疫应答 ,且提高免疫剂量亦不能克服其干扰作用 ,这提示在实际应用中需优化免疫程序 ,避免母源抗体干扰。     

H9N2亚型禽流感病毒中和单克隆抗体的制备与应用

为建立H9N2亚型禽流感病毒（Avian influenza virus,AIV）免疫层析快速检测技术,本研究以差速离心法纯化H9N2亚型AIV免疫BALB/c小鼠,将免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行细胞融合和HAT选择性培养;以H9N2亚型AIV感染MDCK细胞建立异源免疫过氧化物酶单层细胞试验（IPMA）的单克隆抗体检测方法,通过对杂交瘤细胞的IPMA筛选和连续克隆化筛选鉴定抗H9N2亚型AIV中和性单克隆抗体;以胶体金标记HA单克隆抗体,配对HA单克隆抗体和羊抗小鼠IgG为检测线和质控线,制备H9N2亚型AIV快速检测试纸条,测定其特异性和敏感性。结果显示,获得了11株稳定分泌抗H9N2亚型AIV单克隆抗体的杂交瘤细胞,其单克隆抗体腹水IPMA效价在1.28×10^-4至2.56×10^-5之间。单克隆抗体3A2、5H6、6B8、7E10和9G12血凝抑制试验（HI）显示血凝抑制活性,其（HI）效价在6log2~9log2之间。单克隆抗体3A2、6B8和9G12在病毒中和试验中对H9N2亚型AIV有显著病毒中和活性,中和效价分别1∶6 400、1∶25 600和1∶25 600。Western blotting结果提示,该中和单克隆抗体识别HA蛋白线性抗原表位。利用配对单克隆抗体3A2和9G12研制的H9N2亚型AIV检测试纸条检测H9N2亚型AIV尿囊液的效价为9log2,灵敏度与经典血凝试验（HA）相当,与其他亚型AIV （H1、H3、H5、H7）,以及新城疫病毒和鸡传染性法氏囊病病毒等相关病毒均无交叉反应。本研究制备了具有病毒中和活性的抗H9N2亚型AIV单克隆抗体,并初步研制了H9N2亚型AIV检测试纸条,为H9N2亚型AIV新型疫苗研制和快速检测奠定良好的研究基础。     

禽白血病抗原快速检测试纸条的研制及初步应用

禽白血病给养鸡业带来极大损失,目前检测该病病原的方法主要有ELISA、PCR及RT-PCR、原位杂交(ISH)、间接免疫荧光(IFA)等。本研究应用2株抗禽白血病病毒(ALV)p27蛋白特异性单克隆抗体5D3和4F12研制了ALV快速检测试纸条。结果证明该试纸条具有良好的特异性,与H9亚型禽流感病毒、新城疫病毒、马立克氏病病毒、小鹅瘟病毒、鸡贫血病病毒没有交叉反应;采用p27表达蛋白检测试纸条灵敏性,检测下限达到70ng/mL;应用该试纸条检测71份临床样品,与商业ELISA试剂盒检测结果比较,二者符合率达到93%。该试纸条的研制,为基层快速检测ALV提供了条件。     

上海地区活禽批发市场H9亚型禽流感病毒调查

为弄清上海地区活禽批发市场中H9禽流感病毒（Avian influenza virus,AIV）的流行情况及鸡群的免疫情况,2009年对上海三大活禽批发市场进行了采样监测。采用HI试验检测H9 AIV抗体、荧光RT-PCR试验和鸡胚接种分离鉴定病毒。共采集110批次1 646份血样和喉头泄殖腔棉拭样品,平均抗体合格率为60.27%,分离到H9病毒134株,其中4-6月和9-11月为全年中病毒分离的2个高峰期（样品带毒率均超过了10.00%）,明显比其它月份要高（其他月份均低于5.00%）,样品带毒率平均为8.14%。不同市场、不同地区采集的样品其抗体合格率和样品的带毒率也存在一定的差异。在30批分离到病毒的样品中,13批次已免疫H9N2油乳剂灭活苗且抗体合格率均大于70.00%的样品中分离到45株病毒（45/195）,其中6批次抗体合格率达到100%的样品中也分离到了病毒（8/90）,但带毒率明显比未经疫苗免疫的样品（79/255）低。调查结果表明养殖户对肉鸡群H9N2油乳剂灭活苗免疫重视程度不够,鸡群中带毒现象较普遍。疫苗免疫后能产生较高的免疫抗体,且抗体能减轻临床症状,降低带毒率,但不能完全阻止病毒复制,存在高抗体下带毒现象。     

Serological surveillance reveals widespread influenza A H7 and H9 subtypes among chicken flocks in Egypt

Multiple avian influenza viruses’ subtypes are circulating worldwide possessing serious threat to human populations and considered key contributors to the emergence of human influenza pandemics. This study aimed to identify the potential existence of H7 and H9 avian influenza infections circulating among chicken flocks in Egypt. Serum samples were collected from chicken flocks that experienced respiratory distresses and/or variable mortality rates. H7 and H9 virus infections were screened by haemagglutination inhibition assay using chicken erythrocytes. Serum samples were collected from 9 broiler, 12 breeder and 18 layer flocks. Out of 1,225 examined sera, 417 (34 %) from 14 flocks and 605 (49.4 %) from 21 flocks were found positive for H7 and H9, respectively. Prevalence of both H7 and H9 antibodies were higher in layer followed by breeder then broiler flocks. Special consideration should be paid to control influenza viruses in Egypt, as pandemic influenza strains may develop unnoticed given the presence of subclinical infections, and the possibility of re-assortment with the prevailing endemic H5N1 virus strains in Egypt do exist.