rChlFN-γ对E.tenella卵囊免疫雏鸡肠道分泌型IgA+细胞数量的影响

本研究初步探讨了重组鸡γ干扰素(rChIFN-γ)对柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)卵囊免疫接种鸡肠道粘膜slgA+细胞数量的影响.分别给7和14日龄雏鸡予以E.tenella孢子化卵囊免疫接种并同时肌注5 000 urChlFN-γ后,于21日龄用同源E.tcnella攻虫.免疫组化检测结果表明rChIFN-γ加强免疫组在21日龄时十二指肠、空肠、盲肠和回肠的绒毛sIgA+细胞数量均高于免疫对照组,在28日龄时,均呈现显著性差异(α=0.05).结果表明rChIFN-γ可提高球虫卵囊免疫雏鸡肠道内的sIgA+细胞数量,增强粘膜免疫水平,具有明显的抗球虫免疫增强效果.     

重组鸡γ干扰素对E.tenella卵囊免疫后肠上皮组织结构的影响

取AA肉鸡，在其7日龄和14日龄时分别给予柔嫩艾美耳球虫（E．tenella）孢子化卵囊进行首免和二免，并同时肌肉注射5000U重组鸡γ干扰素（rChIFN-γ）后，于21日龄以同源E．tenella攻虫。试验结果表明，rChIFN-γ协同球虫活卵囊免疫可减少由于球虫病造成的体质量下降，降低OPG值和肠道病变记分，提高抗球虫指数（ACI）；同时还发现，rChIFN-γ能够显著增加肠道绒毛高度、肠隐窝深度、刷状缘厚度（α=0．05）。由此表明，rChIFN-γ可以减轻由于球虫感染所造成的肠道黏膜损伤，促进肠道的吸收功能，进而减轻球虫病所造成的增重损失，对球虫活卵囊疫苗的免疫有一定的免疫增强效果。     

重组ChIFN-γ增强鸡球虫细胞免疫作用的研究

初步探讨了重组鸡γ干扰素(rChIFN-γ)对鸡体抗球虫细胞免疫的增强效果,分别给7日龄和14日龄雏鸡邓E.tenella孢子化卵囊免疫并同时肌肉注射500U rChIFN-γ后,于21日龄以同源E.tenella攻虫.试验结果显示:rChIFN-γ处理组的试验雏鸡脾脏和胸腺免疫器官指数显著高于免疫对照组(P＜0.05),在21日龄时的淋巴细胞转化水平(1.14)也显著高于卵囊免疫对照组(0.95)(P＜0.05);ABC染色结果表明rChIFN-γ可以显著增加试验雏鸡脾脏和盲肠的CD4 、CD8 T淋巴细胞数量;Griess(NO2-)结果表明:rChIFN-γ处理组在21日龄的NO2-含量(2.77ug/mL)显著高于免疫对照组(2.14 ug/mL)(P＜0.05);溶菌酶(LSZ)试验表明,21日龄时rChIFN-γ处理组的LSZ含量(22.80ug/mL)显著高于免疫对照组(19.79 ug/mL)(P＜0.05).结果提示rChIFN-γ具有抗球虫免疫的增强效果,能显著提高鸡体抗球虫保护性细胞免疫水平.     

重组鸡干扰素对E.tenella卵囊免疫后肠上皮组织结构的影响

取AA肉鸡,在其7日龄和14日龄时分别给予柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)孢子化卵囊进行首免和二免,并同时肌肉注射5 000 U重组鸡γ干扰素(rCh IFN-γ)后,于21日龄以同源E.tenella攻虫。试验结果表明,rCh IFN-γ协同球虫活卵囊免疫可减少由于球虫病造成的体质量下降,降低OPG值和肠道病变记分,提高抗球虫指数(AC I);同时还发现,rCh IFN-γ能够显著增加肠道绒毛高度、肠隐窝深度、刷状缘厚度(=α0.05)。由此表明,rCh IFN-γ可以减轻由于球虫感染所造成的肠道黏膜损伤,促进肠道的吸收功能,进而减轻球虫病所造成的增重损失,对球虫活卵囊疫苗的免疫有一定的免疫增强效果。     

