致仔猪腹泻大肠杆菌血清型鉴定

为了解云南省部分地区致仔猪腹泻大肠杆菌血清型分布情况,本试验采用常规细菌分离培养法及生化试验鉴定法,得到118株大肠杆菌。分离菌株经O抗原多价血清试验,鉴定出80株阳性菌株分属于多价2、3、5、6、7、8、9、11、12、14、15、16、17。从多价血清中挑选出常见的单因子血清进行定型试验,结果:13株菌株定型,分属8个血清型,即O3、O6、O23、O38、O68、O88、O99、O101;O68血清型占定型菌株的11.54%,O99血清型占定型菌株的19.23%;O23、O68和O99为此次分离菌株的优势血清型。本试验结果为今后云南地区仔猪腹泻病的防控提供有效的数据支持。     

鸡大肠杆菌异型外膜蛋白原生质体融合菌株的构建

以鸡大肠杆菌Ww1株(O78,OMP-3,AmpR,KS)和WD2株(O2,OMP-1,AmpS,KR)作为亲本菌株,采用溶菌酶-EDTA法制备原生质体,以PEG作为助溶剂,进行原生质体融合,得到4株双耐药融合菌株,融合菌株的形态、染色特性和生化特性均符合大肠杆菌的特性,且均能同时表达两个亲本菌株的外膜蛋白(OMP)抗原(OMP-3,OMP-1)和O抗原(O78,O2),表明两个亲本菌株发生了融合和染色体重组。经多次传代证明融合菌株是稳定的。     

南阳市鸡致病性大肠杆菌的分离、鉴定及药敏试验

从南阳地区各养鸡场的发病鸡中分离出大肠杆菌,经常规方法培养、纯化、镜检及生理生化鉴定。分离出29株鸡致病性大肠杆菌。有14株分离株被鉴定出血清型,其中O1为4株,O2为3株,O78为7株,O1,O2和O78血清型占分离株总数的48．3％。未定型15株,用29株分离菌株分别接种供试雏鸡后,发病症状及剖检病变均符合本病特征,其中高致病性菌株有13株,中度致病菌株有9株,低致病性菌株有7株,分别占试验菌株总数的44．8％、31％和24．2％。采用22种药敏纸片对29株分离菌进行药敏试验,结果表明,分离出的大肠杆菌耐药性相当普遍,仅对头孢噻肟、丁胺卡那霉素、壮观霉素及新霉素等药物敏感性较高。     

鸡大肠杆菌异型外膜蛋白原生质体融合菌株的构建

以鸡大肠杆菌Wwl株(O78，OMP-3．Amp^R，K^5)和WD2株(O2，OMP-1，Amp^5．K^R)作为亲本菌株，采用溶菌酶-EDTA法制备原生质体，以PEG作为助溶剂，进行原生质体融合，得到4株双耐药融合菌株，融合菌株的形态、染色特性和生化特性均符合大肠杆菌的特性，且均能同时表达两个亲本菌株的外膜蛋白(OMP)抗原(OMP-3，OMP-1)和O抗原(O78，O2)．表明两个亲本菌株发生了融合和染色体重组。经多次传代证明融合菌株是稳定的。     

山西省致病性猪大肠杆菌分离及生物特性研究

研究从山西省主要养猪区80多个养猪场(户)的病死猪及疑似大肠杆菌病猪粪便、肠道、肛门等部位采集病料接种于营养琼脂平板、麦康凯琼脂平板、伊红美蓝培养基等纯化培养,将疑似菌落革兰氏染色、镜检;对初步分离菌经生化试验、致病性试验、大肠杆菌O抗原血清型鉴定等,对山西省流行的猪大肠杆菌病病原进行生物学特性研究。研究结果表明,病原菌纯化、镜检结果有123株疑似菌株符合猪大肠杆菌形态特征;生化试验中有8株病原菌产生H2S,有5株病原菌VP试验、枸橼酸盐利用试验是阳性,这13株病原菌不符合猪大肠杆菌的生化特性,其余110株病原菌符合大肠杆菌生化特性;致病性研究结果表明有97株病原菌是致病性猪大肠杆菌;大肠杆菌O抗原血清型鉴定结果:94株血清型分属于36个血清型,其中O138、O101、O9、O107、O141有35株,共占所鉴定分离菌株的37.2%,这几种血清型均为山西这80多个猪场目前流行的优势血清型,通过鉴定摸清了流行在山西省猪致病性大肠杆菌血清型特点、优势血清型菌株及分布状况。这一研究结果为山西省制定猪大肠杆菌病防治策略提供了依据。     

