肉品中莱克多巴胺残留的酶联免疫快速检测方法的建立

用自主制备的莱克多巴胺特异性抗体建立了猪肉样品中莱克多巴胺药物残留的间接竞争酶联免疫检测方法,对该检测体系的灵敏度、准确度、精密度、特异性等性能进行了测定,并将该检测系统与高效液相色谱法(HPLC)进行了对比分析。结果显示:莱克多巴胺药物残留的酶联免疫检测体系的检测范围为1～100 ng,灵敏度为0.12 ng/mL,检测限为1 ng/mL,回收率为80%～100%,与同类药物如盐酸克仑特罗、硫酸特布他林及硫酸克仑特罗的交叉反应率均小于0.01%;采用HPLC方法进行莱克多巴胺药物残留的检测时,其检测范围为10～200μg/mL,检测限为1μg/mL,回收率为83%～100%。该方法与高效液相色谱法相比灵敏度较高,特异性强,检测结果准确度相近,但是在检测结果稳定性方面逊于HPLC方法。     

进出口食用动物、饲料中盐酸克伦特罗ELISA检测方法的建立

为了建立进出口食用动物、饲料中盐酸克伦特罗残留快速检测技术,试验建立间接竞争酶联免疫吸附试验(ELISA)方法进行检测。结果表明:包被抗原的最适质量浓度为20.0μg/mL,抗体的最佳稀释度为1∶5 000,半抑制浓度(IC50)=2.1 ng/mL;该方法的最低检测限达0.05 ng/mL,与沙丁胺醇和莱克多巴胺的交叉反应率分别为8.28%、7.75%,平均加标回收率为94.52%。该方法灵敏度高,样品前处理简便、快速,适用于进出口食用动物、饲料中盐酸克伦特罗残留的大批量现场检测。     

ELISA一步法快速检测牛奶中三聚氰胺的研究

在制备三聚氰胺单克隆抗体的基础上建立了一种用于检测牛奶中三聚氰胺含量的间接竞争酶联免疫检测方法,采用一步法操作,评估了方法的回收率、准确度、精密度和特异性,并利用液相色谱―串联质谱法进行了盲样确证试验。结果显示,该方法的线性检测范围为10~810 ng/mL,灵敏度为10 ng/mL,回收率为84.0%~90.0%,同类似物交叉反应率均小于0.1%。本试验建立的ELISA一步法能满足牛奶中三聚氰胺的检测要求。     

猪肝和猪尿中沙丁胺醇和克伦特罗残留的酶联免疫吸附检测法研究

采用混合酸酐法将沙丁胺醇与牛血清白蛋白偶联，并免疫家兔制备抗沙丁胺醇抗血清。以间接ELISA法测定血清效价，测得抗血清最佳工作浓度为1：6400，该抗沙丁胺醇抗血清对克伦特罗有110％的交叉反应性。建立了能够同时检测SAL和CL的间接竞争ELISA方法，该方法对沙丁胺醇的检测范围为0．48ng／mL～8．0μg／mL，对克伦特罗的检测范围为0．43ng／mL～7．3μg／mL，对沙丁胺醇的检测灵敏度为o．48ng／mL，对克伦特罗的检测灵敏度为0．43ng／mL。在猪肝和猪尿中添加1～50ng／g(ng／mL)的沙丁胺醇，添加回收率为72．2％～84．8％，变异系数为4．2％～28．3％，在猪肝脏和猪尿中添加1～50ng／g(ng／mL)的克伦特罗，添加回收率为84．3％～103．4％，变异系数为O．3％～35．5％。     

超高效液相色谱串联质谱法检测鸡肉组织中磺胺氯吡嗪残留量方法的考查

为了考查已建立的鸡肉组织中磺胺氯吡嗪药物残留的超高效液相色谱串联质谱分析方法,选用乙酸乙酯为提取液,经MCX固相萃取柱净化,用0.2%甲酸甲醇复溶,在超高效液相色谱串联质谱联用仪上进行测定,外标法定量。结果表明:鸡肉组织中磺胺氯吡嗪的检测限为0.50μg/kg,定量限为2.00μg/kg,在10～100 ng/mL浓度范围内线性关系良好,R~2=0.991 6;在2.00～20.00μg/kg添加水平下,回收率范围为67.00%～94.80%,相对标准偏差(RSD)小于6.00%。说明该方法特异性强、定性准确、灵敏度高,能满足鸡肉中磺胺氯吡嗪残留的定量检测要求。     

