DMEM培养结肠小袋虫的正交试验

利用L9(34)正交试验设计,研究了淀粉量、小牛血清比例和培养基初始pH 3个因素对结肠小袋虫在DMEM培养基中所获得的最高种群密度的影响。方差分析表明,初始pH影响最大,其次为淀粉量,血清比例影响最小。最佳培养基组成为淀粉40 mg/安瓿、血清150 mL/L(DMEM培养液2.55 mL+0.45 mL小牛血清),最适宜的DMEM培养基初始pH为7.0。     

RPMI 1640培养基体外培养结肠小袋纤毛虫的研究

试验旨在建立结肠小袋纤毛虫RPMI 1640培养方法,为进一步研究其生活史及致病机制奠定基础。研究不同淀粉含量、不同血清含量、不同初始pH及不同接种量下RPMI 1640培养结肠小袋纤毛虫的培养效果。结果发现,用RPMI 1640培养结肠小袋纤毛虫,最适宜的淀粉含量为30 mg/安瓿,血清含量为20%,pH为7.0;种群自然增长率和种群所达到的最高种群密度随接种量的不同而明显改变。RPMI 1640培养基可用于结肠小袋纤毛虫的体外培养。     

RSS培养基体外培养结肠小袋纤毛虫的效果观察

目的利用实验生态学的方法,研究了结肠小袋纤毛虫在RSS培养基中种群生长情况。方法在不同米粉含量,不同血清含量,不同PH值的RSS培养基中接种相同量的结肠小袋纤毛虫滋养体,以及在同样的RSS培养基中接种不同量的结肠小袋纤毛虫,进行培养观察,计算其种群自然增长率及世代时间。结果米粉含量为20mg组的种群自然增长率最高;血清含量对种群自然,增长率影响不大,但在最高峰时,20％～25％血清组虫体密度最大;培养基在PH值为7．0和7．5条件下,虫体密度均在d4达到高峰,之后下降。结论培养基中适宜的米粉含量为20-30mg／安瓿,血清含量为20％～25％,最适宜的pH值范围为7．0～7．5。     

猪和兔附红细胞体的体外培养

用RPMI1640和小牛血清按不同比例混合作为体外培养猪和兔附红细胞体的基础培养基，同时以去掉红细胞上自然感染的附红细胞体后的红细胞泥作为培养附红细胞体的寄生载体，进行猪和兔附红细胞体的体外培养。培养结果表明，以RPMI1640与小牛血清按6：4比例混合，同时选用兔红细胞泥作为载体的培养效果最佳，接种感染了附红细胞体的猪、兔阳性红细胞后24h生长达到高峰，感染率分别为40．2％和31．0％，而采用猪红细胞泥作为培养载体时红细胞感染率无明显升高。     

青海湖裸鲤体外心肌细胞原代与传代培养的研究

为了弥补青海湖裸鲤心肌组织细胞离体培养研究的空白,采用组织块移植培养技术, 分别用DMEM培养基和RPMI 1640培养基对青海湖裸鲤心肌组织进行原代培养.培养48 h可见组织块周围有细胞迁出,并形成生长晕;培养1周可见有单层细胞长成.原代培养的单层细胞用胰蛋白酶-EDTA消化后传代培养至第4代.初步确立青海湖裸鲤心肌细胞培养条件为:培养基RPMI 1640,培养温度27 ℃, pH值7.0～7.5,原代培养血清浓度为20%,传代培养血清浓度为10%,无需通入CO2.     

不同型牛血清对家兔原核胚序贯培养体外发育的影响

采用不同型血清分别添加到TCM199和mTCM199培养液、RPMI1640和mRPMI1640培养液中，对兔原核期受精卵进行了体外序贯培养，并对各组间不同时期发育率进行了分析比较。结果显示：体外培养至第72h时，3个体外序贯培养体系间8-细胞胚率、桑椹胚率差异不显著（P〉0．05），当体外培养至囊胚时，100mL／L NBS＋TCM199（mTCM199）培养体系、100mL／L NBS＋RPMI1640（mRPMI1640）培养体系的囊胚率均显著低于100mL／L FBS＋RPMI1640（mRPMI1640）培养体系的囊胚率（三组的囊胚率依次是27．3％、35．9%、97．2%，P〈0．01）。但前两组之间差异不显著。结果表明，不同型血清对兔早期胚胎体外正常发育具有很大影响，序贯培养中添加国产NBS的培养液的培养效果明显低于添加进口FBS的培养液的培养效果。     

