2012～2014年江西地区副猪嗜血杆菌分离株ERIC-PCR指纹图谱分析

在对15种副猪嗜血杆菌血清型参考株鉴定获得15种不同ERIC-PCR指纹的基础上,对2012~2014年分离自江西地区41株副猪嗜血杆菌临床分离菌株进行指纹鉴定。结果表明,41株副猪嗜血杆菌产生20种不同的指纹图谱,相同血清型的菌株表现出不同的指纹图谱,无法进行血清分型的副猪嗜血杆菌应用该方法可得到充分区分。该方法证实副猪嗜血杆菌ERIC-PCR指纹图谱存在丰富的多样性,可适用于副猪嗜血杆菌的快速基因分型及分子流行病学调查。     

仔猪副猪嗜血杆菌的分离鉴定及耐药性检测

为了了解海南藏族自治州共和县规模化猪场中仔猪副猪嗜血杆菌分离株的流行情况及对常用抗菌药的耐药情况。本试验于2022—2023年采集海南藏族自治州共和县规模化猪场中患疑似副猪嗜血杆菌病的仔猪鼻拭子、关节液、胸腔积液、肺脏等病料,共计283份。采用细菌分离鉴定、PCR方法对采集的病料进行副猪嗜血杆菌分离鉴定,采用人工感染小鼠试验验证分离株的致病性,采用纸片扩散法(Kirby-Bauer,简称K-B法)检测致病性副猪嗜血杆菌分离株对临床中常用抗菌药的耐药性。结果显示：从采集的283份病料中分离到128株副猪嗜血杆菌,通过致病试验显示,91株副猪嗜血杆菌能引起小鼠不同程度发病与死亡,为致病性菌株;分离的91株致病性副猪嗜血杆菌对磺胺间甲氧嘧啶、阿莫西林、氨苄西林等6种药物的耐药率为85.7%以上,对其他药物的耐药率为3.3%～25.3%,本研究为该地区仔猪副猪嗜血杆菌合理用药及防控提供参考。     

苏皖地区副猪嗜血杆菌的分离鉴定与三价灭活疫苗的初步研制

近年来国内养猪场副猪嗜血杆菌病日益严峻,给相关猪场造成严重的损失。本研究主要对江苏省和安徽省部分养猪场的病死猪和健康猪进行副猪嗜血杆菌的分离鉴定,为副猪嗜血杆菌的防治提供流行病学数据。同时,本室初步研制副猪嗜血杆菌血清4型、5型和12型三价灭活疫苗,用BALB/c小鼠对其进行免疫保护力的评价。结果从病死猪中分离到8株副猪嗜血杆菌,其中5型3株、12型2株、14型1株及不可定型2株;从健康猪中分离到26株副猪嗜血杆菌(分离率为7.12%),其中12型10株、4型4株、11型3株、5型1株、13型1株及未定型菌株7株。初步研制的副猪嗜血杆菌三价灭活疫苗的免疫保护效果要优于商品灭活疫苗,对副猪嗜血杆菌血清4型、5型及12型具有较好的免疫保护能力。     

副猪嗜血杆菌部分16S rRNA基因的克隆及序列分析

副猪嗜血杆菌(Haenophilus parasuis,Hps)为副猪嗜血杆菌病的病原体。目前,副猪嗜血杆菌地方分离株基因背景研究国内报道不多,试验针对临床分离的2株Hps进行16S rRNA基因片段的扩增、克隆、测序及同源性比较,以期在分子水平对副猪嗜血杆菌进行鉴定。1材料与方法1.1菌种和质粒副     

镇江地区副猪嗜血杆菌分离鉴定血清型及耐药性检测

为了解镇江地区副猪嗜血杆菌血清型流行情况与耐药性情况,本试验采集患病仔猪的肺脏、肝脏、关节渗出液等病料组织85份,采用细菌分离、形态学观察、培养特征鉴定、PCR鉴定等方法对副猪嗜血杆菌进行鉴定,采用PCR法和K-B药敏纸片法分别检测副猪嗜血杆菌血清型及耐药性。结果显示,从85份病料组织中分离得到48株副猪嗜血杆菌;48株副猪嗜血杆菌具有7种血清型,其中,血清5型和12型为流行的主要优势血清型,分别占分离菌株的25.0%和31.3%; 48株副猪嗜血杆菌对磺胺间甲氧嘧啶、阿莫西林、庆大霉素等9种药物耐药率在50.0%～100.0%之间,对其他药物耐药率在12.5%～25.0%之间。说明该地区分离的副猪嗜血杆菌血清型流行情况复杂,且耐药性严重。本试验为该地区的副猪嗜血杆菌防控提供研究基础。     

