GM-CSF与生长抑素融合表达质粒对小鼠生长抑素抗体及IgG亚型的影响

将70只小鼠,随机分为7组,每组10只,雌雄各半。第1组为对照组,第2～4组分别肌肉注射pcS/2SS、pGM-CSF/SS和pGM-CSF加pcS/2SSDNA疫苗;第5～7组分别口服以减毒沙门氏菌为载体的pcS/2SS、pGM-CSF/SS和pGM-CSF加pcS/2SSDNA疫苗。结果表明：肌肉注射和口服pGM-CSF/SS和pGM-CSF加pcS/2SSDNA免疫小鼠均能有效激发免疫系统产生较强的免疫应答,与对照组相比,生长抑素抗体P/N值都有提高,且随着免疫时间的延长,呈现不断增高的趋势;同种疫苗以肌肉注射或口服途径免疫小鼠,血浆生长抑素抗体P/N值变化不显著;阳性鼠的比例以肌注pGM-CSF/SS为最高,达60%,pcS/2SS肌注组仅30%,其他各组分别为40%～60%,对照组没有出现阳性鼠;试验各组IgG1抗体的免疫反应高于IgG2a抗体,且IgG1的免疫反应,pcS/2SS和pGM-CSF/SS组高于pGM-CSF加pcS/2SS组;IgG2a的免疫反应,pGM-CSF/SS组高于pcS/2SS和pGM-CSF加pcS/2SS组。口服免疫组的IgG1和IgG2a免疫反应强于肌肉注射免疫组。说明基因佐剂GM-CSF可增强生长抑素基因疫苗的免疫反应,口服免疫pGM-CSF/SS、pGM-CSF加pcS/2SS可同时激发Th1型和Th2型免疫应答,GM-CSF和SS的融合表达质粒的免疫反应优于pGM-CSF和pcS/2SS的共免疫。     

携带猪传染性胃肠炎病毒S/N融合双基因的减毒沙门氏菌的构建与鉴定

旨在构建携带猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S/N融合双基因的减毒沙门氏菌,并鉴定该疫苗菌株的生物学特性,为开展TGEV口服免疫研究奠定材料基础。采用PCR方法从克隆质粒19T-S和19T-N中分别扩增了TGEV的S基因(含主要抗原位点,2.1kb)和N基因(1.2kb),将S基因和N基因插入pVAX1载体,构建携带S/N融合双基因的真核表达质粒pVAX-S/N。将pVAX-S/N电转化减毒沙门氏菌SL7207,筛选获得重组菌株SL7207(pVAX-S/N),并对重组菌株SL7207(pVAX-S/N)的体外稳定性、目的基因在体内的转录、口服接种小鼠的安全性及在体内稳定性等特性进行了鉴定。结果表明,真核质粒pVAX-S/N构建成功,该质粒转染COS7中能表达2个目的蛋白,重组菌SL7207(pVAX-S/N)在Kan+抗性下体外培养稳定性好,口服接种小鼠3d可从回肠组织检测到目的基因的转录,以0.5×109、1×109和2×109 CFU口服对小鼠均具有安全性,重组菌在接种小鼠的肝、脾于4周左右逐渐被机体清除。结果表明成功构建TGEVS/N双基因疫苗SL7207(pVAX-S/N),该疫苗具有良好的稳定性与安全性等特点,为开展TGEV口服免疫研究奠定了基础。     

