口蹄疫3A蛋白基因的表达及其抗原性研究

从pUCm-3ABC质粒切割FMDV的3A蛋白基因DNA，将其与pET-30c( )载体连接，构建pET30C3A原核重组表达质粒，序列分析表明，pET30C3A重组质粒的插入3A蛋白基因的阅读框架正确。pET30C3A—BL21经IPTG诱导后可表达3A融合蛋白。Westem Blot试验证明该表达蛋白具有较好的抗原活性，提示可进一步用重组表达的FMDV 3A蛋白作抗原检测FMD。     

口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC基因的原核表达及其产物的活性检测

利用分别带有BamHⅠ和HindⅢ酶切位点的引物扩增出FMDV3ABC基因，将其克隆到pMD18-T载体。经BamHⅠ和SaⅡ酶消化后，克隆到表达载体pGEX-6p-1上，构建重组质粒pGEX-3ABC。将该重组质粒转化到大肠埃希氏菌BL21（DE3）pLysS，经终浓度1mmol／L的IPTG诱导，获得约70ku的融合蛋白GST-3ABC。Western-blotting结果显示，表达的融合蛋白GST-3ABC可以与感染FMDV的牛血清发生免疫反应。以纯化的GsT-3ABC蛋白为抗原的间接ELISA检测结果与以VP2蛋白为抗原的间接ELISA检测结果相比较，表明，融合蛋白GST-3ABC可以用于鉴别感染FMDV和疫苗免疫的牛血清。     

口蹄疫病毒非结构蛋白基因的克隆表达及免疫活性的研究

从口蹄疫病毒(FMDV)细胞培养物中提取总RNA,设计简并引物通过RT-PCR获得了完整的3ABC基因片段,将3AB基因和部分3ABC基因分别克隆到原核表达载体上构建重组表达质粒pET-3AB和pET-3ABC,然后转化BL21(DE3)plysS进行诱导表达,将表达产物进行SDS-PAGE分析和Western blot鉴定.结果表明,3AB基因和3ABC基因可以在大肠埃希菌中高效表达,且表达产物能够与FMDV阳性血清产生免疫反应.进一步摸索重组蛋白的纯化条件,制备纯化蛋白,以纯化的表达产物为包被抗原进行间接ELISA检测,结果表明,重组蛋白具有特异的免疫学活性,能够用于鉴别FMDV感染动物血清和免疫动物血清.     

H5亚型禽流感病毒HA基因在重组杆状病毒中的表达及检测

利用杆状病毒表达系统对H5亚型禽流感病毒HA基因在sf9细胞中的表达进行了研究。首先将pUCm—T—H5HA质粒用BamHⅠ及NotⅠ酶切，获得HA基因片段，同时杆状病毒转座载体质粒pFastBacⅠ也用BamHⅠ及NotⅠ酶切，然后用T4DNA连接酶连接，构建了重组质粒pFastBac—H5HA。再将该重组质粒转化DH10Bac感受态细菌，在体内进行重组，并经三重抗性与蓝白斑筛选，得到杆状病毒重组质粒Bacmid—H5HA。将Bacmid—H5HA转染sf9细胞，获得重组杆状病毒，经SDS—PAGE和Western blotting检测表明，HA蛋白在重组杆状病毒中获得表达。     

口蹄疫病毒非结构蛋白基因3ABC在大肠杆菌中的高效表达

将牛源O型口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)China／99株非结构蛋白基因3ABC从pGEM-T-3ABC重组质粒中亚克隆到原核表达载体pTriEx-4Neo上,成功构建重组表达质粒pTriEx-3ABC。将其转化大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞中表达,表达产物经SDS-PAGE可检测到分子量约为59．1ku的目的蛋白带,经薄层扫描分析,目的蛋白占菌体总蛋白的31．4％。Western blotting分析证明表达产物能被FMDv阳性血清所识别。表达产物纯化后作抗原进行ELISA检测,结果表明,表达的蛋白显示特异的免疫学活性,并能区分自然感染动物和注苗动物。研究为以FMDV非结构蛋白为抗原,建立自然感染动物和注苗动物的鉴别诊断方法提供了材料。     

口蹄疫病毒3C蛋白酶的T4噬菌体表面展示

对FMDV3C基因克隆质粒p3C-T进行PCR扩增，获得了口蹄疫病毒3C蛋白酶基因片段，将此片段与T4噬菌体整合质粒pR的EcoR I酶切片段连接，转化E．coli DH5a工程菌，经EcoR I酶切、质粒PCR扩增、插入方向筛选及测序鉴定，成功获得了T4噬菌体重组整合质粒pR-3C。将其转化E．coliE2后，与SOC基因缺失的噬茵体9T4-Z1同源重组，经溶菌酶依赖性筛选，获得了快速溶菌型噬菌体9T4—3C。经噬菌体PCR扩增、SDS-PAGE分析和Western-blot分析，重组噬菌体可展示约26ku的重组蛋白；其大小与预期相符，具有免疫原性。     

