屎肠球菌CCTCCM2017191发酵培养基的优化

为了实现屎肠球菌CCTCCM2017191的高密度工业化生产,必须提高该屎肠球菌的发酵活菌量,因此对其发酵培养基进行了优化筛选。首先在MRS培养基的基础上进行单因素试验以确定适合该屎肠球菌生长的最优pH值和培养温度以及该菌的最适发酵碳源和氮源;再利用Plackett-Bur-man试验设计分析筛选培养基成分中影响屎肠球菌发酵活菌数的显著影响因子,设计最陡爬坡试验逼近显著因子的最大活菌数响应区域,最后采用中心复合序贯试验设计(central composite circum-scribed design,CCC)和响应面分析法得到显著影响因子的最优配比浓度。获得发酵优化培养基配方为:麦芽糊精20 g/l、酵母浸粉77.22 g/l、结晶乙酸钠6.42 g/l、柠檬酸二铵2.0 g/l、磷酸氢二钾2.0 g/l、无水硫酸镁0.2 g/l、硫酸锰0.04 g/l、吐温-80 0.99 g/l。培养基pH值为8.0,培养温度为37℃。经验证,优化后培养基的发酵菌液活菌数可达6.136×109CFU/ml是相同条件下MRS培养基发酵菌液活菌数的4.63倍,优化方案及所得回归模型切实可靠,成功实现了该屎肠球菌CCTCCM2017191的高密度发酵培养。     

屎肠球菌发酵工艺优化及菌粉的制备

为应用高活性的屎肠球菌菌粉制作畜禽饲料添加剂,试验对屎肠球菌的发酵培养基、发酵时间、喷粉载体等发酵和制粉条件进行优化。结果表明：最优发酵培养基选用32.50 g/L低蛋白乳清粉、30.00 g/L葡萄糖、2.00 g/L酵母提取物、5.00 g/L蛋白胨、0.15 g/L硫酸镁、0.03 g/L硫酸锰、2.00 g/L磷酸氢二钾,发酵时间为15 h,喷粉载体选用13%扶态粉、2%白炭黑作为保护剂制备菌粉。该方法制备的屎肠球菌菌粉中活菌数约3.46×10⁸CFU/g,可添加于畜禽饲料。     

粪肠球菌R-WL发酵培养基的优化

本试验旨在优化培养基提高粪肠球菌(Enterococcus faecalis)R-WL发酵液的菌体密度,为高效、优质的微生态制剂产品研制奠定基础。首先通过生长曲线的测定、培养条件和培养基成分的单因素试验,确定菌种RWL的最适培养条件为:时间14 h、pH 8.5、温度37℃、接种量3%,最适碳源为乳糖,浓度为10 g/L,最适氮源为蛋白胨+酵母膏,浓度为30 g/L。然后通过Plackett-Burman试验分析培养基中对粪肠球菌发酵影响最重要的主要因素为蛋白胨、乙酸钠和柠檬酸二铵,再通过最陡爬坡试验获得主要因素的最适范围,最后通过Box-Behnken试验和响应面分析得到主要因素的最适添加量。结果表明:最优发酵培养基配方为:乳糖10 g/L、酵母膏15 g/L、蛋白胨12.18 g/L、乙酸钠4.5 g/L、柠檬酸二铵4.5 g/L、硫酸镁0.58 g/L、硫酸锰0.25 g/L、磷酸氢二钾2 g/L、轻质碳酸钙3 g/L,初始pH 8.5。通过试验验证,优化后发酵培养基的发酵菌液活菌数可达(6.44±0.10)×109cfu/mL,比原MRS培养基活菌数提高了71.28%。     

