2-甲氧基肉桂醛缓解猪IPEC-J2细胞氧化损伤的效果研究

本试验旨在研究2-甲氧基肉桂醛(2-MCA)对猪肠上皮细胞IPEC-J2氧化损伤的保护效果。利用过氧化氢(H₂O₂)建立IPEC-J2细胞氧化损伤模型；通过CCK8法确定2-MCA缓解H₂O₂处理后IPEC-J2细胞适宜的浓度与处理时间；随后通过试剂盒法测定细胞上清乳酸脱氢酶(LDH)、应激产物丙二醛(MDA)、氧自由基(ROS)、抗氧化指标总抗氧化能力(T-AOC)、过氧化氢酶(CAT)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)和谷胱甘肽(GSH)活性；通过荧光定量PCR检测IPEC-J2细胞内CAT、GPx-1、HO-1、NQO-1、SOD和Nrf2基因表达量。结果显示：(1) 1 000μmol/L H₂O₂处理4 h时，细胞存活率为50%左右，细胞上清LDH活性增加(P<0.01)，表明氧化应激模型建立成功；(2) 12、24、48 h时2.5～40μmol/L 2-MCA处理细胞均可缓解H₂O₂引起的存活率...     

白屈菜碱对H2O2诱导的IPEC-J2细胞炎症损伤的预防作用

集约化养殖模式造成猪肠道炎症损伤日趋严重,致使小肠上皮屏障功能受损,影响猪群健康度。为研究白屈菜碱(chelidonine)对猪小肠上皮细胞炎症损伤的保护作用,本试验使用H₂O₂构建猪小肠上皮细胞系(IPEC-J2 cells)炎症损伤模型,采用MTT法筛选适宜的白屈菜碱浓度,采用ELISA法检测炎症因子(IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α、TGF-β1)以及NO含量,采用qPCR法和Western blot检测上述炎症因子及iNOS的mRNA和蛋白表达水平。结果发现,在2.5～100.0 mg/L质量浓度范围内,白屈菜碱对IPEC-J2细胞无毒性;2.5、5.0、10.0 mg/L白屈菜碱可显著恢复H₂O₂诱导的IPEC-J2细胞存活率下降(P<0.05)。经H₂O₂造模后,NO含量极显著升高(P<0.01)、IL-10含量显著降低(P<0.05)、其余炎症因子含量显著升高(P<0.05),iNOS及上述炎症因...     

二苯乙烯苷对成骨细胞抗氧化损伤的保护机制

为探索二苯乙烯苷(THSG)保护成骨细胞抗氧化损伤的作用机制，本试验使用不同浓度THSG预处理MC3T3-E1成骨样细胞1 h,加入0.3 mmol/L过氧化氢(H₂O₂)共同培养细胞，采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞生存活力；实时荧光定量聚合酶链式反应(FQ-PCR)法检测细胞Bcl-xL/Bcl-2相关死亡启动因子(Bad)、骨保护素(OPG)、核因子κB受体活化因子配体(RANKL)和β-连环蛋白(β-catenin)mRNA表达水平；Western blot法检测细胞OPG和β-catenin蛋白水平。结果显示，与对照组相比，H₂O₂组细胞生存活力显著下降(P<0.05),Bad和RANKL mRNA表达水平显著上升(P<0.05),OPG和β-catenin mRNA和蛋白水平均显著下降(P<0.05);与H₂O₂组相比，THSG(10^-4mg/mL)保护组细胞生存活力显著上升(P<0.05),Bad和...     

丝裂原活化蛋白激酶抑制剂对氧化应激鸭小肠上皮细胞屏障功能的影响

本试验旨在研究丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路在应激鸭肠上皮屏障功能中的调节作用。取原代鸭小肠上皮细胞，H₂O₂诱导氧化应激(终浓度50μmol/L)。试验分为空白对照组(A组)、阳性对照组(50μmol/L H₂O₂,B组)和氧化应激基础上添加丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)抑制剂组(10μmol/L SB203580,C组)。使用CCK-8测量细胞活力，细胞电阻仪检测细胞跨膜电阻(TEER)，实时荧光定量-聚合酶链式反应(q-PCR)检测氧化应激相关基因和紧密连接蛋白mRNA的表达。结果表明：(1)与A组相比，B组细胞活力下降到80%左右(P<0.05)；与B组相比，C组细胞活力提高(P<0.05)。(2)与A组相比，B、C组TEER降低(P<0.05),C组TEER高于B组(P<0.05)。(3)与A组相比，B组Nrf2/HO-1相对表达量升高(P<0.05),C组Nrf2/HO-1相对表达量低于B组(P<0.05)。(4)与A组相比，B组claudin...     