海安县鸡大肠杆菌病的流行病学调查

本文对海安县鸡大肠杆菌病的临床流行特点和近年来该病增多的原因进行了调查分析。另外 ,先后从全县 856只病、死鸡分离出 684株大肠杆菌。对其中 1 67株进行血清分型 ,共分出 2 2个血清型。主要血清型是 :O1 81 8株 ,占定型菌株的 1 0 8% ;O781 7株 ,占定型菌株的 1 0 2 % ;O889株 ,占定型菌株的 5 4% ;O2 8株 ,占定型菌株的 4 8% ;O1 、O1 1 均为 7株 ,各占定型菌株的 4 2 %。此外 ,尚有O3、O5、O7、O9、O1 4、O1 7、O2 3、O2 9、O37、O6 0 、O81 、O87、O1 0 3、O1 1 9、O1 38、O1 54等不常见血清型存在 ,药敏试验结果表明所分离的大肠杆菌对头孢唑啉、阿米卡星、氨苄西林等药物敏感。     

免疫磁珠法分离大肠杆菌O_(157):H_7及毒力基因的PCR检测

为了了解新疆不同牛场中大肠杆菌O157:H7的流行情况,对新疆乌鲁木齐、伊犁地区、塔城地区多个牛场采集的粪样及水样样本的检测,样品经EC肉汤增菌、免疫磁珠富集后,用SMAC平板和MUG培养基进行初步筛选,再用rfb E和fli C基因对筛选后的疑似大肠杆菌O157:H7菌株做PCR检测,同时结合生化试验的方法进行符合性检验。结果从新疆3个地区不同牛场的208份样品分离得到5株肠出血性大肠杆菌O157:H7,检出率为2.4%。其中粪样检出5株,检出率为2.4%;水样未检出。生化试验结果表明,5株分离出的大肠杆菌O157:H7菌株与国标规定的O157:H7特性相同。表明,部分被检牛场存在大肠杆菌O157:H7威胁,应该引起重视。     

青海省部分仔猪水肿病病原的血清型鉴定

就青海省仔猪水肿病多发区分离鉴定的45株溶血性大肠杆菌进行了血清学定型，结果表明：已鉴定出血清型的菌株33株，占73．3％，12株未定出血清型，占26．7％；其中O8 10株(22．2％)，O25 1株(2．2％)，O101 1株(2．2％)，O138 3株(6．7％)，O139 7株(15．5％)，O141 5株(11．1％)，O149 6株(13．3％)。O抗原优势菌株分别为：O8、O139、O141、O139，占全部菌数的62．2％。     

仔猪粪便中大肠杆菌O_(157):H_7的分离鉴定及敏感药物筛选

为了解吉林省猪大肠杆菌O_(157):H_7的携带情况、致病性及筛选出敏感药物,试验收集吉林省部分规模化养猪场猪的新鲜粪便180份,采用m EC肉汤增菌后涂布于大肠杆菌O_(157):H_7显色培养基中对可疑菌落纯培养,生化鉴定纯培养菌株,并用普通PCR法检测编码该菌O抗原的rfb E基因,其中阳性者采用荧光定量PCR方法检测编码该菌H抗原的fli C基因,同时筛选敏感药物。结果表明:共有3株菌被鉴定为O_(157):H_7出血性大肠杆菌,检出率为1.67%(3/180),均来源于腹泻仔猪粪便;生化鉴定结果符合大肠杆菌O_(157):H_7特征;普通PCR法和荧光定量PCR法均能检出目的片段;3株分离菌对磷霉素和丁胺卡那霉素的敏感性高,对红霉素、青霉素G、氨苄西林、利福平的耐药性高。根据部分猪场大肠杆菌O_(157):H_7的流行情况可初步掌握吉林省猪源大肠杆菌O_(157):H_7的流行情况。     

六安市鸡大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验

通过对六安市几个鸡场的病死鸡分离到的6株细菌进行了培养特性、生化试验及血清型试验,确定为大肠杆菌.6株细菌用O抗原单因子血清鉴定出一种血清型O111,大部分未定型,这说明六安地区大肠杆菌的复杂性,有待进一步鉴定.用临床上常用的14种抗菌素纸片对分离菌株进行药敏试验,试验证明所分离的大肠杆菌对呋喃妥因高度敏感,对利福平、庆大霉素中度敏感,对先锋霉素、氨苄青霉素等不敏感,不同菌株均有不同的抗药性.     