基于响应面法优化饲用粪肠球菌发酵培养基

为了实现粪肠球菌(Enterococcus faecalis)E_(XW)27的高密度培养,对健康仔猪肠道分离的粪肠球菌E_(XW)27发酵培养基进行响应面优化,以MRS为基础培养基,活菌浓度为评价指标,对发酵培养基中碳氮源、微量元素、缓冲盐体系以及促生长因子等通过单因素试验和响应面试验优化高密度发酵培养的培养基配方,确定最佳活菌浓度时的培养基组成。结果显示:蔗糖57.3 g/L、蛋白胨45 g/L、磷酸氢二钾3.75 g/L、柠檬酸铵3.5 g/L、乙酸钠6.25 g/L、硫酸镁1.5 g/L、硫酸锰0.45 g/L、组氨酸1.4 g/L、维生素C 0.01 g/L、碳酸钙10 g/L。发酵液最高活菌数达到1.03×10~(10) CFU/mL,是相同条件下MRS培养基中活菌数的10.61倍,菌体浓度显著提高,具有实际应用价值。     

饲用粪肠球菌培养基及发酵条件的优化研究

为提高饲用粪肠球菌发酵活菌数,通过单因素试验和正交优化试验对粪肠球菌的培养基和发酵条件进行优化.确定最佳发酵培养基为蛋白胨3.2％,酵母粉1％,葡萄糖2.8％,吐温-80 1 ml/L,柠檬酸三铵0.2％,七水硫酸镁0.02％,一水硫酸锰0.005％,碳酸钙1.0％.最佳发酵条件为培养基初始pH(7.1+0.1),接种量2.5％～5.0％,温度34～37℃,150 r/min振荡培养.在最佳培养基和发酵条件下,粪肠球菌活菌数最高可达8.5×109 cfu/ml.     

响应面法优化前包被屎肠球菌超声计数条件的研究

发酵前包被微胶囊化培养的屎肠球菌具有耐受性强、效价稳定的优点,但其活菌数检测难度阻碍了其推广使用。本研究以前包被屎肠球菌为原料,综合考虑操作方便、时间及计数结果,优化前包被肠球菌活菌超声振荡计数方法,选择不同试管的超声时间、超声功率为自变量,总菌落数(cfu/g)为响应值,采用Box-Behnken设计方法,研究各自变量及其交互作用对计数结果的影响。结果显示,响应面法优化所得最佳计数条件为:原菌液梯度稀释后,超声功率240 W、10~(-1)超声7 min、10~(-2)超声45 s。此条件下,前包被屎肠球菌计数结果最佳,为5.53×10~(11) cfu/g。本结果与预测值相近,故选用此方法作为后期前包被屎肠球菌活菌计数方法。     

市售4种屎肠球菌饲料添加剂的质量分析

研究参考GB/T 13093—2006《饲料中细菌总数的测定》和《中华人民共和国药典》三部"微生态活菌制品总论",利用选择性培养基,采用平板计数法和生化鉴定对4种市售屎肠球菌饲料添加剂进行有效活菌数测定,以了解目前屎肠球菌饲料添加剂的质量状况,同时也为同类产品的质量评估提供依据。结果表明,研究采用的方法可较好地对屎肠球菌饲料添加剂进行有效活菌数测定,所测定的4种屎肠球菌饲料添加剂中有1组标示菌种与实测菌种不符,而另3组的活菌数和标示量也存在一定偏差。     

牛源复合芽孢杆菌混合发酵条件的优化

为了提高复合芽孢杆菌混合发酵的芽孢菌数,试验采用外加碳源、氮源及无机盐单因素试验及4因素3水平正交试验对培养基进行优化,并对发酵参数进行了研究,测定了活菌数及芽孢菌数。结果表明:培养基最佳配比为玉米粉20 g/L、豆粕粉40 g/L、KH2PO41.5 g/L、K2HPO41.5 g/L、Mn SO42 g/L;混合发酵的最适条件为37℃、p H值7.0、500 m L三角瓶中装入200 m L培养液,160 r/min摇床培养26 h,此条件下芽孢菌数可达4.91×1010cfu/m L。     