根皮素对过氧化氢诱导的牛脂肪源性干细胞氧化应激的缓解作用

本研究旨在探究根皮素(PT)对过氧化氢(H₂O₂)诱导的牛脂肪源性干细胞(ADSCs)氧化应激和凋亡的影响。试验选取牛脂肪组织,使用Ⅳ型胶原酶分离牛ADSCs,传代培养后利用免疫荧光对牛ADSCs表面标记蛋白CD29、CD44、CD73及Vimentin进行鉴定。用不同浓度(0、100、200、500、1000μmol/L)的过氧化氢(H₂O₂)处理牛ADSCs 24 h,通过CCK-8法检测细胞存活率,筛选构建牛ADSCs氧化应激模型的适宜H₂O₂浓度。利用CCK-8法检测不同浓度(0、10、50、100μmol/L)PT作用4 h后牛ADSCs的存活率,确定PT对牛ADSCs进行预保护的适宜浓度。随后先用不同浓度(0、10、50μmol/L)PT预处理牛ADSCs 4 h,对牛ADSCs进行预保护;再利用500μmol/L H₂O₂处理牛ADSCs 24 h。采用试剂盒检测牛ADSCs内氧化应激相关指标,包括丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性;荧光探针2′,7′-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)测定细胞内活性氧(ROS)含量;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞凋亡相关基因B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)及半胱天冬酶-3(Caspase-3)mRNA相对表达量。结果显示:500μmol/L的H₂O₂能引起牛ADSCs存活率极显著下降(P<0.01),可以用来诱导其发生氧化应激。10和50μmol/L的PT不会对牛ADSCs的存活率产生显著影响(P>0.05),而100μmol/L的PT会引起牛ADSCs的存活率显著下降(P<0.05),因此后续试验选用10、50μmol/L的PT处理牛ADSCs进行4 h的预保护。免疫荧光检测结果显示,牛ADSCs中CD29、CD44、CD73及Vimentin蛋白表达呈阳性;氧化应激相关指标检测结果显示,与空白组(0μmol/L PT预保护,0μmol/L H₂O₂处理)相比,500μmol/L H₂O₂极显著增加牛ADSCs内MDA含量(P<0.01),极显著降低牛ADSCs内SOD活性(P<0.01),说明500μmol/L H₂O₂处理牛ADSCs引起了氧化应激。与氧化应激组(0μmol/L PT预保护,500μmol/L H₂O₂处理)相比,10或50μmol/L PT与500μmol/L H₂O₂共处理可以显著减少牛ADSCs内MDA含量(P<0.05),50μmol/L PT与500μmol/L H₂O₂共处理可以显著增加牛ADSCs内SOD活性(P<0.05),说明适宜浓度的PT可以缓解H₂O₂诱导的牛ADSCs氧化应激。ROS染色结果显示,10、50μmol/L PT与500μmol/L H₂O₂共处理均可极显著降低牛ADSCs内ROS含量(P<0.01),同样说明适宜浓度的PT可以缓解H₂O₂诱导的牛ADSCs氧化应激。此外,qRT-PCR检测结果显示,与空白组相比,500μmol/L H₂O₂显著增加牛ADSCs内促凋亡基因Bax和Caspase-3 mRNA相对表达量(P<0.05),极显著减少牛ADSCs内抗凋亡基因Bcl-2 mRNA相对表达量(P<0.01),说明500μmol/L H₂O₂处理可以引起牛ADSCs凋亡。而10或50μmol/L PT与500μmol/L H₂O₂共处理时,牛ADSCs内凋亡相关基因mRNA相对表达量与氧化应激组没有显著差异(P>0.05),说明在本试验的条件下,PT不会缓解H₂O₂诱导的牛ADSCs凋亡。综上所述,适量的PT可以有效缓解H₂O₂诱导的牛ADSCs氧化应激。     

