检测PRRSV抗体的间接阻断ELISA方法的建立

用大肠杆菌BL21（DE3）pLysS表达PRRSV重组N蛋白作为包被抗原,建立检测猪群PRRSV抗体的间接阻断ELISA方法,并对临床上采集的256份猪血清样本进行检测,结果66份呈阳性,用IDEXXPRRSV抗体检测试剂盒检测,检出的阳性血清为63份,两者的符合率为98.8%。Western blot检测结果58份阳性,两者的符合率为96.9%。试验结果表明,本试验所建立的间接阻断ELISA方法具有良好敏感性和特异性,可用于PRRS流行病学调查和疾病的诊断。     

检测禽白血病病毒抗原的琼扩试验与酶联免疫吸附试验的比较

以检测羽髓中禽白血病病毒抗原的琼扩试验(AD)与检测卵清和泄殖腔棉拭中禽白血病病毒抗原的酶联免疫吸附试验(ELISSA)对两群鸡进行对比试验表明,AD 阳性率为63%和35.5%,ELISA 阳性率为10%和6.5%,ELISA 从卵清和泄殖腔棉拭中各检出阳性鸡7只,两者都为阳性的仅1只鸡,各右6只为单阳性,而 AD 法可检出 ELISA 的全部阳性鸡。从 ELISA净化的无白血病鸡群中,用 AD 法检出5.6%和15%的阳性鸡。跟踪试验表现,AD 阳性鸡,在 ELISA 多次检查中逐渐显示阳性。用 AD 法和 ELISA 同时检查羽髓,阳性率分别为55.2%和74.8%。     

用RPHA与ELISA检测牛血清中的类HBsAg物质

用RPHA和ELISA捡测246头份牛血清中的HB-sAg。结果,RPHA检出阳性率为36.60％,ELISA检出阳性率为7.3％。将RPHA检出阳性牛血清与人的HBsAg阳性血清比较,其阳性滴度远比人的低。牛血清经57℃1小时热处理后,阳性率明显下降。牛血清中HBsAg不能被HBsAb完全抑制,表明,用RPHA检测牛血清中HBsAg时,存在较高的非特异性。     

衣原体单克隆抗体在规模化牛羊场相关抗体的检测中的应用

采用淋巴细胞杂交瘤技术,研制出的抗衣原体单克隆抗体(McAb),应用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,对本地区所采的1361份牛血清,698份羊血清进行检测,结果:牛血清阳性检出率为9.18%,羊为22.06%。选择牛羊血清各50份用已建立的检测衣原体抗体ELISA方法与传统的间接血凝试验(IHA)进行比较,其敏感性高。牛血清ELISA阳性检出率为32%,IHA为24%,ELISA比IHA试验高出8个百分点。羊血清ELISA阳性检出率为26%,IHA为22%,前者比IHA高出4个百分点。     

用酶联免疫吸附试验检测牛传染性鼻气管炎病毒抗体的敏感性和特异性

应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测牛血清中牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)抗体的技术已经得到了发展。我们用ELISA方法检测从无IBR病毒牛群中采集的304份血清,其特异性为100%;检测经鼻内疫苗接种免疫后采集的62份牛血清,其诊断敏感性在免疫后第一个月为27.4%,第六个月为100%,检测标准血清中和抗体滴度≥1:2的303份牛血清,其敏感性为100%;463份随意诊断样品经比较试验证明ELISA检出血清阳性牛(61.6%)比标准血清中和试验(49.9%)要高。因此,我们认为ELISA具有技术上的优越性,可以作为一种常规诊断试验来检测牛血清中IBR病毒抗体。     

检测蓝舌病抗体的快速ELISA程序

在常规ELISA基础上建立了快速ELISA程序,优选出试验条件,经70份牛、羊血清试验,结果表明,快速ELISA对琼扩阳性检出的覆盖率为100%,且比琼扩多检出阳性样品12.85%,45分钟内即可出结果,比常规法缩短时间2/3,与常规ELISA敏感性一致。     

甘肃省猪流感(H3N2)抗体的血清学调查研究

用酶联免疫吸附试验(ELISA)对甘肃省13个市州送检的188份健康猪血清和17个猪场患其它病猪血清进行了猪流感(H3N2)血清抗体检测.在11个市州的猪群中检出SIH3N2抗体,检出阳性118份,平均阳性率为27.89%.阳性率最高为66.67%,最低为5.13%.其中健康猪血清检出阳性42份,阳性率为22.34%;患其它病猪血清检出阳性76份,阳性率为32.34%.患其它病猪的阳性率高于健康猪.     