热灭活屎肠球菌及其活菌对仔猪腹泻率、消化酶活性和脏器指数的影响

为了研究屎肠球菌对哺乳期仔猪的益生作用,试验选用健康的杜×长×大新生仔猪9窝,将其随机分为对照组、屎肠球菌灭活菌组和屎肠球菌活菌组,每组3窝。从出生开始至6日龄,对照组、屎肠球菌灭活菌组和屎肠球菌活菌组仔猪分别经口灌服无菌脱脂乳、含屎肠球菌热灭活菌(浓度为1×108cfu/m L)的脱脂乳和含屎肠球菌活菌(浓度为1×108cfu/m L)的脱脂乳,10 m L/(头·d)。仔猪于7日龄开始饲喂教槽料,21日龄断奶。分别于7日龄和21日龄时从每窝中选出1头接近平均体重的仔猪屠宰,取肝脏和脾脏,采集空肠黏膜,计算并分析仔猪腹泻率、消化酶活性和脏器指数。结果表明:与对照组相比,灭活菌和活菌都不影响哺乳期仔猪的体重和日增重(P0.05);屎肠球菌灭活菌组和屎肠球菌活菌组仔猪第3周的腹泻率都下降至0,整个哺乳期腹泻率分别下降77.44%(P=0.078)和92.03%(P0.05),两个益生菌组间差异不显著(P0.05);屎肠球菌灭活菌组和屎肠球菌活菌组的21日龄仔猪空肠麦芽糖酶活性分别增加9.67倍(P0.05)和11.29倍(P=0.01),活菌还显著提高脂肪酶含量1.09倍(P0.05),但两个益生菌组间差异不显著(P0.05);灭活菌不影响仔猪肝脏指数和脾脏指数,活菌也不影响肝脏指数及7日龄仔猪脾脏指数,但显著降低21日龄仔猪脾脏指数(P0.05)。说明热灭活益生屎肠球菌对哺乳期仔猪的生长、腹泻率、小肠消化酶活性以及肝脏和脾脏指数都没有负面影响,而且在很大程度上与活菌的作用相似,具有替代活菌的潜力。     

鸡源戊糖片球菌和屎肠球菌对氨处理效果的研究

试验旨在为研究鸡源戊糖片球菌和屎肠球菌对氨氮处理的效果。体外试验将戊糖片球菌和屎肠球菌以10~7cfu/m L分别添加到以硫酸铵为唯一氮源的培养基中,以含氮培养基为对照,测定12~48 h培养液中的氨含量;体内试验将戊糖片球菌和屎肠球菌以109cfu/kg分别添加到基础日粮中,以基础日粮为对照,饲喂7日龄SPF鸡,测定血浆中氨、尿素氮和尿酸含量,检测盲肠中p H值、乳酸菌、大肠杆菌浓度以及氨气排放量。结果显示:与未添加两种细菌的对照组相比,戊糖片球菌和屎肠球菌能显著降低菌液氨离子浓度、氨气排放量、血氨浓度、盲肠p H值和大肠杆菌浓度(P0.05),提高盲肠乳酸菌浓度(P0.05);与屎肠球菌相比,戊糖片球菌能显著降低12 h菌液氨离子浓度、24 d时氨气排放量、血氨浓度和大肠杆菌浓度(P0.05)。研究表明戊糖片球菌具有较好的降氨效果,是理想的降氨除氮菌株。     

饲粮中添加屎肠球菌对肉鸡生长性能、血清生化指标、肠道形态和抗氧化功能的影响

本试验旨在研究饲粮中添加不同剂量的屎肠球菌对肉鸡生长性能、血清生化指标、肠道形态和抗氧化功能的影响。试验选用150只1日龄健康罗斯308肉鸡，随机分为3个组，每组5个重复，每个重复10只鸡（公母各占1/2）。对照组饲喂基础饲粮，低剂量屎肠球菌组和高剂量屎肠球菌组分别在基础饲粮中添加500和1 000 mg/kg屎肠球菌菌粉（活菌数为3.46×108CFU/g）。试验期28 d。结果表明：1）与对照组相比，饲粮中添加不同剂量的屎肠球菌对肉鸡各阶段生长性能均无显著影响（P>0.05）。2）与对照组相比，高剂量屎肠球菌组肉鸡血清总蛋白含量显著提高（P<0.05），血清磷含量有提高的趋势（P=0.054）；低剂量屎肠球菌组肉鸡血清钙含量显著降低（P<0.05）。3）与对照组相比，低剂量屎肠球菌组和高剂量屎肠球菌组肉鸡十二指肠和空肠绒毛高度与隐窝深度比值显著提高（P<0.05），十二指肠隐窝深度显著降低（P<0.05）。4）与对照组相比，低剂量屎肠球菌组和高剂量屎肠球菌组肉鸡血清和十二指肠过氧化氢含量显著降低（P<0.05），空肠过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶...     