三种天然植物水溶物对H2O2损伤草鱼原代肝细胞的保护作用

为了探讨单一天然植物水溶物和复合植物水溶物对H₂O₂损伤草鱼原代肝细胞的修复作用,以诃子（terminalia chebula retz,TCR）、天然植物复合物1（RAT）、天然植物复合物2（JLT）水溶物冻干粉为试验材料,维生素C（VC）作为对照,以草鱼（Ctenopharyngodon idellus）离体培养的原代肝细胞为试验对象,利用H₂O₂建立损伤模型后分别添加含有0.1 mg/mL的TCR、RAT和JLT的细胞培养液培养24 h后检测细胞状态。结果表明：RAT、TCR和VC组与H₂O₂组相比细胞活力显著提高（P<0.05）。与H₂O₂组相比,RAT、TCR和VC组过氧化氢酶（CAT）活性均极显著上升（P<0.01）,天然植物水溶物组和VC组谷胱甘肽（GSH）含量极显著升高（P<0.01）,丙二醛（MDA）含量显著下降（P<0.05）,超氧化物歧化酶（SOD）活性极显著下降（P...     

As2O3对大鼠BRL-3A和RH-35细胞TRβ1和Cyclin D1因子的影响

为了探明As₂O₃对大鼠肝脏细胞系BRL-3A和肝癌细胞系RH-35中TH信号通路的关键调控因子TRβ1和TRβ1的下游因子Cyclin D1的影响，采用qRT-PCR、Western blot技术检测2种细胞中TRβ1和Cyclin D1的基因和蛋白表达变化。结果显示：(1)与对照组相比，As₂O₃作用BRL-3A细胞12 h, 1.563μmol/L组TRβ1蛋白表达显著降低(P<0.01)、Cyclin D1表达显著升高(P<0.01);6.250μmol/L组TRβ1表达明显降低(P<0.05)、Cyclin D1表达显著降低(P<0.01)。As₂O₃作用24 h, 1.563μmol/L组TRβ1蛋白表达明显升高(P<0.05);6.250μmol/L组TRβ1显著升高(P<0.01),Cyclin D1的表达显著降低(P<0.01)。As₂O₃作用48 h,...     

维生素E对H2O2诱导的奶牛乳腺上皮细胞氧化损伤及紧密连接相关基因表达的影响

试验通过研究维生素E （VE）对H₂O₂诱导的奶牛乳腺上皮细胞（MAC-T cells）氧化损伤及紧密连接相关基因表达的影响,旨在揭示维生素E对缓解奶牛乳腺细胞氧化应激的作用。试验设对照组（完全培养基处理组）、H₂O₂组和H₂O₂＋VE组。利用MTT法检测奶牛乳腺细胞存活率,比色法检测奶牛乳腺细胞培养液中超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT）活性、丙二醛（MDA）和活性氧（ROS）含量;通过实时荧光定量PCR检测紧密连接基因ZO-1、occludin、claudin-1的相对表达量。结果显示,与对照组相比,H₂O₂组的奶牛乳腺上皮细胞存活率显著下降（P<0.05）,ROS和MDA含量显著增加（P<0.05）,SOD和CAT活性显著下降（P<0.05）;与H₂O₂组相比,H₂O₂＋20 μmol/L VE组的细胞存活率显著上升（P<0.05）,ROS和MDA含量显著下降（P<0.05）,SOD和CAT活性显著增加（P<0.05）。此外,与对照组相比,H₂O₂组极显著抑制了紧密连接基因的相对表达量（P<0.01）;而与H₂O₂组相比,添加维生素E极显著缓解了H₂O₂对紧密连接基因相对表达的抑制作用（P<0.01）。本研究结果证明,维生素E不仅能够减轻H₂O₂诱导的奶牛乳腺上皮细胞氧化损伤,还能缓解H₂O₂对紧密连接基因相对表达的抑制作用。     

燕麦种胚细胞和线粒体AsA-GSH循环对外源H2O2引发的响应

本研究探讨了外源H₂O₂引发后，燕麦(Avena sativa)种胚细胞和线粒体抗坏血酸(Ascorbic acid, AsA)-谷胱甘肽(Glutathione, GSH)循环的抗氧化性能的变化规律，以期为植物种子的长期贮藏技术研究提供理论依据。试验以燕麦种子为材料，用浓度为0,0.96,1.92,3.84和7.68 mol·L^-1的H₂O₂引发12 h后，分析其种胚细胞和线粒体脂质过氧化水平、AsA-GSH循环中酶促和非酶促抗氧化物质的变化规律。结果表明：燕麦种胚细胞和线粒体内AsA和GSH含量会随外源H₂O₂浓度的增加而显著降低(P<0.05),其AsA-GSH循环的酶活性、脱氢抗坏血酸和氧化型谷胱甘肽含量均呈先升后降的趋势，其H₂O₂和丙二醛含量显著升高(P<0.05),燕麦种子发芽率则显著降低(P<0.05)。燕麦种胚细胞和线粒体AsA-GSH循环的抗氧化功能变化...     