鸡胚接种柔嫩艾美耳球虫和堆形艾美耳球虫活卵囊的免疫保护试验

给18日龄鸡胚接种一定剂量的柔嫩艾美耳球虫(Eim eria tenella)和/或堆形艾美耳球虫(E.acervulina)孢子化卵囊,出雏后在无球虫环境中笼养,1~10日龄每天收集各组粪便样本,计数克粪便卵囊数(OPG),并于14日龄时以大剂量同源孢子化卵囊攻虫,以相对增重率(RWG)、饲料转化率(FCR)、相对卵囊产量(ROP)评价免疫保护效果。结果显示,以E.tenella或E.acervulina卵囊免疫18日龄鸡胚,其卵囊排出的潜隐期及达到峰值的时间与1日龄雏鸡接种组相一致,有相似的排卵囊曲线,提示其诱导免疫的建立是在出雏后开始建立的。攻虫后各免疫组的RWG由攻虫对照组的31.9%~51.7%提高到了76.5%~83.6%,RCR由攻虫对照组的4.11~4.89改善为2.72~2.96,ROP降至4.7%~23.5%。结果表明以一定剂量E.tenella和E.acervulina卵囊单独或混合经羊膜腔免疫18日龄鸡胚都可以建立起针对出雏后14日龄同源攻虫的良好免疫保护力。比较混合免疫E.tenella和E.acervulina卵囊组与单一接种E.tenella或E.acervulina卵囊组的免疫效果发现,混合免疫组的各项指标均稍优于后者。     

堆型艾美耳球虫pcDNA3-3-1E重组表达质粒的免疫保护性

将堆型艾美耳球虫保定株裂殖子3-1E基因,插入到真核表达载体pcDNA3.1（＋）中,构建重组表达质粒pcDNA-3-1E,用碱裂解法大量提取重组表达质粒,纯化后免疫接种1周龄雏鸡。分别设高（100μg）、中（50μg）、低（25μg）3个剂量组,同时设活卵囊接种组、非免疫感染组和健康对照组。在7日龄时首免,14日龄加强免疫,1周后用2.5×105个E.acervulina保定株球虫孢子化卵囊进行攻毒试验。结果显示50μg的剂量可使试验鸡产生较强的抗球虫效果,攻虫鸡的卵囊产量下降67.67%,肠道病变记分降低66.96%,并使鸡的相对增重率达88.36%,ACI值为176.06。     

妥曲珠利对柔嫩艾美耳球虫作用峰期的初步研究

E．tenella球虫又称盲肠球虫，主要侵害鸡的盲肠，一般感染15～35日龄的雏鸡。一旦鸡吞食了E．tenella球虫卵囊，由于球虫的高繁殖性能，随之有众多的卵囊排出并污染环境，导致球虫病暴发。E．tenella球虫发育过程包括3个生殖阶段，孢子生殖在外界环境中进行，其它两种生殖阶段在鸡体内完成。随鸡粪便排到外界环境中的球虫卵囊称为未孢子化卵囊，不具有感染力。     

免疫增强剂对鸡球虫体液免疫指标的影响

艾维茵雏鸡于7日龄和14日龄时分别以1000、5000个E.Tenella卵囊／只免疫两次,并于首免时注射卡介苗（BCG）或黄芪多糖（APS）1次,21日龄以5万和25万卵囊攻击。试验鸡于7、14、21日龄和28日龄采血,ELISA测定血清中IgG、IgM抗体的含量。结果表明：BCG具有促进球虫免疫鸡体液免疫应答的作用,而APS的作用效果不明显。     

鸡柔嫩艾美耳球虫海南株SO7基因表达产物的免疫保护效果观察

为研究鸡柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella,E.tenella)海南株SO7基因原核表达产物对E.tenella攻击的免疫保护效力,分别于8和16日龄采用SO7基因可溶性重组蛋白和包涵体重组蛋白经肌肉注射两次免疫文昌鸡公雏,同时设立攻虫对照组和空白对照组;其中,免疫组和攻虫对照组雏鸡于27日龄接种5×10~4个E.tenella卵囊,观察其诱导产生的保护力。结果显示,与攻虫对照组相比,SO7可溶性蛋白组雏鸡的相对卵囊产量降低了82.9%,攻虫至试验结束的增重增加了76.3%,盲肠病变减少了29.8%;SO7包涵体蛋白组雏鸡的相对卵囊产量降低了60.4%,攻虫至试验结束鸡增重增加了42%,盲肠病变减少了18.7%。结果表明,E.tenella海南株SO7基因在大肠杆菌中的表达产物对鸡柔嫩艾美耳球虫的攻击有一定的免疫保护作用,且SO7可溶性蛋白的抗球虫效力优于包涵体蛋白。     

