副猪嗜血杆菌重组抗原蛋白对小鼠的免疫效果评价

为研制对不同血清型具有交叉保护作用的副猪嗜血杆菌(HPS)重组抗原蛋白,本研究将390只6周龄雌性昆明鼠随机分为13组,每组30只,分别为HPS血清型5型单个重组蛋白免疫组:外膜蛋白(D15)组、分泌蛋白(afuA)组、转铁结合蛋白(tbpB)组、细胞致死膨胀毒素(cdtC)组、PBS组,联合重组蛋白免疫组:HPS血清型4+5+13型D15、HPS血清型5型D15+tbpB、D15+cdtC、cdtC+tbpB、D15+afuA、D15+cdtC+tbpB、D15+afuA+tbpB及PBS组。每间隔2周经皮下注射免疫2次各组相应乳化蛋白,于一免后2周、二免后2周采集各组小鼠尾静脉血,利用间接ELISA检测小鼠血清抗体效价,并通过免疫鼠脾淋巴细胞增殖试验、细胞因子检测、血清杀菌试验及攻毒保护试验评价重组蛋白的免疫效果。结果显示,免疫组小鼠均能产生显著的T淋巴细胞增殖反应,其产生的血清抗体均能极显著抑制HPS生长(p0.001),且抗体水平均极显著高于对照组(p0.001);联合重组蛋白免疫组小鼠产生的IgG抗体水平、细胞因子IL-2、IL-4和IFN-γ的水平均略高于单个重组蛋白免疫组;其中,HPS血清型5型D15+afuA和血清型4+5+13型D15免疫组小鼠产生的IgG抗体水平略高于其余联合重组蛋白免疫组,各联合免疫组间细胞因子水平差异不显著;HPS血清型5型D15+afuA+tbpB和血清型4+5+13型D15对4型HPS感染的保护率均为71%,对5型菌株的保护率均为86%,对13型菌株的保护率为71%和86%,表明血清型5型D15+afuA+tbpB重组蛋白组合和血清型4+5+13型D15重组蛋白组合对HPS感染具有交叉保护的潜力。本研究为HPS亚单位疫苗的研制提供了实验依据。     

基于细菌表面展示技术的猪链球菌病-副猪嗜血杆菌病二联亚单位疫苗的小鼠保护效果评价

为评价猪链球菌病-副猪嗜血杆菌病表面展示二联亚单位疫苗对小鼠的保护效果,本研究在应用融合PCR构建副猪嗜血杆菌(HPS)保护性抗原AfuA-OppA2和CdtB-OppA基因的串联序列基础上,将其分别插入pMD-28a-INP-His表面展示质粒,并将猪链球菌(SS)保护性抗原MRP、SLY基因也分别克隆至该表面展示质粒,构建pMD-INP-CdtB-OppA、pMD-INP-AfuA-OppA2、pMD-INP-MRP、pMD-INP-SLY 4种重组质粒,分别转入E.coli BL21(DE3)中诱导表达,使重组蛋白AfuA-OppA2、CdtB-OppA、MRP、SLY分别展示于E.coli BL21(DE3)的菌体表面。将灭活后的4种重组大肠杆菌按等质量比混合并添加ISA 201佐剂乳化制成表面展示二联亚单位疫苗,间隔14 d两次免疫KM小鼠,另设含rAfuA、rOppA2、rCdtB、rOppA、rMRP、rSLY的纯化蛋白亚单位疫苗免疫组、副猪嗜血杆菌-猪链球菌(HPS-SS)灭活疫苗免疫组和PBS对照组,二次免疫后的小鼠血清通过ELISA检测相应抗体和细胞因子水平。随后用HPS血清5型HN10株、血清13型ZD12株和SS血清2型M126株和血清9型GZ2株进行攻毒。结果显示:表面展示二联亚单位疫苗刺激小鼠产生的抗体和细胞因子水平与纯化蛋白亚单位疫苗组相当。用副猪嗜血杆菌5型和13型菌株分别攻毒后,表面展示二联亚单位疫苗对小鼠的保护率均为80%,其对HPS 5型菌株攻毒的小鼠保护率低于纯化蛋白亚单位疫苗(90%),但对HPS 13型菌株攻毒小鼠的保护率高于纯化蛋白亚单位疫苗(60%),且均优于HPS-SS灭活苗(80%和60%)。用SS 2型和9型菌株分别攻毒后,表面展示二联亚单位疫苗对小鼠的保护率为50%和80%,低于纯化蛋白亚单位疫苗的保护效果(100%和80%),优于HPS-SS灭活苗(50%和60%)。以上结果表明,基于表面展示技术的猪链球菌病-副猪嗜血杆菌病二联亚单位疫苗能刺激机体产生相应的抗体,其对HPS血清5型、13型和SS血清2型、9型菌株的攻击均能提供良好的交叉保护,保护效果优于HPS-SS灭活苗。本研究首次为基于表面展示技术的亚单位疫苗的研制提供实验依据,为细菌疫苗的研发提供新思路。     