携带新城疫病毒F基因DNA疫苗的减毒鼠伤寒沙门氏菌的构建及其免疫原性

根据GenBank中发表的新城疫病毒(NDV)融合蛋白(F)基因序列,设计1对引物,通过RT-PCR扩增出鹅源NDV分离株JS5F基因(约1700bp),测序确认后,将其克隆入真核表达载体pVAX1,获得重组真核表达质粒pVAX1-F。pVAX1-F经脂质体转染COS-7细胞,间接免疫荧光试验检测出F基因在COS-7细胞中的表达产物。将pVAX1-F转化减毒鼠伤寒沙门氏菌SL7207,构建成功携带DNA疫苗的重组沙门氏菌SL7207(pVAX1-F)。重组菌以109CFU/只的剂量2次免疫BALB/c小鼠,免疫小鼠可以检测到特异性针对NDVF蛋白的血清抗体和小肠粘膜抗体应答,SL7207(pVAX1-F)免疫组抗体水平显著高于SL7207(pVAX1)组(P<0.05)。将SL7207(pVAX1-F)以109CFU/只剂量口服免疫1日龄雏鸡,免疫保护试验结果显示,SL7207(pVAX1-F)免疫组对鸡具有良好的保护率(77.27%),与空白对照组和SL7207(pVAX1)空载体组之间存在显著性差异(P<0.05)。结果表明,该运送DNA疫苗的减毒沙门氏菌系统在体内能成功释放所携带的质粒,并能刺激机体产生免疫应答,可对NDV强毒攻击提供良好的免疫保护作用,提示该疫苗候选株对新城疫的控制有重要应用前景。     

以减毒沙门氏菌为载体的GM-CSF与生长抑素融合表达质粒对小鼠淋巴细胞增殖和GH及IGF-Ⅰ分泌的影响

40只22日龄小鼠，雌雄各半，平均分为4组。其中第1组为对照组，第2～4组分别经口给予以减毒沙门氏菌为载体的pcS／2SS、pGM—CSF／SS和pGM—CSF＋pcS／2SS DNA疫苗，剂量10^9CFU／只，2周后以相同剂量加强免疫一次，分析不同DNA疫苗对小鼠淋巴细胞增殖和GH、IGF-Ⅰ分泌的影响。结果表明GM—CSF可增强免疫鼠脾淋巴细胞对特异性抗原刺激的增殖能力，以pGM—CSF／SS免疫组最强；DNA疫苗免疫组的GH和IGF-Ⅰ分泌水平都高于对照组。这些结果证明，GM—CSF对生长抑素DNA疫苗有一定的免疫增强作用，以减毒沙门氏菌为载体介导DNA疫苗通过口服途径免疫动物是一种较好的免疫方式。pGM—CSF／SS的免疫效果优于pGM—CSF＋pcS／2SS。     

携带兔斯氏艾美耳球虫MIC-5基因减毒鼠伤寒沙门菌活疫苗的安全性、稳定性与免疫原性

对携带兔斯氏艾美耳球虫微线蛋白-5基因(MIC-5)真核表达质粒asd-pBMIC-5-IL-15的减毒鼠伤寒沙门菌X4550(X4550/asd-pBMIC-5-IL-15)进行了安全性、稳定性与免疫原性试验.结果显示,重组菌在109CFU剂量以下对家兔安全;连续培养30代重组菌,重组表达质粒可稳定存在于X4550内,具有良好的遗传稳定性;用重组菌2次免疫动物后,既能诱导机体产生抗兔斯氏艾美耳球虫抗体,也能显著增强淋巴细胞增殖水平,抗球虫指数为164.4.试验表明,减毒沙门菌介导的兔球虫调节型DNA疫苗具有良好的安全性、稳定性和免疫原性.     

山羊痘重组沙门菌S7207/pVAX1-P32疫苗株的安全性及稳定性研究

对山羊痘重组沙门菌S7207/pVAX1-P32疫苗株的安全性、稳定性及S7207/pVAX1-P32在动物体内散布规律进行测定。选择60只小鼠,随机分为4组,1组为生理盐水对照组,2组～4组为试验组,用上述沙门菌株S7207以108、109、1010cfu的剂量口服免疫小鼠,2周后相同剂量加强免疫,通过在不同时间段称量小鼠体重显示,试验组小鼠生长情况与对照组无明显差异,不同组别小鼠大体及内脏器官也未发生病变,说明S7207/pVAX1-P32安全性良好;通过PCR方法检测P32基因在体内各组织分布情况,在7d后体内各组织中都检测出目的基因,说明DNA在小鼠体内广泛分布。体外传代含pVAX1-P32和不含pVAX1-P32菌株,含质粒菌株经60代传代后含重组质粒菌的比例在50%以上,传代至120代时仍在10%以上,而不含质粒菌株明显低于含质粒菌株,结果证明含质粒菌株稳定性较好。研究结果提示,利用减毒沙门菌为载体传递S7207/pVAX1-P32疫苗具有良好的安全性和稳定性,其质粒在小鼠体内分布广泛,对未来口服疫苗的使用提供了参考依据。     