贵州羔羊致病性大肠杆菌血清型和热稳定性肠毒素的研究

从腹泻羔羊中分离到大肠杆菌80株,对80株菌株做血清型鉴定,55株为埃希氏大肠杆菌,分属为0119、O24、O8、O78、O101、O96种血清型,其中O119、024为主要“0”类型。每相血清型筛选出的CH9612、SC9938、CH9817、LL9934、GL988株菌6株。用乳鼠胃内投服试验,测定出6株菌具有产生热稳定性肠毒素的特性（ST）。     

奶牛粪样中致病性大肠埃希菌的分离与鉴定

大肠埃希菌血清型众多,一些具有特殊血清型的大肠埃希菌对人和动物有致病性。本试验从包头市侯家营奶牛场77头外表健康成年泌乳荷斯坦奶牛采集新鲜粪样,进行细菌分离培养,共分离到疑似大肠埃希菌69株,经过形态观察、生化鉴定、动物致病性试验和血清型鉴定,其中12株为致病性大肠埃希菌,均为强毒株,占分离菌数的17.4%,另57株为非致病性大肠埃希菌,占分离菌数的82.6%。同时对12株致病性大肠埃希菌进行了"O"血清型鉴定,分属7种血清型O78、O6、O9、O98、O1、O8、O149,分别占定型菌株的25.0%(3/12)、8.3%(1/12)、16.7%(2/12)、8.3%(1/12)、8.3%(1/12)、8.3%(1/12)、25.0%(3/12)。     

2011年黄三角地区鸭源大肠杆菌的分离鉴定

本试验从黄河三角洲区域2011年规模化肉鸭商品鸭场送检的病料中,通过细菌分离、培养特性观察、生化试验和致病性试验,分离到54株鸭源高致病性大肠杆菌。通过药敏试验,发现分离菌对多种抗生素存在多重耐药,其中对链霉素、氨苄西林和克林霉素3种药物的耐药性达到90%以上。敏感性较高的药物有阿米卡星、头孢噻肟、头孢曲松等药物。对分离菌进行了O抗原血清型分型,初步鉴定有12种血清型存在,其中O78、O35、O2、O18分别有12株、8株、6株和5株,为该区域优势血清型。本试验为了解和掌握该区域鸭源大肠杆菌病的流行情况,进一步研究和防控该病提供了参考依据。     

猪源大肠杆菌耐药性与Ⅰ型整合子关系研究

目的为了解猪源大肠杆菌中Ⅰ型整合子的流行情况,探讨Ⅰ型整合子与大肠杆菌耐药表型的相关性。方法采用微量肉汤稀释法测定119株猪源大肠杆菌对8类14种抗菌药物的耐药性,并采用PCR法检测猪源大肠杆菌Ⅰ型整合酶基因(int I1)并扩增其可变区,对PCR产物进行酶切分析,测序分析整合子可变区携带的耐药基因盒。结果 119株大肠杆菌耐药现象十分严重,对四环素、磺胺异恶唑、新诺明全部耐药,所有菌株均呈多重耐药。119株猪源大肠杆菌中有92株含Ⅰ型整合子,检出率77.31%。扩增出7类大小不同的基因盒插入区片段,范围为1008bp～3149bp。7类Ⅰ型整合子在119株猪源大肠杆菌中存在13种流行组合。78.15%大肠杆菌菌株的Ⅰ型整合子携带2种或2种以上的基因盒,其中以携带编码氨基糖苷类药物耐药基因(aadA1、aadA2、aadA5、aadA22、aadB)最多,其次为编码磺胺类药物耐药基因(dfrA1、dfrA12、dfrA17、dfrA27),此外还携带编码利福平、林可霉素和氯霉素的基因lnuF、cmlA6、aar-3、orf。结论Ⅰ型整合子普遍存在于大肠杆菌中,且呈流行上升趋势;Ⅰ型整合子参与耐药及多重耐药,但单株细菌携带的耐药基因盒与其耐药表型无对应关系。     

Prevalence and characteristics of necrotoxigenic Escherichia coli (NTEC) strains isolated from diarrhoeic dairy calves.