牛传染性鼻气管炎病毒血清抗体检测试验及结果分析

采用SYNBIOTICS公司酶联免疫吸附试验(ELISA)检测试剂盒对来自新疆15个不同地区(包括4个养牛场)共635份牛血清进行了牛传染性鼻气管炎病毒血清抗体检测,共检出阳性血清329份,最高感染率达90%,最低感染率为5%,平均感染率为51.8%,结果显示该病已在全疆普遍存在,感染没有明确的地域分布规律。对其中的106份血清用Institute Pourquier公司ELISA试剂盒重新检测,发现两试剂盒的符合率为90.6%,Institute Pourquier公司ELISA检测试剂盒敏感性稍高。从该106份血清中再次随机抽取其中的35份用病毒中和实验(VN)检测方法进行了检测,检测结果与SYNBIOTICS公司ELISA检测试剂盒相比较,同为阳性样品24份,同为阴性样品7份,两者符合率88.6%;与Institute Pourquier公司ELISA检测试剂盒相比较,同为阳性样品24份,同为阴性样品6份,两者符合率85.7%。试验结果表明,与VN相比,ELISA检测试剂盒具有操作简便,敏感性高等优点。     

青海省西宁地区鸡毒支原体感染的血清学检测

应用酶联免疫吸附试验(ELISA)对西宁部分县鸡血清中的鸡毒支原体抗体(MG-Ab)进行了检测,共检测血清286份,检出阳性样品146份,平均阳性率为51.08%。     

ELISA和LAT检测猪血清弓形虫抗体的比较

应用弓形虫重组蛋白rMIC3为抗原建立的酶联免疫吸附试验(ELISA)和乳胶凝集试验(LAT)2种方法,平行检测来自36个猪场的471份猪血清中的抗弓形虫特异性抗体。结果显示,ELISA和LAT对母猪弓形虫抗体的阳性检出率分别为42.86%(21/49)和44.90%(22/49),2种方法的阳性检出符合率为95.45%(21/22);对育肥猪的阳性检出率分别为42.06%(135/321)和43.61%(140/321),2种方法的阳性检出符合率为93.57%(131/140);对仔猪的阳性检出率分别为29.07%(30/101)和45.54%(46/101),2种方法的阳性检出符合率为63.04%(29/46)。结果表明,ELISA和LAT可用于猪弓形虫病的诊断和血清学调查,LAT更适合于仔猪弓形虫病的检测。     

评价基于致密颗粒蛋白GRA1为抗原检测猫弓形虫感染的血清学诊断方法

为了研究以弓形虫致密颗粒蛋白GRA1为抗原检测猫弓形虫感染的血清学诊断及评价,试验采用标准弓形虫抗体阳性、阴性猫血清建立ELISA方法,最终确定重组GRA1最佳蛋白包被浓度为5μg/m L、血清最佳稀释度为1∶64,用此方法对已通过MAT/IFA法共同确定的185份猫弓形虫抗体血清进行检测并评价。结果表明:应用MAT/IFA法检出阳性血清39份、阴性血清146份,而通过重组GRA1-ELISA法检出阳性血清37份、阴性血清148份,二者共同检出阳性血清33份、阴性血清142份,GRA1假阳性率为10.8%,假阴性率为4.1%。比较重组GRA1-ELISA与MAT/IFA的结果,二者不一致部分无显著性差异(P0.05);一致性部分经Kappa检验(K=0.83),一致率为94.6%。说明以重组GRA1作为包被抗原建立的ELISA方法检测效果没有弓形虫体裂解蛋白TLA好。因此,重组GRA1不是用于检测猫弓形虫感染的流行病学调查的最佳诊断抗原。     