减毒沙门氏菌为载体的草鱼口服生长抑素DNA疫苗的构建及其稳定性

将生长抑素(SS)和乙肝表面抗原基因(HBsAg)融合后，插入真核表达载体pcDNA3，构建成pcDNA3-SS，再转化减毒沙门氏菌(S．typhimurium,dam^-和phop^-)，构建了以减毒沙门氏菌为载体的生长抑素口服DNA疫苗ZJ111／pcDNA3-SS，并通过体外传代、灌服草鱼检验了ZJ111／pcDNA3-SS的侵袭力及体外和侵入草鱼体内过程中的德定性。对草鱼肝脏和脾脏分离菌的生化特性检验和特异性PCR鉴定表明，ZJ111／pcDNA3-SS能很好地侵入草鱼体内；对在Amp^ 、Amp^-平板上传5、10代和灌服7d后草鱼肝、脾脏分离的减毒菌抽提重组质粒进行PCR和酶切鉴定表明．减毒菌中的重组质粒在体外和侵入草鱼体内过程中具有较好的稳定性。     

携带猪乙型脑炎DNA疫苗减毒沙门菌的构建及其免疫原性

将乙型脑炎病毒E蛋白主要抗原片段基因串联,构建真核表达载体pCI-EAB.将重组质粒pCI-EAB转染Vero细胞,表达产物通过RT-PCR和间接免疫荧光试验可检测出目的基因的转录与表达.质粒pCI-EAB电转化入减毒猪霍乱沙门菌,观察重组菌的安全性、体内外的稳定性与免疫原性.动物试验表明,重组菌是相对安全和稳定的;重组菌S.C500/pCI-EAB体外培养时,D600值在0.8左右质粒是比较稳定的;以1×108CFU剂量的重组菌S.C500/pCI-EAB口服免疫小鼠,在二免后1周和三免后1周,重组菌抗体水平与S.C500/pCI-neo空载体组差异显著(P＜0.01);脾脏淋巴细胞增殖情况显示,重组菌对ConA有显著的反应性,且与对照组差异明显,同时CD3+、CD4+和CD8+T细胞的数量也显著高于对照组(P＜0.01).上述结果初步表明,以减毒沙门菌为载体的猪乙型脑炎DNA疫苗具有良好的安全性、稳定性和免疫原性,为猪乙型脑炎口服活菌疫苗的研制奠定了基础.     

双表达去势DNA疫苗的构建及其稳定性研究

试验旨在构建一种更安全有效的新型免疫去势DNA疫苗,通过选取下丘脑-垂体-性腺轴（hypot halamic-pituitary-gonadal axis,HPG）的上游调控基因吻素1（KISS1）和促性腺激素释放激素（GnRH）作为靶标,借助2A肽的自剪切功能,引入平衡致死系统代替抗性基因筛选流程,成功将GnRH和KISS1转入非抗性筛选质粒pVAX-asd中,酶切验证和测序对比验证目的基因的插入方向和序列完全正确。重组质粒转染HeLa细胞,反转录后扩增目的基因结果显示,重组质粒在真核细胞内能够正常转录,保证重组质粒在导入机体后能够正常表达,从而引起特异性免疫反应。将构建成功的质粒转入减毒的猪霍乱沙门氏菌C500中,获得可直接口服免疫的活载体疫苗,酶切和测序结果表明,双表达重组质粒成功导入工程菌中。将活菌疫苗在体外连续传代50次,选取0、2、5、10、20、30、40、50代的菌株进行稳定性研究,生长曲线检测结果表明,工程菌在体外连续传代50次的过程中,其生长特性无明显变化,且与减毒猪霍乱沙门氏菌C500的生长特性一致,未因携带质粒发生明显变化;同时将各代菌液扩增沙门氏菌标志基因（invA）和毒力基因（crp）,结果表明多次传代后工程菌仍然具有沙门氏菌的特性,其减毒特性也无变化。各代菌液质粒酶切验证显示,多次传代并不影响质粒的稳定性,重组双表达质粒能够在沙门氏菌C500中维持正常拷贝功能。综上所述,该重组质粒和工程菌疫苗均具有良好的稳定性,可直接应用于动物免疫去势的研究。     