酶联免疫法测定猪肉中磺胺类药物的残留

利用酶联免疫法对猪肉中的磺胺类药物残留进行检测,结果表明:该方法的灵敏度为1μg/L,最低检测限为1.5μg/kg;向空白样本中添加浓度为100、200μg/kg磺胺标准品时,平均回收率范围为76.1%～101.7%,变异系数为4.6%～11.9%;利用该方法与液相色谱-串联质谱法检测实际样本,其阴、阳性判断结果一致。该法灵敏准确、重复性好、特异性高,适用于对猪肉中15种磺胺类药物进行多残留检测。     

环境水样中地塞米松的酶联免疫法测定

通过对地塞米松分子结构进行改造,制备了地塞米松半抗原及人工抗原,免疫动物得到了地塞米松的单克隆抗体,建立了地塞米松间接竞争酶联免疫检测方法。结果表明,Logit/Log拟合标准曲线方程为Y=-2.1426X–9884,相关指数R~2为0.9965,半数抑制浓度(IC_(50))为0.337μg/L,环境水样的检测限为0.5μg/L,地塞米松阳性样本的加标回收率为75%～105%,样本重复检测结果的变异系数15%。建立的酶联免疫吸附方法具有较好的特异性、回收率和重复稳定性,可用于环境水样中地塞米松残留的检测。     

高效液相色谱荧光检测法测定牛奶中4种氟喹诺酮类药物残留

为了建立一种同时测定牛奶中4种氟喹诺酮类药物(恩诺沙星、环丙沙星、沙拉沙星、二氟沙星)多残留高效液相色谱检测方法,将牛奶中的残留药物用磷酸-甲醇溶液重复提取2次,正己烷除去脂肪净化后浓缩,流动相溶解后用高效液相色谱-荧光检测器测定。结果表明,4种氟喹诺酮类药物在0.01~1.00μg/mL浓度范围内具有良好的线性关系(R=0.999 9),在0.01,0.05,0.10,0.50μg/mL和1.00μg/mL 5个浓度添加水平上,平均回收率为77%~93%,样品的批内和批间变异系数均值分别为5.29%和7.83%,定量限均为10 ng/mL。环丙沙星、恩诺沙星、沙拉沙星检测限均为5 ng/mL,二氟沙星检测限为8 ng/mL。本研究建立的检测方法简单、快速、灵敏度和回收率高,适用于牛奶中4种氟喹诺酮类药物残留检测。     

磺胺甲噁唑抗原合成及其抗体的制备

采用重氮化法将磺胺甲噁唑(SMZ)与人血清白蛋白偶联形成免疫原,免疫大白兔制备多克隆抗体。通过紫外扫描和高效液相色谱分析偶联物,免疫抗原的偶联率为19∶1,改良辛酸-饱和硫酸铵纯化抗体,多克隆抗体效价达1∶105,间接酶联免疫吸附试验建立的SMZ检测的线性范围在0.1ng/mL~10μg/mL之间,50%抑制率检测限为22.53ng/mL,抗体与磺胺甲噁唑交叉反应率为100%,与其他7种磺胺药交叉反应率很低。表明制备的磺胺甲噁唑多克隆抗体具有很高的特异性,可用于SMZ在动物性产品中残留的检测。     

液相色谱-质谱/质谱法检测生鲜乳中雌二醇方法的建立

为了建立生鲜乳中17β-雌二醇的液相色谱-质谱/质谱检测方法,试验采用甲醇提取生鲜乳样品后,经固相萃取柱富集净化,采用液相色谱-质谱/质谱法测定,外标法定量。结果表明:17β-雌二醇在1~50 ng/mL浓度范围内线性关系良好,相关系数为0. 998 3,建立方法的检测限为0. 15μg/kg,定量限为0. 50μg/kg;在1~10 ng/mL加标浓度范围内,方法的回收率为76. 1%~99. 8%,相对标准偏差≤9. 7%。本试验建立方法的样品处理比较简单,使用等度洗脱,提高了方法的灵敏度,明显降低了检测限和定量限,提高了方法的准确度。本试验建立的方法适用于实验室检测牧场生鲜乳中17β-雌二醇残留。     