细粒棘球绦虫——原头蚴在两种细胞培养液中体外培养的初步观察

通过原头蚴在两种细胞培养液中（RPMI-1640和MEM）培养,观察其存活、生长及发育情况,从而为研究寄生虫发育提供最基本的数据资料。方法：细粒棘球绦虫幼虫——原头蚴培养的细胞培养基（RPMI-1640和MEM）分为4组：Ⅰ组为纯RPMI-1640培养液;Ⅱ组为含10％的小牛血清的1640培养液;Ⅲ组为纯MEM培养液;Ⅳ组为含10％的小牛血清的MEM培养液;并进行对比观察。结果：培养15d的原头蚴的成活率分别为：Ⅰ组69．87％、Ⅱ组80．35％、Ⅲ组50．25％、Ⅳ组60．32％;成囊率分别为：Ⅰ组80．58％、Ⅱ组90．25％、Ⅲ组35．65％、Ⅳ组45．89％;头节外翻率分别为：Ⅰ组95．50％、Ⅱ组98．65％、Ⅲ组60．52％、Ⅳ组70．98％。结论：大多数虫体在早期向囊发育,一部分虫体头节外翻,并伴有规律的伸缩运动,但随时间的延长虫体运动减缓,又向囊蚴发育。通过对细粒棘球绦虫的原头蚴的体外培养,初步表明含有10％小牛血清的细胞培养基RPMI-1640较适合原头蚴的生长发育,在普通培养箱中培养,最适温度在37—40℃,培养液pH=7．2,初步建立了原头蚴体外培养的方法。     

绿豆酸浆的自然发酵及高淀粉结合性乳酸菌培养条件的优化

试验利用实验室提取的一株高淀粉结合性乳酸菌,对绿豆汁进行自然发酵,确定绿豆酸浆的自然发酵工艺。并采用绿豆TJA培养基培养该菌种,以OD值作为评价指标,通过不同的培养时间、温度、培养基初始pH、碳酸钙添加量及转速对其生长的影响,对培养条件进行优化。结果表明,在培养时间为24 h、培养温度为30℃、培养基初始pH 6.5及不添加碳酸钙的静置状态下培养该菌的OD值最高。最佳单因素条件验证培养后OD值达到11.21。     

牛附红细胞体体外培养试验

用RPMI－1640、M－199、D－MEM3种培养液作为基础培养基，再分别按体积分数加入40％的犊牛血清，采用普通恒温培养箱（37℃）进行牛附红细胞体体外培养。结果表明，牛附红细胞体在RPMI－1640培养基中，每12h更换1次培养液，并补充适量正常红细胞，获得了高达99％的感染率；连续传代培养可达44代以上。     

不同血清浓度对小鼠肺细胞原代培养的影响

为了比较不同血清浓度的培养基对小鼠肺细胞原代培养的影响,在常规RPMI 1640培养基的基础上添加不同浓度的新生牛血清(5%、10%、20%、40%),每隔1 d在倒置显微镜下观察培养细胞的形态并用台盼蓝染色法统计细胞数目,绘制生长曲线。结果表明:4个血清浓度组中均有原代肺细胞生长增殖,血清浓度为10%的培养液培养的细胞生长状况最好,细胞形态完整清晰,数量较多,更适合小鼠的肺细胞生长。说明10%血清浓度的培养液最适合小鼠肺细胞的原代培养。     

牦牛胎儿成纤维细胞的分离培养

采用30d胚龄左右的牦牛胚胎，用2种不同的消化液消化后，将所得的牦牛胎儿成纤维细胞（yakembryonicfibroblasts，YEF）培养于不同血清含量的RPM11640培养液中，并接种于2种不同材质的培养瓶表面，对YEF的分离方法、培养所需胎牛血清（FBS）添加量和不同基质表面对YEF生长的影响进行了研究。结果表明，含150mL／LFBS的RPMI1640培养基最适合YEF生长，可传代27次以上；经用RPMI1640和D-Hank’S液配制的2．5g／L胰蛋白酶消化，所得的YEF的细胞活率差异不显著（P〉0．05），其原代细胞在含100mL／L胎牛血清的RPMI1640培养液中的贴壁率差异极显著（P〈0．01）；不同生长基质对YEF的形态没有显著影响。     

培养基对MDCK细胞贴壁率的影响

为确定培养基种类对犬肾细胞(MDCK)贴壁率的影响,用DMEM、MEM、M199和RPMI1640四种培养基加10%新生牛血清后分别以10个/cm2的密度接种培养MDCK细胞,培养14 d计数每种培养基培养后形成的细胞集落数,并计算贴壁率。结果表明,四种培养基对MDCK细胞均能形成明显的细胞集落,贴壁率分别为78.56%、60.23%、41.13%和39.61%,以DMEM培养基培养MDCK的贴壁率最高。     