Lactobacillus fermentum F6的增殖培养基优化及高密度发酵的研究

对分离自少数民族传统乳制品中的Lactobacillus fermentum F6菌种的增殖培养基进行优化,并对其高密度发酵条件进行探索。通过测定不同组成培养基中菌体在600nm波长下的光密度和发酵液在不同发酵条件下的活菌数,得到最适增殖培养基配方及其高密度发酵条件。增殖培养基配方为:蔗糖62.0g/L、酵母粉35.5g/L、大豆蛋白胨12.0g/L、柠檬酸1.35g/L、柠檬酸钠22g/L、MgSO4·7H2O2g/L、MnSO4·5H2O100mg/L、Tween-801g/L。在5L发酵罐中,Lactobacillus fermentum F6经优化发酵条件,其活菌数可达到2.30×1010CFU/mL,加入保护剂经冷冻干燥后活菌数可达到1.45×1011CFU/g,存活率为79.11%。中试培养液中活菌数可达1.02×1010CFU/mL,存活率为58%。以上优化的增殖培养基和高密度发酵条件为Lactobacillus fermentum F6的工业化生产奠定了基础。     

一株强抗逆性猪源乳酸菌的筛选及生物学特性研究

本试验从健康仔猪粪便样品中分离纯化得到5株乳酸菌,并应用16S rRNA基因进化分析对其进行种属鉴定。通过对此5株菌进行耐热、耐酸、耐胆盐、耐贮藏性能和抗生素抗性选育,与伤寒沙门氏菌、大肠杆菌以及金黄色葡萄球菌进行混合培养,探究其对大肠杆菌、鸡白痢沙门等病原菌的抑菌效果,最终筛选出一株具有强抗逆性和优良益生特性的屎肠球菌,并进一步对其生长性能和生理生化特性进行了系统研究,为菌株的开发与应用提供理论参考。 [关键词] 仔猪粪便|屎肠球菌|筛选|抗逆性|益生特性     

青贮料中肠球菌的分离与筛选

本试验从青贮料中分离肠球菌并对分离菌株进行初步鉴定与筛选,通过正交试验设计研究不同温度、初始pH和瘤胃液含量对3株分离菌生长的影响,筛选出适合作为奶牛饲用微生物的菌株。结果表明,3株分离菌的最佳培养条件相同为：培养基含葡萄糖2%、蛋白胨1%、瘤胃液20%、初始pH为5.8,接种量为3%,装液量为40 ml, 36℃培养24 h。 在该条件下,3株分离菌的生物量分别为1.9907、1.2963和1.2752。选择生物量最高的1号菌送中科院微生物所鉴定,结果为屎肠球菌。     

唾液乳杆菌发酵条件的研究

为了获得活菌数高的唾液乳杆菌,使其在临床应用中更好地发挥功效,试验采用单因素试验及响应面法对来自中国微生物菌种保藏中心的一株唾液乳杆菌的培养基配方及发酵条件进行研究。结果表明:优化后的培养基配方为葡萄糖13.60 g/L、蛋白胨20.90 g/L、酵母粉6 g/L、磷酸氢二钾2.0 g/L、乙酸钠8.80 g/L、硫酸镁0.6 g/L、硫酸锰0.07 g/L;发酵条件为p H值6.5、接种量3%,于37℃条件下静置培养24 h;发酵条件优化后活菌数提高近4.0×109cfu/m L,且到达稳定期的时间提前3 h。说明发酵条件优化后得到的唾液乳杆菌不仅活菌数高,而且提高了生产效益和降低了生产成本。     