饲料中沙丁胺醇酶联免疫前处理方法的探究

为探讨酶联免疫法(ELISA)检测饲料中沙丁胺醇(salbutamol,SAL)的前处理方法,试验对提取液的pH、离子强度、有机溶剂浓度及样品稀释倍数等条件进行了考察,选取最适宜的提取液条件对2种不同类型的饲料样本进行提取,用ELISA测定样品中沙丁胺醇的残留量。结果表明,沙丁胺醇标准曲线的IC₅₀值为0.606 ng/mL,线性范围为0.221～1.658 ng/mL,R²=0.9998,提取液的pH为7.5,PBS缓冲液最优浓度为0.06 mol/L,稀释倍数为10倍,2种不同类型的饲料样本的检测限(LOD)为5.0 ng/mL。当沙丁胺醇的添加浓度为5、10 μg/kg时,该方法的添加回收率为77%～110%,变异系数<8%。     

建立水产品中己烯雌酚残留ELISA检测方法

本试验利用己烯雌酚(DES)单克隆抗体,通过优化反应条件,加标回收试验,确定ELISA检测方法相关参数,建立了己烯雌酚残留的酶联免疫吸附(ELISA)检测法。试验结果显示,包被抗原最佳浓度为2μg/mL,DES单克隆抗体最佳稀释倍数为1∶3×104;标准曲线呈线性相关,相关系数R2=0.9956,IC50=1.103 ng/mL,最适检测范围为0.125~128 ng/mL,检测敏感度为0.077 ng/g;批内和批间变异分别为6.14%和7.48%;鳝鱼肌肉组织的加标回收率为77.6%~94.6%;特异性试验结果表明,该单抗与己烯雌酚单羧丙基醚交叉反应率为112.7%,与其它水产禁用药物交叉反应率0.1%。     

恩诺沙星酶联免疫吸附检测方法(ELISA)的建立及其与HPLC方法的比较研究

建立了恩诺沙星残留检测的酶联免疫吸附检测方法(ELISA),并对方法的准确度和灵敏度等指标进行了评价,确定方法的最低检出限(LOD)为1ng/mL,线性范围为1ng/mL-1000ng/mL。以虾肉为样本进行的加标实验表明,在5ng/mL-200ng/mL的加标浓度下,孔间变异系数为9.8%-17.4%,批间变异系数为11.9%-23.4%,添加回收率为60.07%-120.8%。对ELISA和高效液相色谱(HPLC)的检测性能进行了比较,并通过水产品、畜禽等市售食品的同步检测进行了验证,结果表明在实验范围内,二种方法之间呈现较好的相关性,R2=0.9896,这表明建立的ELISA检测方法有较高的可信度是比较高的,可以有效地反映药物的残留情况。     

抗IVM多克隆抗体检测牛组织中IVM残留的研究

用自制的抗伊维茵素（IVM）多克隆抗体检测牛肌肉和肝脏中IVM的残留,将IVM以5．0ng／g、10．0ng,g、20．0ng／g和40．0ng／g的量分别添加至经处理的各空白组织中,用竞争ELISA法测得IVM在肌肉和肝脏中的回收率为93．9％～98．3％,变异系数为2．1％～5．1％,最低检测限为0．94ng／g。     

牛奶中替米考星间接竞争酶联免疫吸附检测法的建立

本研究通过棋盘法优化替米考星抗体、包被原浓度,并考察了最佳包被条件,最佳反应温度、时间和酶标二抗最佳反应时间等,建立了替米考星残留的间接竞争酶联免疫吸附试验(ELISA)并应用到牛奶样本的检测。建立的间接竞争ELISA方法半数抑制浓度(IC₅₀)为2.1 ng/mL,牛奶中替米考星的最低检测限(LOD)为2 μg/L。在5、10和20 μg/L添加浓度下,回收率为79.2%~90.1%,变异系数不高于9.0%。与其他常见的大环内酯类药物无交叉反应。本研究建立的替米考星间接竞争ELISA方法灵敏度达到了残留限量标准要求,为开发可用于牛奶中替米考星的快速检测试剂盒奠定基础。     

Establishment of Indirect Competitive Enzyme-linked Immunosorbent Assay for Tilmicosin in Milk

An indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for detecting tilmicosin residue in milk was developed and applied to milk samples after the determination of dilution of coating antigen and antibody to timicosin by using checkerboard method,and the optimization of coating condition,reaction time and temperature,and reaction time of enzyme-labled secondary antibody.The results showed that the 50% inhibition concentration (IC₅₀) of the indirect competitive ELISA was 2.1 ng/mL and the limit of detection (LOD) of tilmicosin in milk was 2 μg/L.The recoveries of tilmicosin added in milk at 5,10 and 20 μg/L ranged from 79.2% to 90.1% with the coefficients of variation (CV) not higher than 9.0%.The indirect competitive ELISA would not react with other common macrolide drugs.The sensitivity of indirect competitive ELISA developed in the study complied to the maximum residue limit of tilmicosin set by China,and laid the foundation for the test kit of the rapid detection of tilmicosin in milk.     