Fecal samples from 246, 1-90-days old diarrhoeic dairy calves in 72 herds were screened for the presence of cytotoxic necrotizing factors (CNF)-producing Escherichia coli (NTEC). NTEC were detected by tissue culture assays and PCR in 39 (15.8%) of the diarrheic calves, and the majority of these animals (34 of 39, ca. 87.2%) were infected by NTEC producing CNF2. Calves were grouped according to their age (1-7 days, 8-14 days, 15-21 days, 22-30 days and 31-90 days) and analyses of prevalence were done by the Mantel-Haenzsel chi2-test for trend. A significant age-associated increase in the prevalence of NTEC producing CNF2 (p<0.0001) was found. Eighty-one (8.4%) of the 958 E. coli isolates from the 246 diarrheic calves were positive for CNF in the tissue culture assays. These strains were analyzed by PCR and this technique showed that three (3.7%) strains were CNF1-positive and 75 (92.6%) were CNF2-positive. Moreover, three of the strains positive in the tissue culture assays were negative by PCR. These strains were subsequently assayed in several biological tests (rabbit skin test, mouse intraperitoneal test and mouse footpad test) which showed that they were really NTEC, probably producing CNF2, but with some different properties to classical strains producing CNF2. NTEC strains producing CNF2 belonged to different serogroups (O2, O7, O9, O14, O15, O41, O43, O45, O55, O76, O86, O88, O109, O115, O123, O128, O153 and O159) than strains producing CNF1 (O11 and O32) or PCR-negative strains (O111). Moreover, a strong association between CNF2 and F17 fimbriae was found (78.6% of CNF2-positive strains were F17-positive, whereas only 22.9% of CNF2-negative strains were F17-positive).     

Study of porcine postweaning diarrhea involving K88(-) hemolytic Escherichia coli

The onset of fecal shedding, serogroup involvement, and association of hemolytic Escherichia coli with the postweaning diarrhea syndrome were studied in swine. The only E coli O antigen, detected by slide agglutination with the antisera used, was O157; K antigens were not detected. The ligated intestinal loop test (LILT) was used for enterotoxigenicity testing. All O157 serogroup isolates (n = 9) were hemolytic, and 89% (8 of 9) were LILT positive. Of all hemolytic isolates tested, 59% (10 of 17) were LILT positive. Twenty-seven nonhemolytic isolates were tested for enterotoxigenicity; of these, 45% (12) were LILT positive. The onset of postweaning diarrhea coincided with the modal onset of hemolytic E coli shedding at postweaning day 7. At postweaning day 7, hemolytic E coli shedding was concurrently associated with diarrhea (P less than 0.0005), whereas later during the postweaning period, this was not the situation.     

用质粒DNA指纹图谱法分析猪水肿病大肠杆菌的流行病学特征

从广西各地病死猪器官、组织中分离到17株细菌,经细菌形态、培养特性及生化反应鉴定为大肠杆菌。作本动物回归试验、小白鼠致病性试验和溶血试验结果表明,全部为致病性大肠杆菌。血清定型鉴定结果发现,菌株血清型分布不规律。17株致病性大肠杆菌的质粒指纹图谱显示:来源于不同猪群的菌株GP20-3和GP25-1以及GP18-9和GP8-3分别具有相同的质粒图谱,说明发病猪群传染源的首发菌相同。所有菌株都含有1条大小相同的质粒带,广西流行的猪水肿病主要是由在遗传学上具有高度同源相关性的大肠杆菌的广泛流行传播所引起。菌株GP18-9和GP8-3的质粒指纹图谱相同,但它们的血清型却不一致的现象,可作为自然条件下,同一质粒在不同血清型大肠杆菌中扩散转化的一个生物学依据。     

病死雏鸡的病原分离鉴定

从送检的３１只病死雏鸡中分离出３０株致病菌，其中沙门氏杆菌２７株，分离率９０％，大肠杆菌６株，分离率２０％。对其中５株沙门氏杆菌和４株大肠杆菌进行了系统生化鉴定及血清型鉴定，证实５株沙门氏菌中鸡白痢沙门氏杆菌占６０％（３／５），鸡伤寒沙门氏杆菌占４０％（２／５），４株大肠杆菌中Ｏ２２株，Ｏ６１株，Ｏ１１５１株。对分离菌进行了雏鸡致病力及抗菌药物敏感性试验，提出了相应的预防对策     

奶牛粪中致病性大肠杆菌的分离鉴定及生物学特性的研究

对呼和浩特市地区不同奶牛场共20头健康荷斯坦奶牛的鲜粪便进行了病原性大肠杆菌的分离提取,共分离到大肠杆菌40株,经鉴定病原性大肠杆菌6株,均为强毒株,占分离菌数的15.0%,而34株为非致病性大肠杆菌,占分离菌数的85.0%。同时对6株病原性大肠杆菌进行了病原性特性的研究,发现病原性菌的生化特性基本一致,与资料报道相符。对6株病原性大肠杆菌进行了抗"O"血清鉴定,除1株有自凝现象,其余5株分属O1、O2、O83个血清型,分别占定型菌株的20%、40%和40%。