重组大肠杆菌外膜蛋白OmpT对小鼠免疫保护作用的研究

为评价大肠杆菌(E.coli)外膜蛋白酶T(OmpT)的免疫原性及对小鼠的免疫效率,本研究将原核重组表达纯化的OmpT蛋白(rOmpT)免疫小鼠,并以灭活的E.coli 308-2全菌疫苗株作为对照组,通过检测其抗体效价、体外调理吞噬作用和细胞因子表达水平以及攻毒试验进行保护效率评价。结果表明rOmpT免疫组在二免后14 d其抗体水平可以达到峰值(1∶64 000),并且其抗血清具有显著促进巨噬细胞对E.coli的吞噬作用;同时,重组蛋白与全菌免疫组均能够显著提高小鼠体内IL-4和IFN-γ的表达。而且重组蛋白免疫组对4个进化种系(Phylogenetic group)的E.coli攻毒的免疫保护率均为60%左右,比全菌免疫组高约10%。研究结果显示rOmpT比全菌灭活E.coli能够诱导小鼠产生更有效免疫保护作用,表明rOmpT可以作为E.coli亚单位疫苗候选蛋白。     

猪丹毒丝菌CbpB蛋白对小鼠的免疫效果分析

探究猪丹毒丝菌（ER）CbpB蛋白的免疫原性和保护作用,为深入研制ER基因工程亚单位疫苗提供新的思路和技术储备。以表达的ER重组蛋白CbpB、SpaA、CbpB+SpaA以及ER灭活全菌体（V-AEr21）、商品化弱毒疫苗、商品化灭活疫苗分别免疫小鼠。利用间接ELISA检测小鼠血清中IgG抗体,血清杀菌试验测定功能性抗体水平,攻毒试验测定免疫保护率,组织荷菌数试验测定ER定植情况,并采集小鼠组织脏器（脾、肺、肝、肾）制备切片,观察病理变化。结果显示：与免疫原性最优的商品化弱毒疫苗相比,CbpB和SpaA虽产生的IgG抗体均仅为1∶6 400,但血清杀菌效果强;对小鼠的免疫攻毒保护率与商品化弱毒疫苗相同,均为100%,且在脾、肺、肝、肾组织中均无细菌定植,病理组织学观察与空白对照无明显区别。CbpB重组蛋白具有良好的免疫原性和保护作用,能刺激机体产生体液免疫和细胞免疫,可以作为猪丹毒基因工程亚单位疫苗的候选抗原。     

重组鸡白细胞介素-2对禽流感灭活疫苗免疫增强作用的研究

为研究重组鸡白细胞介素-2(IL-2)对H5N1亚型禽流感灭活苗的免疫效果,将重组IL-2蛋白和禽流感灭活疫苗联合免疫14日龄SPF鸡,免疫后每周测定一次血清抗体效价﹑脾脏T淋巴细胞亚群,最后计算攻毒保护率。试验结果表明:重组IL-2蛋白具有增强禽流感疫苗免疫效果的作用,提高了血清中的抗体水平﹑增加了脾脏T淋巴细胞CD4+﹑CD8+亚群数量。     