柔嫩艾美耳球虫杨凌株3-1E基因表达产物的初步免疫效果研究

用柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella子孢子表面抗原基因原核细胞表达产物免疫雏鸡,观察其对球虫攻击的免疫保护作用.将可溶性重组蛋白和包涵体重组蛋白经肌肉注射分别于7日龄、14日龄两次免疫罗曼小公雏,同时设攻虫对照组和空白对照组,于第2次免疫后1周(28日龄)用1 ×104个E.tenella卵囊进行攻毒,观察其诱导产生的保护力.结果表明,3-1E可溶性蛋白组免疫无论从卵囊计数、盲肠病变计分和相对增重均优于包涵体免疫组.说明3-1E基因在大肠杆菌中的表达产物对鸡柔嫩艾美耳球虫的攻击有一定的免疫保护作用.     

巨型艾美耳球虫免疫对其它几种球虫的血清学反应和临诊抗感染交叉保护力的研究

为探讨鸡艾美耳球虫种间交叉免疫这一尚有争议的问题,本文用ELISA方法检测了巨型艾美耳球虫（Eimeriamaxima）免疫血清与其它主要虫种（柔嫩艾美耳E．tenella、毒害艾美耳E．necatrix及堆型艾美耳球虫E．acervulina）抗原的血清学反应,同时观察了E．maxima免疫（1×104个卵囊/只）鸡遭受上述虫种大剂量（1×105个卵囊／只）强毒攻击后的死亡率和肠道病变,对临诊交叉保护力进行了评估。结果表明,E．maxima免疫血清与E．tenellaE．acervulina可溶性抗原有不同程度的交叉反应;E．maxima免疫后用E．tenella,E.acervulina,E.necatrix大剂量强毒攻击,分别有70％、40％、6％的鸡获得了完全保护;25％、60％、27％的鸡获得了部分保护。     

鸡柔嫩艾美耳球虫生殖细胞特异性蛋白的免疫保护效果评价

为探讨鸡柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)生殖细胞特异性蛋白(HAP2)对球虫感染的免疫保护作用,将HAP2重组蛋白(rEtHAP2)加弗氏完全佐剂或弗氏不完全佐剂免疫雏鸡后,用E. tenella孢子化卵囊感染雏鸡,以雏鸡增重效果、卵囊排出量、肠道病变记分、血清抗体水平、淋巴细胞转化水平,评估rEtHAP2的免疫保护作用,并设PBS免疫对照组、正常饲养对照组。结果显示:rEtHAP2免疫组雏鸡的平均体重、日增重、血清抗体水平、淋巴细胞转化水平,均显著高于PBS免疫对照组(P0.05);卵囊排出量,肠道病变记分则显著低于PBS免疫对照组(P0.05);抗球虫指数ACI值为176.18,保护效果良好。研究表明生殖细胞特异性蛋白HAP2对柔嫩艾美耳球虫感染具有良好的免疫保护作用,可成为柔嫩艾美耳球虫新型疫苗的候选抗原。     

柔嫩艾美耳球虫AMA1基因DNA疫苗的免疫保护效果

本研究旨在评价表达柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)顶膜抗原1(Apical membrane antigen 1,Et AMA1)基因的DNA疫苗对雏鸡柔嫩艾美耳球虫人工感染的免疫保护效果。将Et AMA1基因和鸡IFN-γ基因插入真核表达载体p CAGGS中,分别构建了真核表达重组质粒p CAGGS-Et AMA1和p CAGGS-Et AMA1-IFN-γ。将重组质粒p CAGGS-Et AMA1转染进293T细胞中,经间接免疫荧光和Western blot实验鉴定,观察其在体外表达情况。将p CAGGS-Et AMA1和p CAGGS-Et AMA1-IFN-γ于7日龄和14日龄腿部肌肉注射免疫雏鸡,21日龄人工感染1×104个柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊,第29日龄时处死试验鸡,以平均增重、卵囊产量和病变记分来评价重组质粒的免疫保护效果。结果显示,p CAGGS-Et AMA1转染的293T细胞出现明显的红色荧光;两种真核表达重组质粒免疫组鸡的平均增重与未攻虫组的平均增重差异不显著,不具有统计学意义,而未免疫攻虫组则与未攻虫组在增重方面差异具有显著统计学意义;免疫组鸡相较于未免疫攻虫组在病变记分方面显著下降;免疫组的卵囊减少率分别为67.43%和72.89%;p CAGGSEt AMA1-IFN-γ组在增重、盲肠病变记分和卵囊减少率方面都优于p CAGGS-Et AMA1组,但差异不具有统计学意义。表明构建的2种重组质粒对雏鸡柔嫩艾美耳球虫感染有一定的免疫保护效果。     