猪O型口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC抗原模拟表位的筛选

口蹄疫病毒（FMDV）非结构蛋白（NSP）3ABC与FMDV复制有关，感染FMDV的动物产生的NSP 3ABC抗体可在体内存留较长时间，是鉴别诊断动物接种疫苗与自然感染口蹄疫的可靠指标。本文从猪FMDV—NSP 3ABC阳性抗血清中分离和纯化IgG，以此为固相筛选分子，对噬菌体随机十二肽库进行4轮吸附-洗脱-扩增的富集筛选后，随机挑取20个噬菌斑进行扩增，用ELISA方法分别检测扩增后的噬菌体抗原性，其中有8个噬菌体克隆与纯化的IgG有较强的特异性结合能力；对得到的阳性克隆提取ssDNA进行测序，分析所递呈的氨基酸序列，其中的7个噬菌体展示肽的氨基酸片段具有较高的保守性；进一步分别以8个阳性噬菌体克隆为固相捕获分子，对22份疑似FMD病猪血清进行检测，结果显示，有5个噬菌体克隆检测结果与试剂盒检测有较高的符合率。本研究为FMDV—NSP 3ABC抗原表位结构进一步研究和建立猪自然感染FMDV快速鉴别诊断新方法奠定了基础。     

O型FMDV VP1基因的表达鉴定及其多克隆抗体的制备

为制备O型口蹄疫病毒(FMDV)VPI抗血清,本研究人工合成了FMDV的VPI基因,并克隆构建了采用PCR方法以pUC57-VP1重组质粒,以其作为模板,经PCR将VPI基因亚克隆至原核表达载体pET-30a(+)中,获得重组质粒pET-VP1.重组质粒鉴定验证后,转化至大肠杆菌BL21感受态细胞,经IPTG诱导后,SDS-PAGE结果显示重组蛋白的分子量约为38 ku,以包涵体的形式存在.Western blot与间接ELISA结果显示重组蛋白能够与FMDVFn性血清反应.进一步将纯化的重组蛋白免疫BALB/c鼠制备多克隆抗体,ELISA测定抗体效价为1:1 600.本研究为FMDV的其他研究工作提供了基础材料.     

口蹄疫病毒P12X3C3D多基因编码蛋白在昆虫细胞中的表达与检测

利用杆状病毒表达系统构建了包含有口蹄疫病毒（FMDV）P12X3C3D多基因片段的重组杆状病毒。将该病毒感染Sf9细胞后，利用SDS—PAGE及夹心ELISA方法检测目的蛋白的表达。结果表明，重组杆状病毒能够表达FMDV目的蛋白，该表达产物能被FMDV阳性血清识别，具有一定的反应原性。     

表达O型口蹄疫病毒VP1蛋白的重组塞内卡病毒的构建与鉴定

A型塞内卡病毒(SVA)是近年来新流行的一种传染性病原，与口蹄疫病毒(FMDV)具有相似的基因组结构，所致临床症状也十分相似。为了研发一种新型的基因工程活载体疫苗，用于预防塞内卡病毒感染和口蹄疫，以SVA全长感染性克隆pSVA-GX01为基础，在SVA 2A与2B基因之间插入O型FMDV的VP1基因，经双酶切及测序鉴定，成功获得了重组质粒pSVA-FMDV-VP1-O。将重组质粒转染BHK-21细胞，拯救获得重组病毒rSVA-FMDV-VP1-O,间接免疫荧光试验鉴定显示，该重组病毒可在细胞中表达O型FMDV的VP1蛋白。对该重组病毒进行体外生长增殖特性以及遗传稳定性分析表明，重组毒株和亲本毒株在BHK-21细胞上具有相似的增殖特性，插入的FMDV VP1基因可在细胞传代过程中稳定存在6代。研究结果为开发以塞内卡病毒为载体构建表达口蹄疫病毒VP1蛋白的重组基因工程活载体疫苗提供了参考。     

