干扰素-τ与反刍动物妊娠识别的研究

干扰素 -τ是由反刍动物孕体附植时发出的特有妊娠信号 ,是建立母体妊娠识别的一种主要因子。反刍动物早期妊娠识别和妊娠诊断是影响其繁殖力的关键因素。文章对干扰素 -τ的分子结构、生物学功能及其在妊娠识别中的作用机理的最新研究作了扼要综述     

IFN-τ与妊娠

IFN-τ属于一类功能特化的 IFN,它是反刍动物母体妊娠识别的孕体信号 ,在黄体维持和妊娠建立过程中发挥重要的生物学功能。本文对 IFN- τ的抗溶黄作用及其抗溶黄机制等方面的研究进展进行了系统综述。     

牛孤雌发育胚胎干扰素-τ基因的表达规律

采用地高辛(DIG)标记的DNA探针,对体外生产的不同日龄(3,5,6,7,9d)的牛孤雌发育胚胎细胞中干扰素(IFN)τ基因表达产物mRNA进行原位杂交,研究牛孤雌发育胚胎中IFNτ基因的表达情况。结果显示IFNτ基因从第6d的早期囊胚开始表达,第7d囊胚的IFNτ表达量明显提高。胚龄相同而发育阶段不同的胚胎IFNτ表达量有差异,第9d的孵化囊胚IFNτ表达量要高于未孵化囊胚的。     

干扰素-τ对绵羊妊娠识别影响的研究进展

干扰素-τ是羊孕体附植时发出的特有的妊娠识别信号,它是建立母体妊娠识别的一种主要因子。本文阐述了IFN-τ的分子结构及其最新的研究进展,即IFN-τ和PGF2α、U-CRP、OTR、GM-CSF的互作机理。     

干扰素-τ及其在反刍动物中抗黄体溶解作用

干扰素-τ是一个在反刍动物妊娠建立过程中起着关键性作用的细胞因子,属于Ⅰ型干扰素家族。在围植入期由胚胎滋养层单核细胞合成分泌,主要作用于子宫内膜,抑制溶黄体素PGF2α的合成分泌,起到抗黄体溶解作用,保证妊娠的建立。导致牛胚胎早期死亡的一个重要原因是抗黄体溶解机制失调,因此干扰素-τ被认为是一个能有效提高妊娠率的可操控靶细胞因子。     

羊干扰素Tau(IFN-τ)分子生物学研究进展

羊干扰素可分为Ⅰ型、Ⅱ型，后者与其他动物干扰素一样，只包含一种干扰素即IFN-γ，而前者被确定的却只有IFN—ω和IFN—τ。对具有强抗病毒能力的干扰素α的研究一直是干扰素研究的主攻方向，但笔者却没有查到羊干扰素α的相关资料(80年代末曾被定义为IFN—αⅡ的基因现已被确定为IFN—     

干扰素-τ(IFN-τ)的分子结构和妊娠识别机理

在反刍动物的整个妊娠失败中，早期胚胎死亡占有很大的比例，它在很大程度上是由母体妊娠识别失败造成的IFN-τ（干扰素-τ）是由反刍动物孕体附植时发出的特有的妊娠识别信号，它是建立母体妊娠识别的一种主要因子，本文阐述了IFN-τ的分子结构及其最新研究进展，即IFN-τ和PGF2α，UCRP，OTR，GM-CSF的互作机理。     

干扰素生物学特性及应用研究进展

干扰素(IFN)是一类具有广泛生物学活性的糖蛋白,它具有调节机体免疫功能、抗病毒、抗寄生虫、抗肿瘤以及对妊娠的识别和维持作用等多种作用,是机体防御系统的重要组成部分.本文概述了IFN的分类与命名、生物学特性及其在兽医临床上的应用进展.     

中国黑白花奶牛干扰素-τ成熟蛋白基因的克隆与序列分析及牛干扰素-τ的分类

通过PCR克隆测序首次测定了黑白花奶牛干扰素-τ成熟蛋白的完整基因序列(GenBank登录号:DQ680846、DQ680847),其CDS长度为519 bp,编码含有172个氨基酸的牛干扰素-τ成熟蛋白。对所有牛干扰素-τ序列进行聚类分析,可将其聚为4类,发现了一类新的牛干扰素-τ(τ4)和6种新亚型(τ1e、τ3f、τ3g、τ3h、τ4a、τ4b)。DQ680846属于τ4类的一种亚型,标记为τ4a;DQ680847属于τ3类的一种亚型,标记为τ3f。各牛干扰素-τ基因核苷酸序列间的同源性在92.7%~99.8%之间,推导氨基酸序列间的同源性在88.5%~99.4%之间;τ4a、τ3f与其他牛干扰素-τ基因核苷酸序列间的同源性分别在94.0%~97.1%、92.9%~99.6%之间,推导氨基酸序列间的同源性分别在91.4%~96.0%、88.5%~99.4%之间。这一结果反应了牛干扰素-τ基因在进化过程中的高度保守性。二级结构预测发现牛干扰素-τ成熟蛋白是以5个α-螺旋(A-E螺旋)为基础构成的。Asn78、Cys1、Cys29、Cys99、Cys139I、le143、Lys160和C-末端的11个氨基酸为高度保守区,它们是维持牛干扰素-τ的结构和功能所必需的。     