PRRSV变异株活疫苗和灭活疫苗免疫特性的研究

为进一步研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)变异株疫苗的免疫机理和明确PRRSV变异株活疫苗和灭活疫苗各自的免疫特性,本实验分别采用PRRSV变异株(HuN4)活疫苗和PRRSV变异株(JXA1)灭活苗免疫PRRSV抗原和抗体阴性的健康断奶仔猪,免疫后21d用PRRSV变异株HuN4强毒攻毒,ELISA方法检测血清中PRRSV特异的抗体水平及TNF-α、IFN-α、IL-1、IL-6和CRP细胞因子水平,荧光定量RT-PCR方法检测病毒血症的发生和持续情况,并取主要器官进行病理组织学观察。结果表明:HuN4活疫苗组免疫后14d便可检测到PRRSV特异性抗体,攻毒后5d各细胞因子水平升高,攻毒后21d病毒血症完全消失,免疫后各器官没有明显病理变化,攻毒后临床症状和各组织器官病理变化轻微;JXA1株灭活苗组免疫期间没有检测到PRRSV特异性抗体,攻毒后5d～9d各细胞因子水平升高,攻毒后病毒血症持续存在,免疫后各器官有轻微病理变化,攻毒后临床症状和各组织器官病理变化比HuN4活疫苗组严重,但比对照组明显减轻。本实验表明,HuN4活疫苗能够快速有效的激发机体的体液免疫反应,在抵抗PRRSV变异株HuN4强毒攻毒时,临床症状明显优于JXA1灭活苗。     

猪乙型脑炎(HW1株)细胞灭活疫苗免疫抗体水平分析

为评估猪乙型脑炎(HW1株)细胞灭活疫苗的免疫原性,用商品化的乙型脑炎鼠脑疫苗、乙型脑炎弱毒疫苗(SA14-14-2株)以及自制乙型脑炎细胞灭活疫苗(HW1株)分别免疫仔猪,通过抗体水平监测试验、中和抗体试验、小鼠攻毒保护试验分别检测了其特异性抗体消长情况、中和抗体效价产生情况及疫苗对小鼠的攻毒保护率。结果显示,3种疫苗均能产生中和抗体,乙型脑炎细胞灭活疫苗免疫组中和抗体水平要高于鼠脑疫苗和弱毒疫苗免疫组,乙型脑炎细胞灭活疫苗和弱毒疫苗免疫组对小鼠的攻毒保护率高于鼠脑疫苗免疫组,但两者之间差异不显著。抗体消长情况显示,至8周观测期结束,鼠脑疫苗免疫组的抗体阳性率为80%,乙型脑炎细胞灭活疫苗和弱毒疫苗免疫组抗体阳性率为100%。结果表明猪乙型脑炎(HW1株)细胞灭活疫苗的免疫原性优于鼠脑灭活疫苗和弱毒疫苗。     

ZE515对CP5型金黄色葡萄球菌疫苗的佐剂作用

前期研究表明一种含人参皂甙的植物油佐剂ZE515对口蹄疫疫苗具有佐剂作用,本研究探讨该佐剂对荚膜多糖CP5型金黄色葡萄球菌(S.aureus)疫苗的佐剂作用。将ZE515和灭活的金黄色葡萄球菌抗原乳化制备成疫苗,ICR小鼠皮下注射疫苗免疫2次,二免后3周采血制备血清,检测血清抗体及其亚类、细胞因子IL-5和IFN-γ,取脾脏检测淋巴细胞增殖指数(SI),并对免疫鼠腹腔注射S.aureus活菌进行攻毒保护性试验。结果显示,ZE515能显著增强抗体及其亚类的免疫应答(P0.05),提高淋巴细胞增殖指数(P0.05),提升血清IL-5和IFN-γ表达水平(P0.05)。ZE515对S.aureus疫苗的佐剂作用显著强于常规铝胶佐剂,含ZE515的疫苗对S.aureus强毒攻毒的保护率为75%,而含铝胶佐剂的疫苗保护率只有50%,表明ZE515对S.aureus疫苗具佐剂作用,值得进一步研究。     