黄芩苷通过抑制核因子-κB和激活核因子-E2相关因子2信号通路缓解脂多糖诱导的小鼠空肠炎症和氧化应激

本试验旨在探讨黄芩苷对脂多糖(LPS)诱导的小鼠空肠炎症和氧化应激的缓解作用及其分子机制。将36只小鼠随机分为对照组、阴性对照组、模型组以及低、中、高剂量黄芩苷组,每组6只。适应性生长7 d后开始试验。对照组小鼠不作处理,阴性对照组和模型组小鼠每天灌胃0.2 mL磷酸盐缓冲液(PBS),黄芩苷组小鼠每天灌胃黄芩苷药液0.2 mL(根据小鼠体重计算黄芩苷用量,低剂量组为100 mg/kg BW,中剂量组为200 mg/kg BW,高剂量组为400 mg/kg BW),连续灌胃7 d,第7天给模型组、黄芩苷组小鼠腹腔注射0.2 mL LPS(3.5 mg/kg BW)。注射LPS 24 h后处死小鼠,取空肠进行形态学观察,检测空肠中炎性因子mRNA表达量和含量以及核因子-κB(NF-κB)和核因子-E2相关因子2(Nrf2)/血红素氧合酶-1(HO-1)信号通路关键蛋白表达量的变化。结果显示:相比于对照组,模型组小鼠空肠组织绒毛结构损伤,绒毛高度与隐窝深度比值显著降低(P<0.05),空肠中Toll样受体4(TLR4)的mRNA表达量显著升高(P<0.05),炎性因子[白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]的mRNA表达量和含量显著升高(P<0.05),P65的蛋白表达量、磷酸化NF-κB抑制蛋白α(P-IκBα)/NF-κB抑制蛋白α(IκBα)和磷酸化P65(P-P65)/P65比值显著升高(P<0.05),超氧化物歧化酶(SOD)活性和HO-1的蛋白表达量显著降低(P<0.05)。相对于模型组,黄芩苷组小鼠空肠组织结构得到明显改善,绒毛高度与隐窝深度的比值显著升高(P<0.05),TLR4和炎性因子的mRNA表达量显著下降(P<0.05),P-65、P-IκBα的蛋白表达量显著降低(P<0.05);高剂量黄芩苷组空肠中SOD的活性显著升高(P<0.05);中、高剂量黄芩苷组空肠中HO-1和醌氧化还原酶-1(NQO-1)的mRNA表达量显著升高(P<0.05),HO-1和胞核Nrf2的蛋白表达量显著升高(P<0.05)。综上可知,在LPS构建的小鼠空肠炎症模型中,黄芩苷在适宜剂量内可以通过抑制NF-κB信号通路发挥抗炎症作用,通过激活Nrf2信号通路发挥抗氧化作用,推荐剂量为200 mg/kg BW。     

硫氧还蛋白对过氧化氢诱导的BRL-3A细胞损伤的保护作用

本试验利用不同浓度过氧化氢（H₂O₂）作用于BRL-3A大鼠肝细胞,用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测BRL-3A细胞存活数量以确定H₂O₂最适损伤浓度。试验随机分为正常对照组、H₂O₂处理组和硫氧还蛋白(2.5和5 μmol/L) 预处理组,用脂质过氧化物丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）试剂盒测定细胞的氧化应激变化。结果显示1000 μmol/L H₂O₂对BRL-3A细胞增殖具有显著的抑制作用（P<0.05）;2.5 μmol/L 硫氧还蛋白对H₂O₂损伤的BRL-3A细胞具有保护作用,能显著抑制H₂O₂诱导的BRL-3A细胞损伤产生MDA（P＜0.05）,并显著增加细胞SOD及CAT的活性（P＜0.05）,从而保护肝细胞。本试验结果表明,硫氧还蛋白对H₂O₂诱导BRL-3A细胞的氧化应激损伤具有保护作用。     