猪粪便中粪肠球菌的筛选及其在金针菇菌糠发酵中的应用

为了将金针菇菌糠转化成益生素饲料,试验采用MRS琼脂培养基从猪粪便中分离筛选出耐酸、耐胆汁的产酸菌株,然后将菌株的16S rRNA基因进行PCR扩增,进而对菌株的16S rRNA基因序列和分子进化树进行了分析。用分离得到的细菌进行金针菇菌糠发酵处理,30 d后检测活菌数及粗蛋白、氨基酸含量。结果表明:从猪粪便中分离得到1株存活率高的粪肠球菌。用该菌对金针菇菌糠进行发酵处理后,活菌数达45亿cfu/g,粗蛋白达17. 33%,所测18种氨基酸总量达11. 94%,有较高的饲用价值。说明可以采用粪肠球菌固态发酵金针菇菌糠,使其转化为益生素饲料。     

一株耐药型红树林乳酸菌的筛选鉴定及培养基优化

抗生素滥用严重阻碍了水产养殖业的绿色发展,海洋源性耐药型乳酸菌的开发利用是水产养殖业可持续发展的重要举措之一。本研究从广东省湛江市渔港公园红树林淤泥中分离筛选出一株乳酸菌（命名LPAR1）并进行菌种鉴定,继而探究其耐药性和发酵工艺参数。经微生物形态学、生理生化和分子鉴定分析,确定菌株LPAR1为乳酸片球菌（Pediococcus acidilactici）。药敏试验显示,乳酸片球菌LPAR1对复方新诺明、四环素和甲氧苄胺嘧啶耐药,对氨苄西林和利福平敏感。采用单因素试验研究了影响乳酸片球菌LPAR1生长的培养基条件,并确定其最佳碳源为乳糖,最佳氮源为蛋白胨,最佳pH为6.00。经响应面试验优化,最佳发酵培养基条件为乳糖25.00 g/L,蛋白胨20.77 g/L,pH 6.5。在该条件下,菌落数为9.105×8log CFU/mL,该值与模型预测值（9.098×8log CFU/mL）接近。研究结果可为红树林海洋乳酸片球菌的开发利用、本地化水产养殖微生态制剂的研发提供基础依据。 [关键词] 红树林|乳酸片球菌|鉴定|耐药性|培养基优化     

微胶囊化屎肠球菌及其特性研究

试验采用发酵前包被的工艺,对所筛得屎肠球菌进行微胶囊化,并对微囊化菌体的特性进行了研究。结果表明:所制得微胶囊粒径大小合适,形态好;微囊化培养的屎肠球菌对致病型大肠杆菌K88、K99、金黄色葡萄球菌、巴氏杆菌及沙门氏菌都有较强的抑制作用,其中对大肠杆菌K99的抑菌效果最好;与游离培养状态下相比,微囊化培养的屎肠球菌具有更好的生长优势,更好的抵御高铜、模拟胃液的能力(P<0.01);储存试验表明,4℃条件下,储藏2个月,活菌数基本没有下降。由此可见,微胶囊包被能明显提高屎肠球菌在极端环境下的存活率。     

饲用嗜酸小球菌液体生料发酵工艺研究

为提高嗜酸小球菌液体发酵的活菌数,本试验采用生料发酵技术和单因素试验法研究了发酵培养基组成以及发酵条件对嗜酸小球菌活菌数的影响,并采用正交试验法对发酵条件进行优化。结果表明:适宜的发酵培养基配方和条件为葡萄糖2.5%、酵母抽提粉0.3%、蛋白胨0.6%、K_2HPO_40.1%、CH_3COONa 0.6%、NaCl 3%、发酵温度40℃、种龄60 h、接种量20%。在上述优化条件下发酵36 h,嗜酸小球菌的活菌数对数值为11.258 lg cfu/m L。研究结果显示了液体生料发酵技术适合于饲用嗜酸小球菌的生产。     

除臭微生物7NC培养基和培养条件的优化

针对除臭微生物7NC的应用,采用单因素试验和正交试验的方法对菌株7NC进行了培养基以及培养基组分的筛选。结果表明,7NC较理想的培养基为营养肉汤培养基：蛋白胨10 g/L,氯化钠8 g/L,葡萄糖1 g/L,PH 7.5,酵母粉3 g/L,最适条件为温度37℃,摇床培养（130 r/min）,接种量为3%。试验结果为7NC的大规模生产提供了参数,提高了产量。