奶牛肢蹄病及其防治

简介常见奶牛肢蹄病种类及其症状,从日粮营养、运动场地面结构、环境卫生、饲养管理、遗传育种、疾病管理等方面简析奶牛肢蹄病的病因,并提出相应的预防措施。     

Disease and destiny-mystery and mastery

When early people made their appearance, zoonotic infectious diseases were already waiting, but epidemic diseases did not appear in human history until people began to live in large numbers under conditions of close contact, mainly during the last 10,000 years. Disease has decimated urban populations, conquered armies, and disrupted society. The focus here is on (1) the plague of Athens and the Black Death; (2) smallpox, influenza, and rabies; (3) avian influenza prion diseases, and foot & mouth disease; and (4) emerging and re-emerging diseases. All have veterinary public health associations. In Athens, Greece, in 430 BC, when the Spartans ravaged the countryside, hordes crowded into Athens so that orderly movements, space in which to live, and adequate supplies of food became impossible. Crowding of any population fosters disease transmission; chaos and disorder enhance it all the more. Out of northern Egypt came a terrible plague from across the Mediterranean Sea. The identity of the plague of Athens remains unsure, but the well-considered conclusion is Rift Valley Fever, a mosquito borne, viral zoonosis. The Black Death, also called the Plague, raged in Asia for centuries. In 1347, the Black Death was brought by a ship out of Asia to Sicily. The scenes of devastation were repeated throughout Europe, with 90% or more of the people dying in city after city. Influenza, too, has been a cause of periodic human epidemics, but the great pandemic of influenza occurred in the last months of World War I. In the years of highest occurrence, more than half the world's population became clinically infected. If veterinary public health had been born earlier, it could have led to elucidating the epidemiology of influenza and the plagues of Athens, Europe, and Asia. In turn, smallpox had also caused continual tragedy. In 1796, Edward Jenner began to harvest pustules of cowpox from children or infected cows and inject them into susceptible children. In 1980, the World Health Organization declared that smallpox had been eliminated from the world. Rabies, though, still strikes terror. A number of animal diseases, broadly termed emerging and re-emerging diseases, need surveillance because they have the potential to impact human health. From late in 2003 to 2007, the highly pathogenic H5N1 influenza virus in poultry infected at least 121 people and caused 62 deaths in four countries. The prion diseases, too, all have very high numbers in concentrated contacts. To control these diseases, veterinary public health is essential, with diagnosis, epidemiological surveillance, clinical manifestations, and prevention as primary measures.     

马的咽气癖及其防制措施研究进展

在动物的异常行为中以刻板行为最为常见,而咽气癖又是马最常见的口部刻板行为之一。作者就咽气癖在生理方面和心智方面对马体产生的影响、行为基础、诱因的研究进展及常见的防治措施进行综述。     

畜禽物种多样性及其保护和利用

文章就我国畜禽物种多样性资源的现状、保护和利用等方面进行阐述,为生态脆弱的喀斯特地区畜牧业可持续发展提供参考。     

Foot and mouth disease and bluetongue: differences and similarities

On 26th of july 2007 a new case of bluetongue was notified in the Netherlands and on 2nd of august 2007 foot-and-mouth disease was diagnosed in Surrey, England, which raised the threat of having both infections simultaniously in one area. Bluetongue and foot-and-mouth disease have a different pathogenesis, but symptoms may resemble each other at a later stage of infection. The pathogenesis and possible clinical symptoms of both infections are discussed and illustrated with pictures.     

德国荷兰畜禽产品质量安全交流与启示

2018年岁末,笔者有幸赴德国和荷兰,就畜产品质量安全控制及检测技术等进行了短期交流,收获颇丰,现具体介绍如下。一、交流情况德国面积35.73万平方千米,人口约8175.2万,是欧盟人口最多的国家,农业发达,机械化程度很高。德国的畜牧业以猪、牛、羊和禽类为主,畜牧业产值占农业生产总值的61%。德国虽然农业比重很小,但却是有机农业运动最早的发起国,也是目前世界上有机农产品生产与消费大国。     

广西芒果主要病虫害及其防治

广西是我国主要的芒果生产基地。随着基地建设的发展,芒果病虫害已成为目前栽培管理的主要问题。为此,在调查、研究的基础了介绍了当前芒果生产中常见的病虫害,并提出了防治措施,以期为生产上提供技术参考。     

RFLP和PCR-RFLP标记与牦牛遗传育种研究

在归纳总结RFLP和PCR-RFLP标记技术的原理、优缺点的基础上,系统论述了其在牦牛遗传育种研究中的应用现状,并提出了个人的建议和看法。     

国内外蛋氨酸与赖氨酸市场分析与展望

近几年,世界饲用添加剂市场增长较快,预计今后将进一步增长,据世界粮农组织(FAO)首领会议的倡议,到2015年,将使世界营养不良的人口削减一半,其间,肉制品将会以每年2％的速度增长,特别是加快猪肉和禽肉增长。这将促进世界添加剂,尤其是蛋氨酸和赖氨酸需求量的增加。