氧化应激通过Fas/FasL信号通路调控奶牛子宫内膜细胞凋亡

胚胎早期死亡及流产严重影响母牛的繁殖性能,造成极大的经济损失。本研究利用不同浓度双氧水(H₂O₂)处理子宫内膜细胞6 h,通过流式细胞仪、酶标仪分别进行细胞内活性氧(ROS)水平、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性以及还原型谷胱甘肽(GSH)与氧化型谷胱甘肽(GSSG)比值检测,建立子宫内膜细胞氧化应激模型。在此基础上,利用流式细胞仪检测细胞凋亡和生长周期,利用荧光定量RT-PCR和Western blot检测Fas/FasL信号通路关键基因的mRNA和蛋白表达水平,并利用慢病毒介导的RNA干扰(RNAi)抑制子宫内膜细胞中Fas基因表达,进一步验证Fas/FasL凋亡通路是否参与氧化应激诱导的子宫内膜细胞凋亡。所有试验都重复3次以上。结果发现,利用200 μmol·L^-1 H₂O₂处理子宫内膜细胞6 h,细胞内ROS阳性水平急剧增加(P < 0.05),SOD和CAT活性以及GSH与GSSG比值都显著降低(P < 0.05),说明H₂O₂处理对子宫内膜细胞造成氧化应激损伤。在此处理条件下,生长周期中S期比例显著降低(P < 0.05),凋亡比例显著提高(P < 0.05);Fas/FasL凋亡通路中关键基因Fas、Caspase 8和Caspase 3的mRNA表达水平显著升高(P < 0.05);培养液中FasL浓度以及Fas、Caspase 8和Caspase 3蛋白表达水平显著升高(P < 0.05)。进一步研究发现,抑制Fas基因表达在一定程度上降低了氧化应激诱导的细胞凋亡比例以及Fas/FasL凋亡通路中关键基因的表达水平。总之,本研究结果表明,氧化应激通过激活Fas/FasL信号通路促进奶牛子宫内膜细胞凋亡,这为解释氧化应激对子宫内膜细胞的不利影响提供了新的见解。     

奶牛子宫内膜上皮细胞氧化应激模型的建立及奶牛脂肪间充质干细胞对其迁移的影响

【目的】探讨奶牛脂肪间充质干细胞（bovine adipose-derived mesenchymal stem cells,bAD-MSCs）对氧化应激条件下奶牛子宫内膜上皮细胞迁移能力的影响。【方法】使用0、5、25、50、100、200 μmol/L H₂O₂处理奶牛子宫内膜上皮细胞2、4、6、8、12 h后,通过MTT试验检测细胞存活率、流式细胞术检测细胞内活性氧（ROS）水平来筛选H₂O₂诱导奶牛子宫内膜上皮细胞氧化应激模型的最佳条件。在细胞划痕试验中设立对照组、H₂O₂组、bAD-MSCs共培养组（1∶0.5）、bAD-MSCs共培养组（1∶1）、奶牛乳腺上皮细胞（MACT）共培养组（1∶0.5）和MACT共培养组（1∶1）共6组,分析奶牛子宫内膜上皮细胞迁移能力,并利用Western blotting检测细胞外蛋白调节激酶（Erk）和磷酸化细胞外蛋白调节激酶（pErk）蛋白的表达水平。【结果】MTT试验结果显示,4~12 h内50 μmol/L H₂O₂组细胞存活率为50%~80%,适用于构建氧化应激模型。流式细胞术结果显示,用50 μmol/L H₂O₂刺激奶牛子宫内膜上皮细胞2 h时,ROS水平显著高于对照组与4、6、8、12 h组（P<0.05）。划痕试验结果显示,与对照组相比,H₂O₂组奶牛子宫内膜上皮细胞的迁移能力显著降低（P＜0.05）;与H₂O₂组相比,bAD-MSCs共培养组奶牛子宫内膜上皮细胞的迁移能力均显著增加（P＜0.05）,MACT共培养组细胞迁移能力均显著降低（P＜0.05）。Western blotting结果显示,与对照组相比,H₂O₂组奶牛子宫内膜上皮细胞中pErk蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）;与H₂O₂组相比,bAD-MSCs共培养组奶牛子宫内膜上皮细胞中pErk蛋白表达水平均显著升高（P＜0.05）,MACT共培养组细胞中pErk蛋白表达水平均显著降低（P＜0.05）。【结论】50 μmol/L H₂O₂处理2 h可成功构建奶牛子宫内膜上皮细胞氧化应激模型,bAD-MSCs可促进氧化应激条件下奶牛子宫内膜上皮细胞的迁移并参与调控Erk蛋白的表达。     