益生菌蜡状芽孢杆菌发酵条件及培养基的优化

通过单因子试验探讨蜡状芽孢杆菌的摇瓶发酵条件(初始pH、培养温度、转速和接种量等)对生长量的影响。确定最佳培养条件为初始pH7.2,培养温度25℃,转速250r/min,接种量7%。通过单因素和正交试验确定蜡样芽孢杆菌发酵培养基的最佳配比为(W/V)可溶性淀粉3.0%、豆饼粉2.0%、磷酸氢二钾0.3%、MgSO4.7H2O0.02%和CaCl20.01%。筛选出的优化培养基活菌数为36.5×108CFU/mL。     

枯草芽孢杆菌BHI344培养条件的优化

以牛肉膏蛋白胨培养基为初始培养基,探讨了不同培养时间、初始pH值、温度、接种量、碳源、氮源、无机盐源对枯草芽孢杆菌BHI344生长的影响,采用正交试验法优化了培养基的组成。结果表明:菌株BHI344产最大活菌数的培养条件为初始pH值7.6、接种量5%(V/V)、培养温度35℃、培养时间16h、牛肉膏2.0%(W/V)、葡萄糖1.5%(W/V)、氯化钙0.3%(W/V);以此条件培养,BHI344的活菌数能达到2.62×109CFU/mL。     

蟹源地衣芽孢杆菌培养条件的优化

以牛肉膏蛋白胨培养基为初始培养基,探讨了不同培养时间、初始pH值、温度、盐度(NaCl浓度)和转速对中华绒螯蟹源地衣芽孢杆菌ESB3生长的影响。结果表明:菌株ESB3产最大活菌数的培养条件为培养时间20h,初始pH为7.8,温度为30℃左右,盐度为1.5%(m/V),转速为190r/min。采用单因子试验和正交试验优化了种子培养基的组成,结果表明,最佳种子培养基:可溶性淀粉(2%)(m/V)、胰蛋白胨(2%)(m/V)、K2HPO4(0.3%)(m/V),此条件下菌株ESB3活菌数达11.09×108CFU/mL。     

增殖纳豆芽孢杆菌的豆渣培养基的优化

以豆渣为基质增殖纳豆芽孢杆菌,考察了豆渣含量、NaCl含量、初始pH值和碳源等对纳豆芽孢杆菌生长的影响,采用正交实验设计优化了培养基组成。结果表明:发酵培养基的最佳组成(W/V)为12.5%豆渣、NaCl0.35%和麸皮0.3%,初始pH值6.0;用此培养基发酵,发酵液活菌数达到12.5×108CFU/mL。     

改进型RSS培养基体外培养结肠小袋纤毛虫的效果研究

利用实验生态学的方法,研究了结肠小袋纤毛虫在改进型RSS培养基中种群增长情况,结果发现,培养基中适宜的淀粉含量为20～30mg/安瓿,血清含量为20%～25%,适宜的pH值范围为7.0～7.5。     

S1640细胞培养基培养效果观察

用从废弃猪肉里提取的复合氨基酸配制的S1640细胞培养基,进行了淋巴细胞和组织培养,并与从国外进口的RPMI1640和国产1640细胞培养基作了比较.细胞遗传学指标检测的结果表明,S1640和日本、美国RPMI1640细胞培养基的细胞培养结果基本一样,而与国产干粉1640存在显著性差异,比国产干粉1640的效果好.     

黑曲霉降解水解单宁培养条件的研究

本实验研究了培养时间、温度、培养液初始pH、装液量、单宁浓度等条件对菌株降解单宁的影响。结果表明,黑曲霉降解水解单宁的适宜降解条件为28～30℃、pH 7.0、250 mL三角瓶中装入50～75 mL培养液,180 r/min连续培养3 d。随着单宁浓度的提高,降解率逐步降低。     

沼泽红假单胞菌发酵提高黄芪多糖含量的条件优化

利用沼泽红假单胞菌发酵黄芪,研究发酵对黄芪多糖含量的影响。在单因素试验的基础上,以发酵时间(A)、菌种接种量(B)、发酵温度(C)和初始培养基pH值(D)为4个因素,每个因素设3水平,采用L₉(3^₄)正交表,以黄芪多糖含量为指标进行正交试验优化发酵条件。依据F值水平将各因子对黄芪多糖含量的影响按主次顺序排列为：发酵时间>发酵温度>菌种接种量>初始培养基pH值;最佳发酵条件为A3B3C3D1,即在初始培养基pH为6.2,菌种接种量10%和发酵温度40℃的条件下发酵时间6d,黄芪多糖的含量可高达111.40μg/mL,与对照组相比含量提高了51.56%。研究结果表明,利用沼泽红假单胞菌发酵黄芪提高了黄芪多糖的含量,这为提高黄芪资源的利用率提供参考。