柔嫩艾美耳球虫Serpin基因的原核表达及其免疫保护效果研究

为评价Serpin基因重组表达产物对预防鸡柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella,E.tenella)感染的效果,克隆和表达E.tenella Serpin基因,对表达产物进行初步纯化和复性,制备免疫原.设计了重组蛋白肌肉注射组、重组蛋白口服组、重组蛋白滴鼻组3个试验组以及红、白对照组.分别于7、14和28日龄对雏鸡进行3次免疫,35日龄时用3×104个E.tenella孢子化卵囊攻虫,第7天末宰杀,对各组的存活率、相对增重率、卵囊减少率、ACI等指标进行统计分析.结果表明,各免疫组的平均增重与红对照组相比均有显著增加(P＜0.05),其中以重组蛋白肌肉注射组增重最多,相对增重率为66.73％,优于其他免疫组;各免疫组卵囊产量较红对照组均有显著的下降,其中重组蛋白肌肉注射组卵囊减少率最高,为30.01％;各免疫组ACI均明显高于红对照组,其中以重组蛋白口服组最高,但仍低于160,暗示Serpin蛋白并不是一个理想的球虫疫苗保护性抗原.     

柔嫩艾美耳球虫YL株的生物学特性

用1×103个柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)杨凌株(YL)孢子化卵囊感染7日龄雏鸡,对其潜隐期、最早孢子化时间、卵囊形态及大小、孢子囊大小等生物学特性进行测定。另外,对9、11及13日龄的鸡分别经口感染1×103个E.tenella YL株孢子化卵囊,对肠道病变记分、平均增重、死亡率、血便排放情况等几项指标进行测定,研究同一剂量E.tenellaYL株孢子化卵囊对不同日龄鸡的致病性。结果表明,11日龄的鸡感染后相对增重减少17.7%,病变记分平均达3.0分,9日龄组和13日龄组相对增重分别降低12.0%和17.3%,病变记分分别为2.5分和2.6分。同时测得E.tenella YL株的潜隐期为110h,最短孢子化时间为17h,卵囊大小为22.3~27.7μm×17.1~23.0μm,孢子囊大小为9.9~13.6μm×6.2~7.4μm。     

柔嫩艾美尔球虫（E．tenella）感染鸡IsG生成细胞及血清IgG变化

为了探明鸡球虫保护性免疫机制，通过人工复制的鸡球虫病鸡，利用免疫组化技术和斑点酶联免疫吸附试验（Dot-ELISA），分别检测了柔嫩艾美耳球虫（E．tenella）初次感染雏鸡后，盲肠局部和免疫器官中IgG生成细胞数的动态变化，循环血液中特异性IgG水平的动态变化；雏鸡母源抗体的动态变化和不同抗体水平雏鸡的抗球虫能力。结果表明：（1）攻毒后雏鸡盲肠粘膜、脾脏、法氏囊、盲肠扁桃体中的IgG生成细胞早于第2～3d（d）开始增殖，在第9～12d达到峰值，随后即开始下降，盲肠扁桃体中的IgG生成细胞数在第22d仍高于对照组。（2）雏鸡感染E．tenella后第6d即可在循环血液中检测到特异性IgG，于第18d达到峰值，第30d降至感染后第7d时的水平。（3）特异性母源抗体IgG水平高的雏鸡，抗球虫水平高。雏鸡母源抗体IgG水平随日龄增长逐渐下降，同时雏鸡的抗球虫水平也随之降低，母源抗体IgG水平与抗球虫能力有明显的正相关性。     