山东省副猪嗜血杆菌流行现状调查及启示

为了解山东省副猪嗜血杆菌的流行情况,采用临床剖检、细菌分离鉴定和PCR检测的方法对20家规模化猪场疑似发病猪进行检测;最终分离鉴定到7株副猪嗜血杆菌,分离率为35%。对分离的副嗜血杆菌进行药敏试验,发现该菌存在严重的耐药性。调查显示,副猪嗜血杆菌在山东省规模化猪场广泛流行,并且普遍存在与猪萎缩性鼻炎、蓝耳病混合感染的情况,应予以重视。     

川北地区副猪嗜血杆菌的分离鉴定

为了给川北地区养猪场提供副猪嗜血杆菌病的科学防控及合理的治疗用药方案,对川北地区西充、三台、绵阳等地规模化猪场保育猪发生的副猪嗜血杆菌病病原进行分离鉴定。采集副猪嗜血杆菌病疑似病死猪的肺、肝、脾、淋巴结、心包液、腹水、关节肿液等样本55例,通过细菌的分离纯化,对分离菌进行了染色镜检、V因子需要试验、致病性试验、PCR鉴定、药敏试验和同源性分析。结果表明,分离出了20株副猪嗜血杆菌,分离株革兰染色为阴性,有荚膜,分离菌株与GenBank公布的12株副猪嗜血杆菌的16S rRNA序列有高度同源性,且分离株对β-内酰胺类、四环素类、磺胺类的耐药率最高。试验结果对于川北地区养猪生产中副猪嗜血杆菌病的有效防治提供依据。     

副猪嗜血杆菌分离鉴定及药敏试验

副猪嗜血杆菌能够引起猪的多发性浆膜炎、关节炎和脑膜炎等,是影响猪的最重要细菌之一,目前在所有的主要养猪国家均有存在。为了弄清河南省副猪嗜血杆菌病流行情况,2012年-2015年,从河南不同地区猪场送检的疑似病料,进行副猪嗜血杆菌分离和鉴定,共分离到5株细菌,通过细菌形态观察、培养特征鉴定、生化试验、PCR检测,鉴定为副猪嗜血杆菌,分别命名为A6-fei、C3-xin、C12-xin、D2-fei和E1-fei。采用纸片扩散法,对分离5株副猪嗜血杆菌进行药敏试验,其结果表明所分离的5株副猪嗜血杆菌的药物敏感性不尽相同,各分离菌株对头孢噻肟、氟苯尼考星最敏感,对复方新诺明敏感性最差,其中菌株C3-xin对复方新诺明、庆大霉素、卡那霉素、青霉素完全耐药。表明副猪嗜血杆菌病在河南省依然存在,并且不同地区菌株对常用药物的敏感性各不相同,应当引起养猪场重视。     

副猪嗜血杆菌辽宁株的分离鉴定及药物敏感性分析

为给发病猪场合理用药控制和治疗副猪嗜血杆菌病提供依据,试验对辽宁省北部地区规模化猪场及农村散养户出现疑似副猪嗜血杆菌感染的病猪进行病理剖检、细菌分离培养、生化鉴定、PCR鉴定和药敏试验。结果表明:共分离、鉴定出4株副猪嗜血杆菌;分离株对头孢噻肟、恩诺沙星、头孢氨苄、林可霉素、氧氟沙星、环丙沙星高敏,而对链霉素、红霉素、卡那霉素、多黏菌素等耐药。     