活性氧对猪卵母细胞SUMO-1表达及其质量的影响

本研究旨在调查活性氧过氧化氢（hydrogen peroxide,H₂O₂）对猪卵母细胞体外成熟（in vitro maturation,IVM）过程中蛋白质类泛素SUMO-1表达及精-卵结合能力的影响。试验分为0（control）、10、50、75和100 μg/mL H₂O₂处理组。利用Western blotting、流式细胞术、实时荧光定量PCR、Hoechst染色等方法检测猪卵母细胞体外成熟、蛋白质类泛素SUMO-1含量、细胞活力、凋亡基因mRNA表达、透明带（zona pellucid,ZP）溶解度和精子-卵母细胞结合的表达。结果表明,75 μg/mL H₂O₂组与对照组、10和50 μg/mL H₂O₂组比较卵母细胞体外成熟率及细胞活力显著降低;75 μg/mL H₂O₂组与其他H₂O₂组相比ZP溶解时间显著延长,并减少了精子黏附在成熟卵母细胞透明带上的数量（P<0.05）。在77和18 ku处出现SUMO-1蛋白标记,75 μg/mL H₂O₂组与对照组、10和50 μg/mL H₂O₂组比较SUMO-1蛋白含量显著降低（P<0.05）。75 μg/mL H₂O₂与对照组、10和50 μg/mL H₂O₂组比较显著下调了Bcl-2基因,而Caspase-3基因表达与对照组和10 μg/mL H₂O₂组比较显著升高（P<0.05）,50 μg/mL H₂O₂与对照组和10 μg/mL H₂O₂组相比显著上调了Bax基因水平（P<0.05）。综上所述,H₂O₂能调控猪卵母细胞体外成熟过程中类泛素化水平以及精-卵结合能力。     

艾纳香油对NF-κB及Nrf2/HO-1信号通路的作用研究

旨在通过研究NF-κB、Nrf2/HO-1通路来揭示艾纳香油（Blumea balsamifera（L.）DC Oil,BBO）发挥抗炎效果的作用机制。本研究利用LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症模型,试验分为空白组、LPS模型组、BBO组（低、中、高剂量）、BBO阴性对照组,每组3个重复,采用Hoechst 33342和PI双染检测BBO对细胞凋亡的影响;采用ELISA和分光光度法检测BBO对LPS诱导巨噬细胞后分泌IL-1β、TNF-α、PGE₂、LTB₄、NO含量及iNOS活力的影响;采用RT-PCR检测BBO对TNF-α、IL-1β的mRNA表达水平的影响;采用Western blotting检测BBO对NF-κB及Nrf2/HO-1信号通路关键蛋白水平的影响。结果显示,BBO在80 μg·mL^-1剂量范围内可以扭转LPS导致的巨噬细胞形态变化及细胞凋亡发生;与LPS模型组相比,BBO 60~80 μg·mL^-1剂量下可以极显著抑制LPS诱导的细胞炎性因子和炎症介质IL-1β、TNF-α、PGE₂、LTB₄、NO的分泌及iNOS活力（P<0.01）,并极显著抑制LPS导致的细胞IL-1β、TNF-α mRNA表达（P<0.01）;同时,BBO 60~80 μg·mL^-1剂量下极显著下调LPS导致的COX-2、5-LOX、p-IKKα、p-P65、p-IκB-α、胞质Nrf2蛋白表达（P<0.01）,极显著促进HO-1、核Nrf2蛋白表达（P<0.01）,并呈现剂量依赖性关系。结果提示,艾纳香油有良好的抑制细胞炎性和抗凋亡效果,其可能通过抑制NF-p-IκBB通路中关键蛋白磷酸化和炎症因子的产生从而促进Nrf2/HO-1通路中主要抗炎基因表达最终发挥抗炎作用。     