鸡球虫病四价活疫苗对毒害艾美耳球虫和柔嫩艾美耳球虫的免疫效果观察

为评价一种商品化鸡球虫病四价活疫苗[柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)、毒害艾美耳球虫(E.necatrix)、巨型艾美耳球虫和堆型艾美耳球虫]对E.necatrix和E.tenella的免疫保护效果,本研究基于试验鸡血便记分、存活率、相对增重率、病变值、卵囊值及抗球虫指数(ACI)等指标对其免疫效果进行检测.结果表明,免疫攻虫组抗E.necatrix和E.tenella的ACI分别为157.3和135.6,均低于160,表明该球虫疫苗抗两种球虫的效果均为低效.然而,免疫攻虫组鸡血便数量、血便记分、增重、卵囊产量和病变记分等指标均优于阳性对照组.综合指标显示,该疫苗对E.necatrix和E.tenella具有一定的免疫保护力,但单纯采用疫苗并不能够达到防控鸡球虫病的目的.     

不同剂量和免疫次数对鸡毒害艾美耳球虫免疫保护力的影响

以相对增重率(RBWG)、饲料转化率(FCR)和盲肠相对卵囊产量(ROP)为指标,评价了1次或2次分别以1×103个或3×103个毒害艾美耳球虫(E.necatrix)孢子化卵囊(SO)/鸡剂量免疫接种后特异性免疫力的产生和持续时间。笼养岭南黄肉雏鸡于3日龄1次或3日龄和10日龄2次分别接种不同剂量的E.necatrix SO后,于17日龄(2次免疫组为24日龄)、34日龄和50日龄时以14×104SO/鸡剂量的同源卵囊攻虫,结果表明,免疫后2周卵囊接种鸡已产生坚强免疫力,1次免疫接种者(17日龄)高、低2个不同剂量组的RBWG、FCR和ROP分别为95.5%、2.32、24.54%和101.4%、2.32、21.1%;而2次免疫组(24日龄)的上述指标则分别为106.5%、2.44、9.3%和98.2%、2.38、7.48%。至34日龄和50日龄攻虫时,这些指标均有不同程度的下降,且随着时间延长,下降更为明显,但2次免疫处理组的这些指标均明显优于1次免疫者;同一次处理的不同剂量组间无明显差异。结果揭示,雏鸡口服免疫接种一定剂量的E.necatrix孢子化卵囊后可迅速诱导鸡体特异性免疫力的产生,但免疫保护力在笼养条件下持续时间较短。     

京海黄鸡杂交配套系亲本两种球虫疫苗免疫效果的比较

为评价两种球虫疫苗对京海黄鸡杂交配套系亲本良凤鸡(BB鸡)和岭南黄鸡(FF鸡)的免疫效果,本研究对9日龄实验鸡接种两种疫苗[500个孢子化卵囊(V1组)、正典球虫苗(V2组)],24 d后攻柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)2.5万个/只,攻虫后8 d检测各项评价指标。结果显示:攻虫后临床表现、盲肠病变、相对增重率及抗球虫指数(ACI),BB鸡优于FF鸡,V1组优于V2组;两鸡群血浆中过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)的含量V1组均显著高于V2组(p0.05);BB鸡γ干扰素(IFN-γ)含量V1组显著高于V2组(p0.05);FF鸡血浆中β胡萝卜素(β-C)含量V1组显著高于V2组(p0.05)。综合分析表明,BB鸡E.tenella抗性优于FF鸡,500个E.tenella活卵囊免疫效果优于正典球虫疫苗。     

不同给药方案对鸡现场球虫免疫的影响

20日龄海赛克斯雏鸡连续50余天经垫料自然免疫接种一定量的球虫卵囊,同时采用不同的给药方案,饲喂含抗球虫药的饲料,72日龄时用大剂量卵囊(8×10~4)攻击。根据试验鸡的增重、盲肠病变评分和盲肠卵囊数等指标,评定不同给药方案对鸡球虫免疫的影响。结果表明:单独使用作用于球虫生活史早期的聚醚类离子载体抗生素,会严重抑制鸡对球虫的免疫力。聚醚类离子载体抗生素与作用于球虫生活史后期的化学合成药联合用药或低剂量配合用药,则对免疫无影响。