猪重组IL-2、IL-4和IFN-γ对口蹄疫合成肽疫苗的免疫增强作用研究

为了研究猪IL-2、IL-4和IFN-γ对口蹄疫合成肽疫苗的免疫佐剂效应,将经测定具有生物学活性的猪重组IL-2、IL-4和IFN-γ与口蹄疫合成肽疫苗配伍免疫仔猪,检测仔猪抗口蹄疫抗体水平和血清细胞因子IL-4、IL-10、IL-17和IFN-γ含量的变化,观察其免疫佐剂效应。结果表明:制备的IL-2、IL-4和IFN-γ重组蛋白质均有较好的生物学活性,其中IL-2和IFN-γ重组蛋白质均能极显著提高仔猪抗口蹄疫抗体水平(P0.01),而IL-4重组蛋白质抑制口蹄疫抗体的产生(P0.01)。血清细胞因子检测结果发现口蹄疫疫苗+IL-4组的IL-4和IL-10含量均较空白疫苗免疫猪显著升高(P0.05),口蹄疫疫苗+IL-2组及口蹄疫疫苗+IFN-γ组的IFN-γ含量较空白疫苗免疫猪极显著升高(P0.01)。结果提示,重组细胞因子IL-2和IFN-γ分别作为免疫佐剂与口蹄疫疫苗联用,能显著增强机体的体液和细胞免疫应答。     

H5亚型高致病性禽流感疫苗的免疫效力

利用表达H5亚型禽流感病毒血凝素基因(HA)的重组鸡痘病毒(rFPV-HA)和全病毒灭活疫苗免疫商品鸡，比较两种疫苗的保护效力。结果发现，利用10^3PFU和10^6PFU的rFPV-HA免疫无母源抗体商品鸡和含母源抗体商品鸡，HI抗体应答水平均低于灭活疫苗免疫组。利用H5亚型禽流感病毒经肌肉注射攻毒后，rFPV-HA免疫的无母源抗体商品鸡获得了完全保护(100％)，高于灭活疫苗保护率(94.7％)；但rFPV-HA免疫含母源抗体商品鸡诱导的保护率(11.4％～15.8％)低于灭活疫苗免疫组的保护水平(68.4％)。结果表明，rFPV-HA诱导HI抗体的能力低于灭活疫苗；但rFPV-HA免疫无母源抗体商品鸡的保护率完全达到灭活疫苗保护水平，显示出了良好的应用前景；灭活疫苗和rFPV-HA均受到母源抗体的干扰，不适于在母源抗体处于高峰期时使用。     

猪大肠杆菌融合菌株R2灭活苗的研制及免疫试验

为了研究猪大肠杆菌融合菌株R2蜂胶灭活苗的免疫效果,试验以猪大肠杆菌原生质体融合菌株R2为菌种制备蜂胶灭活苗,采用肌肉注射方式免疫SPF小白鼠,以间接ELISA方法检测血清中IgG抗体水平,同时用2种不同血清型的猪大肠杆菌亲本菌株与免疫血清做玻片凝集试验,并对小白鼠进行攻毒保护试验。结果表明:该疫苗免疫性能较好,在免疫小白鼠后的第28,35天左右机体内的抗体水平达到最高值,融合菌株R2蜂胶灭活苗可对2种不同血清型的猪大肠杆菌亲本菌株的攻毒试验产生保护,而且安全性能良好,是一种效果较好的菌苗。说明融合菌株R2蜂胶灭活苗作为一种新型疫苗防控猪大肠杆菌病将成为一种可能。     

