两株H6N2亚型鸡源禽流感病毒的分离鉴定

本研究利用血凝抑制试验(HI)、反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)、基因测序等方法,对广东省某活禽交易市场进行流行病学调查时获得的两株非H5、H9亚型禽流感病毒65株和C7株进行了亚型鉴定。结果表明这两株病毒均具有血凝活性,且能被抗H6亚型禽流感病毒标准阳性血清特异性抑制。用针对禽流感病毒的M基因、H6亚型禽流感病毒HA基因、N2亚型禽流感病毒NA基因特异性鉴定引物对65株和C7株进行RT-PCR扩增,分别获得特异性目的片段。测序及BLAST分析表明两株分离株与H6N2亚型禽流感广东分离株的HA基因和NA基因核苷酸序列相似性均高达95%以上。将该两分离株鉴定为H6N2亚型禽流感病毒,并命名为A/Chicken/Guangdong/65/2009、A/Chicken/Guangdong/C7/2009。     

小熊猫源犬瘟热病毒株H、F基因的克隆及序列分析

为了解1株圈养小熊猫源犬瘟热病毒（CDV）GD-1的遗传变异情况,通过RT-PCR方法对该株CDV进行H、F基因的克隆、测序及序列分析。结果显示：该分离株的H基因序列与GenBank中丹麦报道的登录号为GU266280的犬源CDV毒株的核苷酸序列相似性最高,为96%;F基因序列与巴西报道的登录号为KY057355的犬源CDV的核苷酸序列相似性最高,为95.7%。下载CDV代表毒株序列进行遗传演化、氨基酸序列比对及分子特征分析。结果显示：H蛋白共有8个潜在的N-糖基化位点,分别位于19、149、309、391、422、456、587、603位点;H蛋白的SLAM受体结合位点氨基酸序列与欧亚野生型毒株一致,与疫苗株相比,530、549位氨基酸不同,与其他CDV参考毒株H蛋白相比还存在24、41等9处氨基酸位点发生明显变异,与标准强毒株A75/17的氨基酸相似性为95.2%,与Onderstepoort、Convac等5株疫苗株的氨基酸序列相似性为88.2%~89.3%;F蛋白共有6个N-糖基化位点,分别位于62、108、141、173、179、517位,与Onderstepoort等疫苗株氨基酸相似性为89.1%~89.7%;与其他参考毒株相比还存在115、130等11处氨基酸发生变异;构建基于H、F基因的遗传进化树,结果显示：该毒株位于Asia-4型的一个小的进化分支,这与目前我国流行毒株主要位于Asia-1型存在明显不同。本研究首次报道了小熊猫源的Asia-4基因型CDV野毒株,并对毒株的H及F基因进行了序列分析,对于了解我国CDV流行株的遗传变异情况、流行病学调查、疾病防控及疫苗研发等具有重要意义。     

海南坡鹿致病性大肠埃希氏杆菌的分离鉴定及药敏试验

从广东省广州动物园病死海南坡鹿病变器官中分离出1株大肠埃希氏杆菌,对细菌进行形态学观察、生化试验、血清型鉴定、药敏试验,PCR扩增测序分析,结果显示该分离株血清型为O78,该菌株对庆大霉素、丁胺卡那霉素、环丙沙星、头孢哌酮／舒巴坦钠、阿奇霉素高度敏感。     

狮源猫细小病毒分离鉴定及其VP2基因序列分析

为对疑似感染猫细小病毒的非洲狮进行确诊，了解猫细小病毒的流行特点，通过猫肾细胞（F81细胞）对非洲狮粪便样品进行病毒分离并通过PCR鉴定，对检测到的细小病毒进行VP2基因扩增和分析。结果显示：成功从非洲狮粪便中分离出1株细小病毒，将其命名为FPV CHN-HN-1。该病毒接种到F81细胞上，能使细胞出现拉丝、脱落现象。该分离株与参考的26株细小病毒分离株相似性为97.8%~100%，其中与分离株JN-FPV-96（MZ836373.1）、TZ-FPV-112（MZ836368.1）、FPV-SH2003（MW811187.1）和BJ051（MT270580.1）相似性高达100%；与其他7株猫源细小病毒同属一个分支，与JN-FPV-96、TZ-FPV-112、FPV-SH2003、BJ051遗传距离最近，与其他参考毒株遗传距离较远。本研究为细小病毒病的诊断和治疗提供了依据，也为后期疫苗的研制打下了基础。     