减毒沙门氏菌为载体传递鸡球虫DNA疫苗的安全性、稳定性与免疫原性

将携带鸡柔嫩艾芙耳球虫5401基因的真核表达质粒pcDNA3—5401的减毒沙门氏菌ZJ111菌株（ZJ111／pcDNA3—5401）口服接种于3日龄非免疫鸡，2周后进行第2次接种。结果表明．利用该减毒沙门氏菌作为戴体具有相对安全性，用限制性酶切分析和PCR鉴定证实，体内试验和体外培养的重组质粒在受体菌ZJ111菌株内比较稳定。用ZJ111／pcDNA3—5401（10^4cfu）口服接种非免疫鸡．2周后用相同剂量加强免疫1次，二免后2周用柔嫩艾笑耳球虫孢子化卵囊攻击，观察其免疫效果。结果表明，重组ZJ111／pcDNA3—5401菌既能诱导产生抗鸡柔嫩艾芙耳球虫抗体，也能显著增强淋巴细胞增殖水平（P〈0．05）；其抗球虫指数为164．98。试验结果显示，利用减毒沙门氏菌为戴体传递DNA疫苗具有良好的安全性、稳定性和免疫原性。     

减毒沙门氏菌为载体传递DNA疫苗诱导对新城疫病毒的免疫保护

探讨了以减毒鼠伤寒沙门氏茵为栽体传递新城疫病毒DNA疫苗的安全性、免疫原性和可行性。将含新城疫病毒(NDV)F48E9株融合蛋白(F)基因的真核表达质粒pcDNA3-F的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌ZJ111株(ZJ111／pcD-NA3一F菌株)，以10^8CFU进行首免，2周后二免，三免后4周攻击强毒株F48E9，观察其安全性和免疫原性，同时设只含空载体pcDNA3的ZJ111／pcDNA3菌株对照及口服PBS对照。结果表明：重组ZJ111／pcDNA3-F菌株具有良好的安全性。对强毒株攻击的保护率达64．7％。重组ZJ111／pcDNA3-F菌株不仅能诱导雏鸡产生NDVELISA抗体，而且诱导产生的法氏囊B淋巴细胞和胸腺T淋巴细胞增殖反应显著高于ZJ111／pcDNA3时照组。这些结果提示，减毒沙门氏菌为载体不仅可直接将NDVF基因呈递给鸡体细胞进行表达，产生抗NDV的体液免疫，而且还可诱导细胞免疫应答。     

Oral vaccination with attenuated Salmonella enterica serovar Typhimurium expressing Cap protein of PCV2 and its immunogenicity in mouse and swine models