超声灭活大肠杆菌制造禽大肠杆菌病疫苗

超声灭活大肠杆菌继之以辐射处理是一种制备大肠杆菌病疫苗最有效的方法。该法制备的疫苗比用其他方法（热，甲醛，辐射等）灭活制备的疫苗的保护率都高，该法制的O2：1株超声疫苗同时能抵抗同源菌株O73：K80的攻击，其保护率与攻毒当天测得的大肠杆菌抗体效价成正相关，免疫后5天仅能测得低效价抗体，保护率为20％，免疫后5－18天可 得高效价抗体，攻毒后只有极少数出现病变，每个攻毒组中，无病变鸡比有病变鸡抗体效价高，显示鸡病变程度与抗体效价之间存在相关性。     

基因Ⅰ型猪乙型脑炎灭活疫苗免疫原性评价

为了评估猪基因Ⅰ型乙型脑炎病毒YA1株、CZ株灭活疫苗的免疫原性,通过将YA1株、CZ株乙脑病毒分别在乳鼠脑内连续传代,获得了高病毒含量的鼠脑病毒液。将佐剂ISA206分别与灭活的YA1株、CZ株乙脑病毒液混合,制备成鼠脑灭活苗。将YA1株、CZ株鼠脑灭活苗以及HW1株商品化鼠脑灭活苗分别免疫接种小鼠、豚鼠、仔猪,采用间接ELISA试验、血凝抑制试验、病毒中和试验以及攻毒保护试验分别检测IgG抗体、血凝抑制抗体、中和抗体的的产生情况以及疫苗对小鼠的攻毒保护率。结果显示YA1株、CZ株灭活苗在小鼠和仔猪上产生的IgG抗体、在豚鼠上产生的血凝抑制抗体、在仔猪上产生的中和抗体以及对小鼠的攻毒保护率均高于HW1株。结果表明乙脑病毒YA1株、CZ株灭活苗的免疫原性优于HW1株,其中CZ株灭活苗的免疫原性最优。     

副猪嗜血杆菌转铁结合蛋白A基因的分段表达及其免疫原性分析

本研究旨在获得副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)转铁结合蛋白A基因(tbpA)的表达产物(TbpA),并对其免疫原性进行分析鉴定.采用生物信息学方法预测HPS的TbpA抗原表位,根据GenBank上发表的HPS(SH0165株)tbpA的核苷酸序列设计合成3对引物,用PCR从安徽省HPS分离株(LJ3) tbpA中分段扩增出tbpA1、tbpA2和tbpA3,并连接到pET-32a(+)载体上,经BamH Ⅰ和EcoRⅠ双酶切鉴定和测序确认,将重组质粒转化大肠杆菌BL21 (DE3)中,进行IPTG诱导表达.利用SDS-PAGE检测目的蛋白,Western blotting分析重组蛋白的免疫活性;通过小鼠免疫攻毒保护试验和血清杀菌力试验,鉴定重组蛋白的免疫原性以及诱导机体产生保护性免疫反应的能力.结果表明,从HPS(LJ3)tbpA中扩增出与预期设计的1140、897、666 bp大小相符的3个片段(tbpA1、tbpA2、tbpA3),扩增产物连接载体得到重组质粒,在大肠杆菌中实现表达,获得大小为62、54、44 ku的目的蛋白(rTbpA1、rTbpA2、rTbpA3),均能与HPS阳性血清反应.rTbpA1与甲醛灭活菌体对小鼠免疫攻毒的保护率分别为20％和40％,但rTbpA1引起小鼠平均死亡时间显著延迟,兔抗rTbpA1与兔抗HPS(LJ3)血清具有同样显著的杀菌活性.结果显示,成功表达的rTbpA1、rTbpA2、rTbpA3均具有良好的反应原性,其中rTbpA1更具有良好的免疫原性以及诱导机体产生保护性免疫反应的能力,可望成为副猪嗜血杆菌病疫苗和血清学检测的候选成分.     