单克隆抗体在动物衣原体病血清诊断上的应用

采用淋巴细胞杂交瘤技术，研制出的抗衣原体单克隆抗体，应用酶联免疫吸附试验（ELISA）方法，对本地区所采得的231份猪血清，128份羊血清，90份牛血清进行检测，结果：猪血清阳性检出率为30．7％，羊为25．8％，牛为32．2％；选猪、羊、牛血清各50份，用已建立的检测衣原体抗体ELISA方法与的间接血凝试验（IHA）进行比较，猪血清ELISA阳性检出率为30％，IHA为26％，ELISA比IHA试验高出4个百分点。牛血清ELISA阳性检出率为32％，IHA为24％，ELISA比IHA试验高出8个百分点。羊血清ELISA阳性检出率为26％，IHA为22％，ELISA比IHA高出4个百分点。     

ELISA和IHA检测弓形虫抗体的比较试验研究

目的:分析ELISA方法和IHA方法检测弓形虫病的可靠性。方法:本文应用酶联免疫吸附试验(ELISA)和间接血凝试验(IHA)两种方法,平行检测来自龙岩市某个猪场的32份猪血清中的抗弓形虫特异性抗体。结果:ELISA和IHA对猪弓形虫抗体阳性检出率分别为62.5%(20/32)、53.13%(17/32),这两种方法的阳性检出符合率较高,为71.88%(23/32)。其中,ELISA方法的敏感性(93.33%)、检测效率(81.25%)以及Youden指数(63.92%)都在IHA方法之上,但ELISA方法的特异性(12/17,70.59%)略低于I-HA方法(13/17,76.47%)。结论:ELISA和IHA两种方法均可用于猪弓形虫病的诊断和血清学调查,但ELISA方法更适用于猪弓形虫病的血清学调查。     

猪源HBV样病毒感染的研究

用检测人血清乙肝标志物的试剂和方法,检测2823份猪血清,检出HBsAg阳性血清56份(56/2823),阳性率为1.98%,不同地区的检出率在1.0%～4.5%之间.对37份HBsAg阳性血清检测了抗—HBS、HBeAg、抗—HBe、抗—HBe.共检出阳性23份(23/37);100份HBsAg阴性猪血清与37份HBsAg阳性猪血清经双育试验检测谷丙转氨酶,有非常显著性差异,血清HBsAg阳性猪的肝脏有中等度到重度的病理组织学变化(11/11);用ELISA法检测HBsAg阳性猪血清中人聚合白蛋白受体(PHSA—R),21份样品中有19份阳性(19/21),而HBsAg阴性猪血清10份未检出阳性;用生物素—亲和素标记的HBV—DNA探针检测HBsAg阳性猪血清.11份样品有41份阳性(4/11);采用从人血清中提纯Dane颗粒的方法,从8份猪血清中都提纯了类似Dane颗粒的病毒粒子(8/8);提纯的病毒粒子和Dane颗粒与羊抗—HBV作免疫电泳,沉淀线基本一致;用2mL含HBV样病毒颗粒的猪血清接种10头仔猪,有3头感染(3/10).传至第3代,10头仔猪4头感染(4/10).实验证实,猪源HBV样病毒粒子是一种新发现的病毒,和HBV相比,抗原有相关性,基因有同源性.     

驻甘肃部队人畜弓形虫病的血清学调查

本调查采用中国农科院兰州兽医研究所提供的间接血凝诊断液及试验疗法,对驻甘肃部队的14个团以上单位共1852份人畜血清进行了弓形虫抗体检测,检出阳性血清164份,阳性检出率平均为8.86％。其中检测人血清511份,检出阳性28份,阳性检出率为5.48％;检测猪血清533份,检出阳性135份,阳性检出率为25,33%;检测兔血清55份,检出阳性1份,阳性检出率为1.82%;检测马(骡)血清280份,牛血清322份,羊血清151份,均未检出阳性。     