Attenuated Salmonella enterica serovar Typhimurium (S. typhimurium) was selected as a transgenic vehicle for the development of oral vaccines against Porcine circovirus type 2 (PCV2). The Cap-encoding gene of PCV2 was amplified by PCR and cloned into expression vector pYA3341. The recombinant plasmid pYA3341-Cap was transformed into attenuated S. typhimurium X4550. BALB/c mice were inoculated orally with various doses of attenuated S. typhimurium X4550/pYA3341-Cap. The bacterium was safe to mice at dose of 2×10(9)cfu and eventually eliminated in the spleen and mesenteric lymph nodes at 4 weeks post-immunization. The flow cytometry analysis showed that the percentage of CD4(+) T cells and CD4(+)/CD8(+) ratio were increased significantly in mice immunized with attenuated S. typhimurium X4550/pYA3341-Cap. Vaccine tests in swine showed that the oral immunization with attenuated S. typhimurium X4550/pYA3341-Cap could elicit significantly higher Cap antibody titers in the treated swine than the control groups. Virus neutralization test showed that serum from the swine treated with attenuated S. typhimurium X4550/pYA3341-Cap had significant levels of neutralization activities. The swine lymphocyte proliferative responses indicated that attenuated S. typhimurium X4550/pYA3341-Cap could induce obvious cellular immune response. An in vivo challenge study showed the swine treated with attenuated S. typhimurium X4550/pYA3341-Cap had significantly lower PCV2-associated lesions and PCV2 viremia than the control groups. The results indicated that attenuated S. typhimurium X4550/pYA3341-Cap can be a potential vaccine against PCV2 infections.     

基因重排狂犬病病毒疫苗株免疫效果的初步研究

试验探究了基因重排狂犬病病毒(RV)弱毒疫苗株能否刺激小鼠产生RV抗体免疫球蛋白G(IgG),比较了其不同免疫方式、不同免疫剂量对小鼠抗体水平的影响及安全性评估。选取28只体重(20±3)g、35日龄左右的昆明系小白鼠,随机分为7组:第1组为低剂量口服组:复合佐剂50μL+病毒液50μL;第2组为中等剂量口服组:复合佐剂150μL+病毒液150μL;第3组为高剂量口服组:复合佐剂300μL+病毒液300μL;第4组为低剂量注射组:复合佐剂50μL+病毒液50μL;第5组为中等剂量注射组:复合佐剂150μL+病毒液150μL;第6组为高剂量注射组:复合佐剂300μL+病毒液300μL;第7组为口服对照组:复合佐剂300μL+SRV9亲本毒株300μL,分别于0、7、14d进行免疫,采用ELISA定量检测试剂盒对各免疫组小鼠的血清IgG水平进行检测,免疫期结束后取各免疫组小鼠的肝脏、肾脏、肺脏、脑组织制作病理组织切片对疫苗的安全性进行评估。结果显示,各免疫组均产生了RV抗体IgG;肌内注射免疫产生的抗体速度较口服免疫快,但肌内注射免疫会导致小鼠发病死亡;600μL口服免疫组产生的抗体水平显著高于100、300μL口服免疫组及亲本毒株SRV9对照组(P<0.05),说明适当加大口服免疫剂量会使口服免疫组产生的抗体水平增加,并且不会引起不良反应。病理组织学检查发现,各口服免疫组小鼠的肝脏、肾脏、肺脏、脑组织的形态结构较为正常,未发生病变,表明基因重排RV疫苗株口服免疫副作用小、安全性较好。本试验结果为研制新型口服疫苗开辟了新的方向。     

Immune responses to new vaccine candidates constructed by a live attenuated Salmonella Typhimurium delivery system expressing Escherichia coli F4, F5, F6, F41 and intimin adhesin antigens in a murine model

To construct a novel live oral vaccine candidate for the prevention of pathogenic Escherichia coli infections in neonatal piglets, an expression and secretion plasmid and an attenuated Salmonella delivery system were used. The individual E. coli genes K88ac, K99, FasA, F41 and intimin adhesins were inserted into pBP244 containing asd, lepB, secA and secB, and these plasmids were transformed into a Salmonella Typhimurium ΔcpxR Δlon Δasd. Forty female BALB/c mice were divided into four groups, A to D (ten mice per group). Groups A and B were administered with the mixture containing all constructs and the S. Typhimurium containing pBP244 only as a control, respectively. Groups C and D were primed and boosted with the mixture and the S. Typhimurium harboring pBP244 only, respectively. Each recombinant adhesin secreted from the individual candidates was confirmed by Western blot analysis. The serum IgG and secretory IgA (sIgA) titers to individual adhesins in all immunized groups were higher than those in control. Furthermore, IgG and sIgA levels in group C were higher than those in group A, and the IgG1 titers were increased in Group C but IgG2a titers were similar or decreased in Group C compared to Group A. In addition, the vaccine strains were not detected in fecal samples of any immunized mice. The novel vaccine candidates are not only highly immunogenic, but also safe for vaccinated mice and environment. In addition, the immune responses can be more efficiently induced through the booster-administration.     