副猪嗜血杆菌的分离鉴定与药敏试验

对广东15个送检的疑似猪传染性副猪嗜血杆菌病的病猪样品,用TSA培养基进行细菌的分离,并对分离菌株进行细菌的形态观察、培养特性和生化试验鉴定,以及用副猪嗜血杆菌16S rRNA基因的特异性引物进行PCR鉴定。试验结果表明,有7株分离菌株扩增出了821 bp的特异性目的条带,结合形态观察、培养特性和生化试验鉴定,结果表明成功分离到了7株副猪嗜血杆菌;药敏试验结果显示,分离菌株对氨苄西林、多粘菌素、庆大霉素等药物较敏感。     

副猪嗜血杆菌的分离鉴定及16S rRNA序列分析

从云南某规模化养猪场病猪肺脏分离到1株革兰氏阴性小杆菌,经细菌生化鉴定、PCR鉴定和16S rRNA序列比对鉴定为副猪嗜血杆菌。抗生素药物敏感试验结果表明,分离菌株对四环素、红霉素、氯霉素、头孢噻吩高敏;对庆大霉素、氧氟沙星、诺氟沙星中敏;对磺胺甲唑耐药。16S rRNA分析结果表明,该分离株与GenBank中的Hps参考株AB078973(基因登录号)同源性为100%,将分离菌株鉴定为副猪嗜血杆菌。16S rRNA遗传进化关系表明,分离株与副猪嗜血杆菌3株血清5型参考株AB078972、AB078973、AB078974的16S rRNA序列位于一个分支上,遗传进化关系最近,它们之间的核苷酸同源性在99.0%~99.4%之间,初步鉴定为血清5型副猪嗜血杆菌,致病性试验结果表明,分离菌株对小白鼠有强致病性,命名为YN-1株。     

副猪嗜血杆菌流行病学调查及两株分离株耐药性和致病性分析

为了解山东地区副猪嗜血杆菌病的流行情况和流行菌株的生物学特性及致病性,将2016-2018年山东省12个地区送检的103个发病猪的病料进行细菌分离,并对疑似菌株进行形态学观察、PCR鉴定及血清型鉴定,对两株流行菌株进行了培养特性观察、生化特性鉴定、药敏试验及致病性研究。最终分离获得29株副猪嗜血杆菌,分离率为28.16%,其中血清型4型和5型最为流行,其次是1型和12型。该病多发于春秋两季,31~50日龄的仔猪感染率最高。两株流行菌株LZ株和LC株均对青霉素类、头孢类等药物高度敏感,LZ株对庆大霉素、卡那霉素等中度敏感,对林可霉素、链霉素不敏感,LC株对庆大霉素、林可霉素等中度敏感,对卡那霉素、链霉素不敏感;生化特性试验结果显示,LC株和LZ株的硝酸盐还原试验、接触酶试验、葡萄糖发酵试验以及果糖发酵试验的结果均为阳性,吲哚试验、氧化酶试验、甘露醇发酵试验的结果均为阴性;动物致病性试验表明LZ株和LC株均具有较强的毒力,最小发病剂量分别为4.5×10^9 CFU和6.0×10^9 CFU。该研究为副猪嗜血杆菌病的防治提供了重要的参考依据。     

副猪嗜血杆菌PCR快速诊断方法的建立

副猪嗜血杆菌营养要求比较苛刻,常规生化试验检测方法比较烦琐,本研究针对副猪嗜血杆菌16SrRNA基因特异性PCR引物序列,合成一对PCR引物,建立相应的PCR检测方法,同时对该方法的灵敏性、特异性等实验。结果显示可检测出浓度为2．8×10^3CFU／mL的副猪嗜血杆菌表明该方法灵敏度高;对大肠杆菌、链球菌、巴氏杆菌、沙门氏杆菌、金黄色葡萄球菌进行PCR扩增均不获得任何条带,表明该方法特异性较强。所以该方法对于临床快速检测副猪嗜血杆菌具有重要意义。     

副猪嗜血杆菌的分离鉴定与药敏试验

对一例临床症状、病理剖检变化疑似副猪嗜血杆菌病的仔猪病料进行实验室诊断,进行了细菌培养特性和生化特性等鉴定,初步怀疑为副猪嗜血杆菌,根据副猪嗜血杆菌的16 S rRNA基因设计特异性引物进行PCR扩增鉴定,结果表明,分离菌为副猪嗜血杆菌.药敏试验显示,该分离菌对阿米卡星、头孢氨苄、新霉素高度敏感.     