氯霉素单克隆抗体的制备及ELISA检测方法的建立

本研究旨在建立检测动物源性食品中氯霉素（CAP）残留的间接竞争ELISA（ci-ELISA）方法。在CAP羟基（-OH）位点上引入活性基团羧基（-COOH）得到氯霉素半琥珀酸酯（CAP-HS）;采用混合酸酐法将CAP-HS分别与BSA和OVA偶联合成人工免疫原CAP-HS-BSA和包被抗原CAP-HS-OVA,用CAP-HS-BSA免疫BALB/c小鼠,间接ELISA和ci-ELISA筛选细胞融合备用鼠;应用杂交瘤技术制备抗CAP单克隆抗体;以CAP单克隆抗体为基础、CAP-HS-OVA为检测原建立ci-ELISA方法。结果显示,试验成功筛选获得一株稳定分泌抗CAP抗体的杂交瘤细胞株（2C4）,抗体效价为4.8×10^-5,利用2C4腹水优化得到ci-ELISA最佳试验条件：0.4 μg/mL CAP-HS-OVA 37℃包被2 h;5%猪血清37℃封闭1 h;1：6.4×10⁴ CAP单克隆抗体37℃孵育15 min;1：1 000羊抗鼠酶标二抗（GaMIgG-HRP）37℃孵育30 min;室温显色9 min。绘制的CAP残留ci-ELISA标准曲线为典型的S型,与4参数logit拟合曲线相吻合,半数抑制浓度（IC₅₀）为0.53 ng/mL。添加回收试验结果显示,阴性鱼肉、牛奶的回收率分别为93.3%~96.6%和93.7%~96.8%,批内变异系数分别为2.3%~5.0%和2.2%~4.6%,批间变异系数分别为2.7%~4.1%和2.3%~3.6%。HPLC对比试验结果显示,ci-ELISA与HPLC的测定结果无显著差异。本试验成功建立了CAP的ELISA残留检测方法,该方法具有较高的灵敏度、准确度和精密度,可满足动物源性食品中CAP残留检测要求。     

禽类食品中磺胺二甲嘧啶间接竞争ELISA检测方法的建立

试验采用高碘酸钠法合成了磺胺二甲嘧啶的人工SMZ-BSA和SMZ-OVA,紫外扫描和SDS-PAGE电泳鉴定证明抗原耦联成功。在此基础上,建立间接竞争ELISA法,将磺胺二甲嘧啶添加到鸡蛋和鸡肉样品中,分别用ELISA和高效液相色谱(HPLC)分析方法检测。结果表明,在0.1~50 ng/mL浓度范围内,方法的检测灵敏度IC₁₀=0.18 ng/mL。鸡蛋实际样品的检出限可达到2.0 ng/g,鸡肉实际样品检出限可达到5.0 ng/g。研究建立的ELISA方法与HPLC方法具有较高的相符性,可用于鸡蛋与鸡肉样品中磺胺二甲嘧啶残留含量分析的大量样品的筛查。     

孔雀石绿间接竞争ELISA检测方法的建立

采用无色孔雀石绿(Leucomalachite green,LMG)单克隆抗体建立了水产品中孔雀石绿(Malachite green,MG)残留的间接竞争ELISA(ciELISA)检测方法。结果表明,LMG-McAb最佳稀释倍数为1∶80 000,包被抗原最佳质量浓度为0.80μg/mL;竞争反应时的LMG理想稀释液为40%乙腈水溶液;标准曲线呈线性相关,相关系数R2=0.9823,最适检测范围1 ng/mL~256 ng/mL,最低检测限为1.29 ng/mL,批内和批间变异系数分别为4.307%和4.566%;鳗鱼肉样的平均添加回收率为90%~110%;该检测方法与隐性结晶紫、孔雀石绿、结晶紫的交叉反应(CR%)分别为40.67%、13.50%和5.89%,与其他抗生素无交叉反应。