棕榈酸和硬脂酸对HepG2细胞血红素加氧酶-1和核转录因子Nrf2表达的影响

研究棕榈酸(PA)和硬脂酸(SA)作用HepG2细胞后,对其血红素加氧酶-1(HO-1)和核转录因子Nrf2在转录和蛋白质水平的影响。PA和SA分别以0.25、0.5、0.75、1.0mmol·L-1浓度刺激HepG2细胞24h后,采用荧光定量PCR以及蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测细胞HO-1和Nrf2的mRNA转录及蛋白质表达量的变化。结果表明:PA作用细胞后,与对照组相比,随着PA浓度的递增HepG2细胞中Nrf2和HO-1的mRNA转录及蛋白质的表达量均极显著增加(P0.01);而SA组浓度为0.25、0.5、0.75 mmol·L-1时,Nrf2和HO-1的mRNA转录及蛋白质的表达量与对照组相比极显著增加(P0.01),当SA浓度为1.0mmol·L-1时其增加量相对减少。在1mmol·L-1范围内,较高浓度的PA和较低浓度的SA对HepG2细胞Nrf2和HO-1的mRNA转录及其蛋白质的诱导作用显著。     

siRNA抑制牛子宫内膜上皮细胞Nrf2基因的表达研究

为探讨核因子E2相关因子（nuclear factor E2 related factor，Nrf2）基因沉默及激活后对牛子宫内膜上皮细胞的影响，本试验利用小分子干扰（siRNA）技术及Nrf2的激动剂叔丁基对苯二酚（tBHQ），分别从Nrf2基因的下调和上调表达来研究Nrf2对牛子宫内膜上皮细胞中血红素加氧酶-1（HO-1）和Homebox A10（HOXA10）基因表达的影响。结果显示，经实时荧光定量PCR方法检测，在设计的2条siRNA序列（siRNA-1209和siRNA-1672）中，siRNA-1672在终浓度为75 nmol/L、作用时间24 h时抑制效果较好，抑制效率在80%以上；经Western blotting方法检测，Nrf2蛋白表达水平在转染后96 h极显著下降（P<0.01），而HO-1和HOXA10的mRNA表达量分别下降了60%和70%（P<0.01），蛋白表达量在96 h后极显著或显著下降（P<0.01；P<0.05）。此外，经CCK8方法检测，Nrf2基因表达沉默后，牛子宫内膜上皮细胞增殖能力减弱。而在tBHQ激活Nrf2试验中，经Western blotting方法检测，tBHQ终浓度为30 μmol/L时Nrf2蛋白表达量最高，极显著高于对照组（P<0.01），且HO-1和HOXA10的蛋白表达量与对照组相比也明显上升。结果表明，本试验设计的siRNA-1672能特异性地抑制牛子宫内膜上皮细胞Nrf2的表达，而抑制Nrf2的表达会导致牛子宫内膜上皮细胞增殖能力下降，且Nrf2对牛子宫内膜上皮细胞HO-1和HOXA10基因表达存在调控作用。     

H2S暴露对保育猪氧化还原状态及硫化氢代谢的影响

本试验旨在研究硫化氢（H₂S）暴露对保育猪氧化还原状态及内源性H₂S代谢的影响。试验选取12头体况健康、体重相近（（11.61±1.51） kg）的35日龄大白猪,随机分为2组并分配到2个环控舱内,公母各半,每组6头猪。试验组环控舱内H₂S浓度控制为30 mg·m^-3,对照组环控舱内H₂S浓度控制为0 mg·m^-3,试验期28 d。试验结束后采集血清和肝组织样品,检测氧化还原和H₂S代谢相关指标。结果显示,与对照组相比：1）血清中ROS含量极显著增加（P<0.01）,MDA含量显著增加（P<0.05）;抗氧化酶T-SOD活性显著降低（P<0.05）,CAT和GPX活性极显著降低（P<0.01）;非酶抗氧化物GSH和GSSG含量无显著变化（P>0.05）。2）肝中T-SOD和GPX活性极显著升高（P<0.01）,·OH清除能力显著提高（P<0.05）;ROS、H₂O₂、PC、MDA、GSH、GSSG含量无显著差异（P>0.05）。3）肝中Keap1的mRNA表达量显著下调（P<0.05）,Nrf2的mRNA表达量显著上调（P<0.05）;抗氧化相关基因（SOD2、GPX1、GPX2、GPX4和GSR）的mRNA表达量显著上调（P<0.05）。4）血清和肝中H₂S含量显著降低（P<0.05）;肝内源H₂S合成酶CSE和CBS的mRNA表达量显著下调（P<0.05）,3-MST的mRNA表达量无显著变化（P>0.05）;肝H₂S分解代谢酶SQR和SUOX的mRNA表达量下调,但差异不显著（P>0.05）。结果表明,30 mg·m^-3 H₂S暴露导致保育猪血清抗氧化系统受损,而肝中Nrf2/Keap1信号通路的激活使肝免受氧化损伤;此外,H₂S暴露抑制了保育猪内源性H₂S的合成代谢。     