一株H5N2亚型鹦鹉源禽流感病毒的分离鉴定

在广东进行流行病学调查时从鹦鹉采集的拭子样本中分离到一株禽流感病毒,应用聚合酶链反应(PCR)、血凝抑制试验(HI)和基因测序等方法技术对其进行了亚型鉴定。结果表明,此分离株具有血凝活性,且被H5亚型禽流感病毒标准阳性血清特异性抑制;分别用针对禽流感病毒的M、H5亚型禽流感病毒的HA基因、N2亚型禽流感病毒的NA基因特异性鉴定引物对该分离株进行PCR扩增,均扩增出特异性目的片段;测序及BLAST分析表明其与H5N2亚型禽流感美国分离株的HA基因和NA基因核苷酸序列相似性高达97%以上,由此该分离株鉴定为H5N2亚型禽流感病毒,并命名为A/Parrot/Guangdong/268/2005。     

鹅细小病毒不同毒株VP13基因的克隆与序列分析

分别将鹅细小病毒(GPV)的5个分离株通过PCR技术,从病毒基因组DNA中扩增出病毒蛋白VP1和VP3非重叠区的基因片段(VP13基因),并与pMD18-T质粒载体连接,转化到感受态大肠埃希菌Top10中,经PCR鉴定后,对插入片段进行序列测定及分析。结果表明,5株GPV VP13基因全长均为594 bp,编码198个氨基酸。不同毒株主要结构蛋白VP13基因与国外已发表的鹅细小病毒B株核苷酸序列相似性较高(93.4%～98.7%),但毒株间也存在一定差异。     

2例印度羚骨折内固定手术及护理

印度羚四肢骨折多为外力撞击所致,是动物园野生动物中常见的创伤性骨折。为探讨印度羚骨折的手术治疗方法,本文选用美托咪啶、丙泊酚配合异氟烷吸入麻醉的方法对2头印度羚进行化学保定,在麻醉效果确切的前提下,采用PRCL动物专用锁定骨板系统和双板固定技术进行前肢桡尺骨骨折的内固定手术。结果:整个手术过程约3 h,期间各项监护指标相对在正常范围:ETCO₂ 60⁶4 mmHg、SPO₂ 89%⁹9%、脉搏102¹21t/min、体温36.8³7.1℃。术后X光检查可见骨头断端吻合。40 d后病兽仅前肢稍显萎缩,创口愈合良好,断面基本愈合,运动时可见有着地,X光检查发现骨痂生长良好。79 d后患肢着地行走自如,放回展区合群饲养。结论:利用PRCL动物专用锁定骨板系统和双板固定技术对印度羚骨折具有良好的医疗效果,值得推广应用。     

右美托咪啶与舒泰对圈养虎麻醉效果的观察

为了评估右美托咪啶与舒泰(替来他明和唑拉西泮合剂)对虎的麻醉效果,17只虎(4只孟加拉虎、4只华南虎和9只东北虎)按0.025~0.038 ml/kg的剂量肌肉注射进行麻醉,最终以阿替美唑进行苏醒,分别对诱导、麻醉及苏醒效果进行观察和评分。右美托咪啶和舒泰联合用药对虎的诱导期为(12.24±4.56)min,侧卧姿势进入麻醉期,平均诱导效果判定为1(极好),麻醉期间体温为(39.4±0.95)℃,较正常体温高;呼吸频率为(7.50±2.56)次/min,下降极显著,血氧饱和度为(87.32±8.43)%,与麻醉前相差不大。平均麻醉效果判定为4~5(中度麻醉至外科麻醉水平),静脉注射颉颃药阿替美唑后,苏醒时间(8.31±3.87)min,平均麻醉效果为2~3(一般,好),苏醒过程中所有虎出现较明显的共济失调或不协调的现象,苏醒后6 d内未见神经症状及其他副作用。右美托咪啶与舒泰联合用药对健康的虎是一种有效的麻醉药物,但苏醒过程中可能出现共济失调现象。     

一株天鹅源H5N1亚型禽流感病毒的分离鉴定

2004年从广东某地送检的病死天鹅肺组织中分离到1株禽流感病毒,用血凝抑制试验(HI)、聚合酶链反应(PCR)、基因测序等对其进行了亚型鉴定。结果表明,此分离株具有血凝活性,且H5亚型禽流感病毒标准阳性血清能对其产生特异性抑制作用;分别用针对禽流感病毒M基因、H5亚型禽流感病毒HA基因、N1亚型禽流感病毒NA基因特异性引物对该分离株进行PCR扩增,均获得特异性目的片段;测序及BLAST分析表明HA基因与A/chicken/Viet Nam/Ncvd8/2003(H5N1)的HA基因同源性为98%;NA基因与A/swine/Fujian/1/2003(H5N1)的NA基因同源性为98%,由此该分离株鉴定为H5N1亚型禽流感病毒,按照国际流感病毒系统命名原则将该病毒株暂命名为A/Swan/Guangdong/197/2004。