两株副猪嗜血杆菌的分离鉴定及药敏试验

从疑似副猪嗜血杆菌病发病猪场采集58份病料,分离到2株革兰氏阴性短小杆菌.对分离菌株进行培养特性、生化特性、血清型分型研究以及PCR检测和测序分析,结果表明,分离的两株细菌均为血清4型副猪嗜血杆菌.对分离菌株进行药敏试验分析,结果显示分离株对头孢噻肟、头孢噻吩、替米考星高度敏感,对四环素、丁胺卡那、恩诺沙星、环丙沙星中度敏感,对甲氧苄氨嘧啶、复方新诺明、链霉素、阿莫西林、新霉素均耐药.     

副猪嗜血杆菌高密度发酵工艺研究

旨在建立副猪嗜血杆菌高密度发酵工艺。通过对TSB、BH1、LB培养基进行比较，选择TSB培养基进行优化，利用优化后的培养基对副猪嗜血杆菌在10L发酵罐中进行高密度发酵培养。结果表明，血清4型JS株的活菌数达到2．5×10^10CFU／mL，血清5型ZJ株的活菌数达到2．5×10^10CFU／mL，且通过批次补料与流加相结合的工艺使关键成本血清的使用量降低了1／2。在1000L发酵规模上进行连续3批的发酵试验．经验证该工艺可用于副猪嗜血杆菌灭活疫苗抗原的规模化生产。对3批发酵抗原利用替代动物豚鼠进行动物实验，结果显示抗原均合格。研究结果为国内副猪嗜血杆菌流行菌株血清4型和5型二价灭活疫苗的规模化生产提供了理论依据。     

副猪嗜血杆菌的分离鉴定及自家灭活苗的研制

从病猪体内分离细菌,对分离菌株从形态、染色、培养特性、生化特性等方面进行鉴定;用纸片扩散法筛选敏感药物,实验室合成氢氧化铝胶佐剂,制备自家苗对其进行防制。试验结果表明,该分离菌为副猪嗜血杆菌,病猪确诊为副猪嗜血杆菌病,分离菌对头孢噻肟、丁胺卡那霉素、庆大霉素、头孢菌素高度敏感,用自家苗防制该病安全有效。结果提示,副猪嗜血杆菌病只有通过实验室分离鉴定才可确诊,临床应筛选敏感药物进行治疗,制备自家苗对预防该病有较好效果。     

Isolation and Identification of Haemophilus parasuis SD02 strain

A bacterial strain was isolated from the sick pigs suspiciously infected by polyserositis and arthritis in a pig farm in Shandong Province,and identified through morphological observation,culture traits,biochemical characteristics and PCR amplification.Additionally,primers were de-signed according to the 16S rRNA sequence of Haemophilus parasuis,and the bacterial strain was amplified by PCR.The amplified fragments of approximately 1 400 bp was sequenced,and aligned with the sequence in Gen Bank.The results showed that it shared the homology of 97%-99%with the 16S rRNA sequence of foreign H.parasuis,and confirmed as H.parasuis(HPS).The strain was determined as serotype 4 through serotype identification.The strain was named SD02.     

副猪嗜血杆菌病原检测及aroA基因PCR-RFLP分型

本试验应用PCR方法及PCR-RFLP技术对aroA基因在副猪嗜血杆菌病原检测及基因分型中的作用进行探讨。以针对aroA基因的PCR引物成功检测出18株来自广西各地区猪场的副猪嗜血杆菌,敏感性检测结果表明,该PCR方法可检测的最低菌数为10²个。对该18株副猪嗜血杆菌进行aroA基因的序列测定,并进行aroA基因的酶切位点分析,筛选出Hind Ⅲ和FokⅠ两种限制性内切酶,利用PCR-RFLP技术对1株血清5型参考菌株与本研究中18株广西菌株aroA基因的完整编码序列进行Hind Ⅲ和FokⅠ限制酶谱分析,结果显示可分为与毒力相关的3种谱型。本研究结果表明,应用PCR方法及PCR-RFLP技术对副猪嗜血杆菌进行检测分析有助于更好地研究副猪嗜血杆菌的生物学特性及aroA基因的功能。