妊娠早期蒙古绵羊子宫内膜enJSRV及IFN-τ基因表达水平的分析

本研究旨在检测内源性绵羊肺腺瘤反转录病毒(enJSRV)与干扰素-τ(IFN-τ)在妊娠早期蒙古绵羊子宫内膜组织的表达以及enJSRV的表达与外周血孕酮水平变化的关系。运用TaqMan实时荧光定量PCR技术和电化学发光法对enJSRV和IFN-τ在妊娠早期蒙古绵羊子宫内膜组织相对表达及孕酮水平进行了测定。实时荧光定量PCR结果显示,enJSRV和IFN-τmRNA在妊娠早期绵羊子宫内膜组织有不同程度的表达。SAS统计学软件分析得出,子宫内膜组织中enJSRV mRNA在妊娠12～14d(交配日为0d)表达较高,2～10、16～30d的表达均低于前者。IFN-τmRNA仅在妊娠12～25d表达,14d达其峰值,30d就不能检出,且差异都极显著(P<0.01)。电化学发光法结果显示,孕酮水平在妊娠2d为0.4ng·mL-1,以后升高,妊娠8～16d维持在8.3ng·mL-1左右,在妊娠19～30d孕酮水平有所下降,30d为2.5ng·mL-1。以上结果提示,子宫内膜组织中enJSRV mRNA的表达与外周血孕酮含量及IFN-τ的变化高度相关,且enJSRV在胎盘的形态发生及生殖生物学方面发挥重要作用。     

孕酮、干扰素τ对牛子宫内膜上细胞外基质及其相关配体表达的影响

为探索干扰素τ(IFN-τ)、孕酮对牛子宫内膜上细胞外基质(ECM)及其配基基因表达的影响,本研究在体外培养的牛子宫内膜细胞(bECs)培养液中,分别添加孕酮、bIFN-τ、孕酮和bIFN-τ混合物培养24h后,通过荧光定量PCR技术,检测bECs上Collagen、Laminin、Fibronectin、THBS和Tenascin等ECM基因和ECM配基基因Syndecan、CD44、CD47和RHAMM的表达。结果表明:在体外培养的牛子宫内膜细胞上,bIFN-τ显著地诱导了Tenascin、Collagen、RHAMM和Laminin基因的表达,孕酮显著地诱导了CD44、Fibronectin、RHAMM和Laminin基因的表达,但当bIFN-τ和孕酮联合作用时,CD44、THBS基因的转录水平受到抑制,Tenascin、Fibonectin、Colla-gen基因的转录水平恢复到对照组转录水平。研究结果显示,在胚胎植入过程中,IFN-τ和孕酮可能对牛子宫内膜上ECM及其配基基因表达具有调控作用。     

不同来源牛囊胚IFN-τ分泌水平的比较

干扰素-tau(IFN-)τ在妊娠建立中有重要生物学功能,对提高体外胚胎移植成功率有重要意义。为了探明不同来源的牛囊胚分泌的IFN-τ水平,本实验用细胞病变抑制法对牛孤雌发育(PA)、体外受精(IVF)、体外受精冷冻解冻(FT-IVF)及体细胞核移植(SC N T)等4种囊胚进行了检测。结果表明:在C R 1aa体系中培养7 d的PA、IVF、FT-IVF囊胚分泌的IFN-τ量没有显著性差异(P>0.05),但它们都显著高于相同日龄SC N T囊胚的分泌量(P<0.05)。分别在C R 1aa和SO FaaBSA体系中生产的PA囊胚分泌的IFN-τ量没有显著性差异(P>0.05),即2种体系对牛孤雌发育囊胚分泌IFN-τ量没有影响。在C R 1aa培养体系中生产的PA和IVF囊胚分泌的IFN-τ量与囊胚细胞数均无相关性。PA囊胚分泌的IFN-τ与囊胚直径平方无相关性,IVF囊胚的IFN-τ的分泌量与囊胚直径平方中等相关。     

麻鸭α干扰素基因的克隆与序列分析

根据GenBank文献，应用Oligo6．0分析软件设计合成了用于扩增鸭Ⅰ型干扰素（α—IFN）基因的2对引物。以麻鸭肝脏提取的基因组DNA为模板，采用Nest—PCR方法扩增获得了约600bp片段，经T载体克隆和测序分析证实，是麻鸭Ⅰ型干扰素基因（SDIFN—α）。生物信息学分析表明，SDIFN—α的开放阅读框架（ORF）由576个核苷酸所组成，预测蛋白质相对分子质量为21640，编码191个氨基酸。其中前28个氨基酸可能是信号肽部分，切割位点在28号氨基酸A和29号氨基酸S之间，序列中无内含子。成熟的多肽中含8个半胱氨酸和2个糖基化位点，2个蛋白激酶C磷酸化位点（protein kinase C phosphorylation site）和2个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点（casein kinase Ⅱ phosphorylation site）。SDIFN—α与鸭α—IFN基因核苷酸同源性为99．3％。有4个碱基的差异；与北京鸭α—IFN基因的核苷酸同源性为99．1％，氨基酸同源性为98．96％；与鸡α—IFN的核苷酸同源性为71．8％。与鹅、狗、牛、马和人的α—IFN基因的核苷酸同源性分别为96．0％、45．8％、45．5％、44．6％和41．7％。遗传进化分析结果表明，IFN—α的这些同源性与其动物分类地位相一致。     