HO-1在巨噬细胞中的抗炎和抗氧化作用

【目的】旨在揭示血红素加氧酶1(HO-1)在巨噬细胞中的抗炎和抗氧化作用。【方法】利用不同浓度脂多糖(LPS,0、3、5、10、15、20、25 μg/mL)、HO-1(0、0.02、0.04、0.06、0.08、0.10 μg/mL)及锌原卟啉(zinc protoporphyrin,ZPP;0、5、10、15、20、30 ng/mL)分别处理巨噬细胞(RAW264.7),12 h后通过CCK8法检测RAW264.7细胞活力,计算LPS、HO-1和ZPP处理RAW264.7细胞的最佳浓度。将RAW264.7细胞随机分为对照组(CT)、LPS组(LPS)、LPS+HO-1组(LH)、HO-1组(HO-1)、LPS+HO-1+ZPP组(LHZ),每组3个重复。CT组细胞用含10%胎中血清的DMEM培养基培养;LPS组细胞用LPS处理;LH组细胞用LPS和HO-1共处理;HO-1组细胞用HO-1处理;LHZ组细胞用LPS、HO-1和ZPP共处理,各组细胞的处理时间均为12 h,收集细胞和上清。采用ELISA法检测上清液中白细胞介素-6(IL-6)、IL-8、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)含量,实时荧光定量PCR法检测细胞中IL-6、IL-8、TNF-α、核因子E2相关因子2(Nrf2)、HO-1 mRNA表达,Western blotting检测细胞中Nrf2、HO-1蛋白的表达。【结果】与0 μg/mL LPS处理细胞相比,20 和25 μg/mL LPS均能极显著降低 RAW264.7细胞活力(P＜0.01);与0 μg/mL HO-1处理细胞相比,0.08和0.10 μg/mL HO-1均极显著提高细胞活力(P＜0.01);与0 ng/mL ZPP处理细胞相比,15、20、30 ng/mL ZPP极显著降低细胞活力(P＜0.01),后续选用20 μg/mL LPS、0.08 μg/mL HO-1、15 ng/mL ZPP处理RAW264.7细胞。与CT组相比,LPS组细胞中IL-6、IL-8、TNF-α mRNA表达极显著上调(P＜0.01),IL-6、IL-8、TNF-α、MDA、ROS含量均极显著升高(P＜0.01),GPx、SOD含量均极显著降低(P＜0.01);与LPS组相比,LH组细胞中IL-6、IL-8、TNF-α mRNA表达均极显著下降(P＜0.01),IL-6、IL-8、TNF-α、MDA、ROS含量均极显著降低(P＜0.01),GPx、SOD含量均极显著升高(P＜0.01);与LH组相比,LHZ组细胞中IL-6、IL-8、TNF-α mRNA表达均极显著上调(P＜0.01),IL-6、IL-8、TNF-α、MDA、ROS含量均极显著升高(P＜0.01),GPx、SOD含量均极显著降低(P＜0.01)。Nrf2/HO-1信号通路分子表达结果表明,与CT组相比,LPS组细胞中Nrf2和HO-1的mRNA和蛋白表达极显著上调(P＜0.01);与LPS组相比,LH组细胞中Nrf2和HO-1 mRNA表达极显著下调(P＜0.01),Nrf2蛋白表达极显著下降(P＜0.01),而HO-1蛋白表达极显著上升(P＜0.01);与LH组相比,LHZ组细胞中Nrf2和HO-1 mRNA表达均极显著上调(P＜0.01),Nrf2蛋白表达极显著上升(P＜0.01),HO-1蛋白表达极显著下降(P＜0.01)。与CT组相比,HO-1组各项指标均差异不显著(P>0.05)。【结论】20 μg/mL LPS诱导巨噬细胞产生炎性反应和氧化应激,0.08 μg/mL HO-1具有抗炎和抗氧化作用,HO-1调节Nrf2信号通路发挥抗炎和抗氧化作用。