增强猪传染性胸膜肺炎灭活苗对小鼠保护力的研究

为了提高猪传染性胸膜肺炎灭活苗的保护力,本研究利用基因重组技术表达了猪传染性胸膜肺炎放线杆菌6种主要致病因子蛋白:rApxⅠ、rApxⅡ、rApxⅢ、rApxⅣ、rApfa和rOMP。设立试验Ⅰ组(灭活苗),试验Ⅱ组(灭活苗、rApxⅠ、rApxⅡ、rApxⅢ和rOMP),试验Ⅲ组(灭活苗、rApxⅠ、rApxⅡ、rApxⅢ和rApxⅣ),试验Ⅳ组(灭活苗、rApxⅠ、rApxⅡ、rApxⅢ和rApfa)和空白对照组(PBS),每组26只BALB/c小鼠,分3次免疫,每次间隔2周,每周检测血清抗体水平,在免疫后第2周、第4周和第5周,MTT法检测脾脏T细胞增殖水平及ELISA法测定IFN-γ分泌水平。在第3次免疫后的第7 d,将每组剩余20只小鼠平均分成2组,分别以APP1型菌(5×10~9 CFU)和APP7型菌(1×10~(11) CFU)进行攻毒保护试验。结果表明,向灭活苗中添加重组亚单位成份可以提高机体的细胞免疫和体液免疫水平,并能提高灭活苗的交叉保护率;试验Ⅱ组的ApxⅠ和OMP抗体水平以及细胞免疫水平均显著高于其它各组(p<0.05),对于APP1和APP7型菌的攻毒也提供了明显优于其它各组的保护结果,试验Ⅲ、Ⅳ组的细胞、体液免疫水平及保护率较试验Ⅰ组也有所提高。结果显示出ApxⅠ、OMP抗体水平和细胞免疫水平与攻毒保护率之间存在着正相关性,向灭活苗中加入重组蛋白成份可以提高疫苗的交叉保护,试验Ⅱ组通过激活体液免疫和细胞免疫,对两个血清型APP的攻击提供了很好的保护作用,从而为猪传染性胸膜肺炎新型疫苗的研制提供参考。     

猪链球菌三价灭活疫苗免疫佐剂的筛选

为筛选适用于新型猪源链球菌(SS)灭活疫苗的佐剂,本研究以SS1 Z1株、SS2 Z2株和SS7 Z7株为抗原,分别配制ISA201 VG双相油乳佐剂疫苗(简称ISA201疫苗)、GEL 02 PR水溶性聚合物佐剂疫苗(简称GEL疫苗)、IMS1313N VG水溶性纳米佐剂疫苗(简称IMS1313疫苗)、矿物油佐剂疫苗(简称油疫苗)、氢氧化铝胶佐剂疫苗(简称铝胶疫苗)共5种佐剂的三价灭活疫苗。豚鼠和仔猪安全性试验结果表明:油佐剂疫苗的副反应较大,其余疫苗的副反应较小。仔猪免疫保护试验结果显示:二免14 d后利用约为1 LD_(100)的SS2 Z2株对仔猪经耳缘静脉攻毒,ISA201疫苗、GEL疫苗对仔猪的保护率均为100%,油疫苗和铝胶疫苗保护率分别为60%、40%,IMS1313疫苗组的保护率为0;利用1 LD_(100) SS1 Z1株攻毒后,ISA201疫苗、GEL疫苗、油疫苗、铝胶疫苗和IMS1313疫苗对仔猪的保护率分别为100%、80%、80%、60%和0。综上结果表明,ISA201疫苗免疫仔猪能产生最高的抗体水平,同时提供了最高的保护效力,且副反应较小,确定ISA201为开发链球菌灭活苗的首选佐剂。本研究为SS三价灭活疫苗的研发奠定了基础。     