生长抑素亚单位苗对鸡粘膜免疫的影响

在肌肉注射生长抑素 (SS)亚单位苗的基础上应用鸡新城疫弱毒苗进行消化道粘膜免疫鸡 ,显示和检查小肠粘膜中免疫球蛋白A (SIgA)阳性细胞和上皮内淋巴细胞 (iIEL)数量的变化。结果表明 ,应用SS亚单位苗首免后第 3周和第 4周 ,十二指肠中iIEL数量比对照组均显著增加(P <0 0 5) ;首免后第 3周 ,十二指肠、空肠和盲肠扁桃体中SIgA阳性细胞比仅用新城疫弱毒苗免疫组极显著增加 (P <0 0 1 ) ;首免后第 4周 ,十二指肠和空肠中SIgA阳性细胞比仅用新城疫弱毒苗免疫组极显著增加 (P <0 0 1 )。提示SS可抑制小肠粘膜中SIgA阳性细胞和iIEL的分化和增殖。SS亚单位苗可中和体内SS ,作为粘膜免疫促进剂预防家禽传染病     

生长抑素和皮质抑素双表达DNA疫苗免疫杂交水牛育成牛的促生长效果研究

试验旨在探究生长抑素（SS）和皮质抑素（CST）双表达DNA疫苗免疫杂交水牛育成牛的促生长效果,并对其安全性进行验证。将鉴定正确的pVGS/2SS-2A-S/CST-asd质粒电转入减毒猪霍乱沙门氏菌C500构建生长抑素和皮质抑素双表达活载体疫苗。将16头6~12月龄杂交水牛育成牛随机分为低（TL）、中（TM）、高（TH）剂量组及PBS对照组（NC）,每组4头,试验组和对照组分别用双表达疫苗和PBS进行鼻腔免疫,初免时每天09：00和15：00免疫2次,连续免疫3 d,2周后以相同程序加强免疫1次,对免疫后不同时期的增重效果和免疫应答水平等进行监测。免疫应答结果显示,各剂量组免疫后均引起了免疫应答,TL组在初免后2周产生的SS抗体水平高于TM和TH组,而TM组SS抗体阳性率最高,为100%,优于TL （75%）和TH组（50%）;初免后2周产生的CST抗体水平则呈现完全相反的趋势,抗体水平随免疫剂量下降呈下降的趋势;初免后7周SS抗体和CST抗体水平和阳性率整体呈下降趋势,但也有部分牛出现抗体升高趋势;免疫因子检测结果显示,初免后2周TL和TM组IL-4水平极显著高于对照组（P<0.01）,而免疫后7周对照组的IL-4水平显著高于TL组（P<0.05）,与其他各组之间差异均不显著（P>0.05）;对照组INF-γ水平在初免后2周显著高于TL和TM组（P<0.05）,免疫后7周对照组显著高于TL组（P<0.05）,与其他各组之间差异均不显著（P>0.05）;对比抗体阳性组和阴性组发现,初免后2周抗体阳性组的IL-4水平极显著高于阴性组（P<0.01）,初免后7周则显著低于对照组（P<0.05）,而抗体阳性组INF-γ在初免后2和7周均显著低于阴性组（P<0.05）。增重效果检测显示,初免后2周各试验组平均日增重均显著高于对照组（P<0.05）,而在其他各时期各组之间差异均不显著（P>0.05）,抗体阳性组仅在初免后2周显著高于阴性组（P<0.05）。激素检测结果显示,各试验组生长激素（GH）和胰岛素样生长因子-1（IGF-1）在初免后2周均极显著高于对照组（P<0.01）,而初免后7周TL组GH和IGF-1水平显著低于对照组（P<0.05）,其他各组之间均差异不显著（P>0.05）;抗体阳性组的GH和IGF-1水平在初免后2周极显著高于阴性组（P<0.01）,而初免后7周则极显著低于阴性组（P<0.01）。安全性检测结果显示,各时期采集的水样、土样、粪样中均未检测到目的片段,证实了疫苗的安全性。本试验结果表明,双表达疫苗免疫后机体能产生良好的免疫应答,能提高育成牛的平均日增重,且对环境未产生安全性问题。     