白细胞介素和干扰素γ对绵羊体外受精胚胎体外发育影响的研究

利用SOFM 0．8％BSA 1mM谷氨酰胺作为绵羊胚胎的培养液，分别添加LIF、IL—1β、IL—2、IL—6及IFN—γ，以研究LIF、IL—1β、IL—2、IL—6及IFN—γ对绵羊早期胚胎发育的影响。结果说明，LIF促进2—8细胞胚胎发育至桑椹胚，同时也能够促进桑椹胚向扩大囊胚和孵化囊胚发育。但IL—1β、IL—2、IL—6及IFN—γ对绵羊早期胚胎的发育无显著影响。     

成华猪γ-干扰素基因分子克隆与序列分析

为研究猪γ—干扰素在抗御传染性疾病和肿瘤生物治疗中的免疫增强作用，本实验以ConA刺激成华猪外周血淋巴细胞提取激活淋细胞的mRNA，设计合成特异的引物序列，应用反转录—聚合酶链式反应(RT—PCR)扩增和克隆成华猪IFN—γ基因并进行序列5ll定。成华猪IFN—γcDNA约长500bp，从第68位核苷酸开始编码其信号肽，到569位核苷酸为终止子。IFN—γ基因的开放框架(ORF)由498bp构成，编码166个氨基酸。成华猪IFN—γ与猪IFN—γ基因核苷酸间同源性为98％，在261—269存在点突变，在氨基酸水平完全一致。IFN—γ氨基酸与鼠同源性为30％，与人同源性为40％。     

吉林白鹅α干扰素基因的原核表达及抗血清的制备

采用PCR方法扩增了吉林白鹅α干扰素（JL-GolFN—α）成熟肽编码序列,将IFN—α片段定向插入原核表达载体pGEX-6p-1中,构建重组质粒pGEX—IFN—α,将重组质粒转入大肠杆菌BL21（DE3）的感受态细胞里,在IPTG诱导下表达可溶性的融合蛋白（GST—IFN—α）。SDS—PAGE、Western—blot检测结果表明,重组吉林白鹅IFN—α融合蛋白（rJL—GoIFN-α）的分子量大小约为43ku,表达量占菌体总蛋白的25％。重组吉林自鹅仅干扰素,经谷胱甘肽Sepbarose-4B亲和柱层析纯化后,经过透析复性,得到纯化的目的蛋白,含量可达0．25mg／mL。将复性蛋白免疫新西兰白兔3次,制备高滴度的鹅IFN—α抗血清。本实验表达和纯化了鹅的IFN—α,并制备了兔抗鹅的IFN—α抗血清,为下一阶段鹅α干扰素重组蛋白的应用奠定了基础。     

IFN-τ研究进展

干扰素tau(IFN-τ)是反刍动物特有的一种新型Ⅰ型干扰素,通常被认为是反刍动物的妊娠识别信号,在胚胎与子宫内膜的相互作用中调节一系列相关基因的表达。近年来,随着对IFN-τ研究的深入开展,发现其除了参与调节反刍动物妊娠着床外,在其他物种中还具有抗炎、抗病毒、抗肿瘤、免疫调节等多种生理功能。基于此,文章围绕IFN-τ的主要生理作用展开综述。     

反刍动物胚胎附植阶段干扰素-τ对子宫内膜基因表达的影响

胚胎附植是哺乳动物生殖过程中的关键步骤。干扰素-τ是反刍动物特有的妊娠识别信号,在妊娠早期特异表达并发挥重要作用。本文综述了干扰素-τ在反刍动物胚胎附植及胎盘形成早期发挥的作用,总结该阶段受干扰素-τ调控的相关基因,以及干扰素-τ与孕酮、前列腺素、皮质醇在影响子宫内环境中的相互作用,为深入研究反刍动物胚胎附植相关基因和进一步了解其胚胎附植机制提供理论基础。     

干扰素的研究与应用

IFN是一类广谱抗病毒物质，本文就IFN的性质、分类、IFN的产生与诱导、IFN的基因结构、IFN的生物学作用及机理、IFN的应用等进行了综述。     

新兴猪IFN-α成熟蛋白基因的克隆与序列分析

根据NCBI GenBank上登录的猪IFN—α基因序列设计了1对引物，应用PCR技术直接从3周龄新兴猪肝细胞中扩增出了约500bp的基因片段；将该片段克隆到pMD 18-T载体，经PCR、酶切及序列测定，该克隆片段由501个核苷酸组成，共编码166个氨基酸，与NCBI GenBank上登录的2个猪IFN—α基因序列(登录号为M28623和X57191)比较，核苷酸的同源性分别为99．4％和99．2％。