中药疫苗稀释剂BC-6对猪伪狂犬病弱毒疫苗免疫效果的研究

为探究以人参茎叶皂甙为主要成分的疫苗稀释剂BC-6对弱毒疫苗的免疫增强作用,本研究用BC-6稀释伪狂犬病(PR)弱毒疫苗免疫小鼠,检测其血清特异性伪狂犬病毒(PRV)gB抗体水平、脾淋巴细胞增殖活性和细胞因子的表达水平以及对免疫小鼠的攻毒保护率。结果显示和生理盐水稀释剂比较,BC-6显著增强了疫苗诱导的血清gB抗体应答,显著促进了刀豆蛋白(Con A)、脂多糖(LPS)和PRV抗原诱导的淋巴细胞增殖活性和淋巴细胞表达IFN-γ、IL-12、IL-5和IL-10 mRNA的水平,显著提高免疫小鼠感染PR野毒后存活率。BC-6对gB抗体的促进作用高于目前国内市场上的其它6种商品疫苗稀释剂,和其中的4种稀释剂比较有显著性差异。本研究为BC-6作为疫苗稀释剂临床应用提供了实验依据。     

三种猪繁殖与呼吸综合征疫苗免疫效果评价

为研究不同猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)疫苗的的免疫特性,分别采用PRRSV变异株(JXA1-R)弱毒疫苗、经典PRRSV(VR 2332)弱毒疫苗、变异株(JXA1)灭活疫苗,免疫接种PRRSV抗原和抗体阴性的健康断奶仔猪,免疫接种后70d用PRRSV变异株强毒攻毒,ELISA检测血清中PRRSV特异的抗体水平及IFN-γ、IL 2、IL 4、IL 8、IL 10的水平,并进行临床症状和肺部病理组织学观察和评分。结果表明,VR 2332、JXA1-R弱毒疫苗对免疫猪攻毒保护效果差异不显著,均为63.6%(7/11),JXA1灭活疫苗免疫攻毒保护效果较差,为36.4%(4/11)。试验还发现病毒感染猪血清中细胞因子IFN-γ和IL-10的比值可以作为评价疫苗免疫效果的一个指标。     

猪丹毒丝菌SpaA基因原核表达及表达蛋白质的免疫原性分析

旨在克隆表达猪丹毒丝菌SpaA蛋白,分析其免疫原性,为猪丹毒新型疫苗的研发奠定基础。运用PCR扩增SpaA基因,连接至pGEX-6P-1载体,将阳性重组质粒转化大肠杆菌Rosetta(DE3),IPTG诱导表达,SDSPAGE分析表达产物,GST亲和层析纯化融合蛋白质,Western blot鉴定;纯化SpaA蛋白免疫小鼠,间接ELISA检测血清中IgG和Th1、Th2相关细胞因子;不同致病力猪丹毒丝菌攻击免疫小鼠,观察病理组织变化及其免疫保护率。结果显示,猪丹毒丝菌SpaA基因在大肠杆菌中实现表达,获得大小为75ku的纯化目的蛋白质。该蛋白质能特异性识别猪丹毒丝菌抗血清,可诱导小鼠产生较高水平的特异性抗体IgG,并使TNF-β、IFN-γ、IL-5、IL-10含量显著升高,对攻毒菌的免疫保护率均为100%,病理组织变化与攻毒对照组之间差异明显。可见成功获得的重组SpaA蛋白具有良好的免疫原性,能激发机体的体液免疫和细胞免疫,产生较强的免疫保护力,可以作为研发猪丹毒亚单位疫苗的候选抗原。     

表达鸡IL2和IL15重组新城疫病毒的免疫增强作用研究

为提高新城疫病毒(NDV)弱毒疫苗的免疫保护效果,本研究选取鸡IL2(chIL2)和chIL 15两个细胞因子作为分子佐剂,通过反向遗传操作技术分别将这两个基因克隆于NDV Clone30株中,构建表达chIL2和chIL15的重组病毒rClone30-chIL2和rClone30-chIL15.ELISA法检测结果表明两种细胞因子在重组病毒中均能够稳定表达.将重组病毒免疫雏鸡,以NDV强毒BJ株进行攻毒试验,测定其抗体产生情况和保护效果.结果表明,两种重组病毒均可以诱导雏鸡产生较高水平抗体;而且两种重组病毒保护率可达100％,具有较好的保护效果.本研究为进一步提高NDV重组基因工程疫苗的效果提供了新思路.