口蹄疫病毒A型竞争ELISA抗体检测试剂盒在流行病学调查中的应用

为评价口蹄疫病毒A型竞争ELISA(cELISA)抗体检测试剂盒在流行病学调查中的应用前景,对2017年从福建省三明市采集的336份黄牛、奶牛、羊和猪血清样品,用A型cELISA抗体检测试剂盒进行抗体检测。结果显示,92份黄牛血清、92份羊血清、92份猪血清、60份奶牛血清的A型抗体阳性率分别为13.04%、11.96%、20.65%、86.67%。从上述4种血清中,各挑选10份血清(阴性、阳性各5份)共40份,采用口蹄疫病毒液相阻断ELISA(LPB-ELISA)抗体检测试剂盒进行验证。结果显示:cELISA检测为阳性的20份血清中,用LPB-ELISA检出阳性19份;cELISA检测为阴性的20份血清中,用LPB-ELISA检出阴性17份;两种方法的κ值为0.8,总符合率为90.00%。结果表明,A型cELISA试剂盒与LPB-ELISA试剂盒的符合率和一致性均较高,可用于口蹄疫流行病学调查和血清学监测。     

牦牛病毒性腹泻病PCR诊断方法的建立

采用阻断ELISA方法对来自天峻县的327份牦牛血清进行了牛BVDV特异性抗体的检测,共检出231份血清阳性,血清阳性率为70.64%。其中:在135份野牦牛血清中检出110份阳性血清,阳性率为81.48%;在192份家牦牛血清中检出阳性121份,阳性率为63.02%。从231份ELISA检测阳性血清中随机抽取了20份,采用RT-PCR方法进行检测,结果共检出18份样品为BVDV/MV RT-PCR阳性,阴性血清未扩增出E0基因,RT-PCR方法检测结果与ELISA方法符合率为90%。     

衣原体单克隆抗体在羊血清诊断上的应用

采用淋巴细胞杂交瘤技术，研制出的抗衣原体单克隆抗体，应用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法，对本地区所采用的698份羊血清进行检测，羊血清阳性检出率为22．06％，选择50份羊血清用已建立的检测衣原体抗体ELISA方法与传统的间接血凝试验(IHA)进行比较，其敏感性高。羊血清ELISA阳性检出率为26％，IHA为22％，前者比IHA高出4个百分点。     

非洲猪瘟病毒抗体检测间接ELISA方法的建立

以基因工程表达的非洲猪瘟病毒VP73蛋白作为包被抗原,建立了间接ELISA方法,用以检测猪血清中抗非洲猪瘟VP73蛋白的抗体。该方法对非洲猪瘟标准阳性血清的检测灵敏度可以达到1∶2 560,与同类进口ELISA试剂盒相当。此方法只特异性检出非洲猪瘟阳性血清,而对猪传染性胸膜肺炎等5种猪传染病阳性血清的检测结果均为阴性,表明其具有良好的特异性。批内和批间重复性试验结果发现,检测同一份血清的变异系数小于10%,表明其重复性较好。包被好的酶标板37℃放置5d后,对同一份血清的检测敏感性无明显变化,初步表明其稳定性较好。利用建立的间接ELISA方法和进口ELISA试剂盒分别对150份血清样品进行非洲猪瘟血清抗体检测,结果表明本方法的特异性和敏感性分别为99.1%和94.3%,2种方法检测结果的符合率为98%。以上试验表明,本试验建立的间接ELISA方法具有良好的特异性和敏感性、较好的重复性和稳定性,可以满足临床检测的需求。     

消灭种公羊布鲁氏菌病的报告

本文报告了消灭公羊群(64只)自然感染绵羊布鲁氏菌病的方法。用补体结合(CF)试验对18只有附睾炎的公羊进行了检测,所有的羊出现阳性或可疑。另对20只羊进行了CF试验,对其中14只羊进行了精液培养,并全部分离出绵羊布鲁氏菌。在这20只羊的CF检查中,2只呈阴性结果,而酶联免疫吸附试验(ELISA)诊断和精液培养证实为布病阳性。建议在诊断羊布鲁氏菌病时,除了采用CF试验和体检外,还应使用ELISA诊断。采用综合诊断方法对于提高绵羊布鲁氏菌感染的早期诊断具有重要意义。