粘膜免疫对鸡十二指肠SS mRNA表达的影响

应用鸡新城疫弱毒疫苗进行消化道粘膜免疫,或在肌肉注射生长抑素(SS)亚单位疫苗的基础上应用鸡新城疫弱毒疫苗进行消化道粘膜免疫,通过RT PCR方法检测免疫鸡十二指肠中SS基因的表达.结果表明,首免后第3周,新城疫免疫组的SS mRNA表达高于SS亚单位苗组,但各试验组无显著差异;首免后第4周,新城疫免疫组SS mRNA的表达显著高于SS亚单位苗组(P＜0.05)并高于对照组.提示粘膜免疫可促进小肠粘膜SS mRNA的表达,SS亚单位苗可在基因水平上降低SS mRNA的表达.     

芪参口服液的毒理学研究

为评价芪参口服液临床用药的安全性,根据毒理学评价程序和方法对其进行了急性毒性试验和长期毒性试验。在急性毒性试验中,将40只昆明小鼠按体重随机分为2组,采用最大给药量法测定小鼠口服芪参口服液的最大耐受剂量;在长期毒性试验中,将80只Wistar大鼠按体重随机分为4组,3个剂量组分别按3.75、7.5、15 g/kg体重给大鼠灌胃,对照组给予同体积生理盐水,1次/d,连续4周。记录每日饮水量、饲料采食量及每周体重,检测给药4周及停药2周血液生化指标、血常规、脏器系数和组织病理学变化。试验结果显示,小鼠口服芪参口服液的最大耐受剂量为生药量40 g/kg,此剂量相当于临床日用量的40倍。部分给药组采食量和饮水量与对照组相比出现显著(P＜0.05)或极显著(P＜0.01)变化,但对平均周增重无显著性影响(P＞0.05);血常规的部分指标出现显著(P＜0.05)或极显著变化(P＜0.01),但停药2周后,所有指标与相应的对照组相比无显著性差异(P＞0.05);给药组血液生化和脏器系数的各项指标与对照组相比,无显著性变化(P＞0.05)。病理组织学检查无明显差异。试验结果表明,在本次试验条件下,该口服液安全无毒。     

A limited role for SsrA/B in persistent Salmonella Typhimurium infections in pigs

Virulence genes regulated by the SsrA/B system are indispensable for systemic disease in BALB/c mice. The role of this regulating system in the pathogenesis of Salmonella Typhimurium infections in pigs is not documented. In the present study, the interactions of Salmonella Typhimurium and an ssrA/B mutant were compared in vitro and in vivo. The ssrA/B mutant strain displayed decreased Salmonella Pathogenicity Island 2 (SPI-2) expression levels, showed a replication defect in mouse macrophages and was attenuated in a mouse model after oral inoculation. Using real time qRT-PCR and a porcine ileal loop model, it was shown that the ssrA/B mutant strain was not significantly attenuated in overall virulence and SPI-1 expression in specific. Flowcytometric analysis demonstrated that the ssrA/B mutant strain was defective in intracellular replication in porcine macrophages. After oral inoculation of piglets with the wild type strain or the ssrA/B mutant strain, the animals of both groups excreted Salmonella and were colonized by Salmonella to the same extent. In an intravenous mixed infection model, the ssrA/B mutant strain was defective in the colonization of several internal organs. These results suggest that the ssrA/B gene of Salmonella Typhimurium plays a limited role in the persistent intestinal colonization of pigs.