抗鸡传染性喉气管炎重组鸡痘病毒基因工程疫苗同居感染试验

疫苗的接触传播是疫苗免疫接种需要考虑的重要因素,为了检测重组鸡痘病毒载体疫苗水平传播的能力,对隔离条件下饲养的SPF鸡用重组鸡痘病毒基因工程疫苗接种,同时设立非免疫对照鸡,饲养期间特意延长清粪时间以增加感染的机会,1个月之后攻击传染性喉气管炎WG株强毒和鸡痘102株强毒,疫苗免疫鸡全部获得保护,而非免疫鸡则全部发病.在试验动物饲养场的自然条件下,将免疫鸡和试验对照两组鸡饲养在同一个鸡舍内,让疫苗毒的传播更接近自然条件.在每个月的攻毒试验中,对照鸡都没有获得对鸡痘和传染性喉气管炎强毒的保护.在疫苗免疫期间进行连续5个月的跟踪检测,同居未免疫鸡没有检测到抗传染性喉气管炎病毒gB抗体.这些实验结果表明抗鸡传染性喉气管炎重组鸡痘病毒基因工程疫苗不能通过接触传播.     

传染性喉气管炎新城疫鸡痘重组病毒免疫效力的研究

在表达鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)糖蛋白gB基因和新城疫病毒(NDV)F基因的重组鸡痘病毒(rF-PV-gB-F)安全性检验合格后,以5.0×101~5.0×104PFU不同含量按0.1mL/鸡的剂量免疫100只30日龄SPF鸡,30d后分组分别用ILTVWG株和NDVF48E9株强毒进行攻击。免疫鸡抗鸡痘病毒抗体都转为阳性,痘反应和接种剂量有关,重组疫苗的最小反应剂量为50PFU。重组疫苗可以诱发对新城疫和传染性喉气管炎的保护,0.1mL/鸡的接种量在500~5000PFU浓度范围内的免疫效果最好,对于ILTV攻击的发病保护率在70%以上,对NDV强毒攻击的抗死亡保护率可以达到80%,这为进一步考察疫苗的免疫效力试验以及进行田间试验奠定了基础。     

表达传染性喉气管炎病毒gB基因重组鸡痘病毒疫苗的安全性试验与最小免疫剂量测定

将表达鸡传染性喉气管炎病毒糖蛋白gB基因的重组鸡痘病毒(rFPV-ILTVgB)通过鸡胚成纤维细胞培养,加入适当的保护剂制成冻干疫苗.取3批冻干疫苗,生理盐水稀释后分别经翅内侧无血管处皮下接种14日龄和50日龄SPF鸡,接种剂量为5 × 106PFU,接种后3天出现局部反应,5天局部肿胀达到最大,接种鸡无其它全身反应,精神、食欲以及发育等均不受影响,说明重组病毒对试验鸡是安全的.取其中的200003批疫苗,用生理盐水作210-2～210-5稀释后,翅内侧无血管处皮下接种40日龄SPF鸡,免疫后4周分别攻击传染性喉气管炎病毒WG株和鸡痘病毒102株,结果表明,重组病毒对试验鸡翅内侧皮下接种能产生良好的免疫力,在接种剂量为210-2～210-40.1ml/鸡的范围内可以使全部试验鸡产生局部反应,当接种剂量为210-50.2ml/鸡时可以使部分试验鸡(5/15)产生局部反应,鸡体对重组疫苗的最小反应剂量为210-40.1ml(相当于1000PFU).攻毒试验结果进一步证明,当接种剂量为210-40.1ml(相当于1000 PFU)时可以使免疫鸡产生可靠免疫力,抵抗传染性喉气管炎病毒WG株强毒和鸡痘病毒102株的攻击,降低鸡群的发病率和病死率.这些结果说明,疫苗接种后的局部反应与重组疫苗的免疫效力之间具有相关性,疫苗对接种鸡的局部作用反应了疫苗的免疫效力,我们研制的重组疫苗的最小免疫剂量为1000 PFU,这就为我们进一步考察疫苗的免疫效力试验奠定了基础.     

鸡传染性喉气管炎重组鸡痘基因工程疫苗免疫效果试验

用鸡传染性喉气管炎重组鸡痘基因工程疫苗、英特威鸡传染性喉气管炎弱毒疫苗分别免疫鸡群后,观察接种反应并做免疫保护力试验。结果表明,鸡传染性喉气管炎重组鸡痘基因工程疫苗几乎没有接种反应,基因工程疫苗与英特威疫苗对ILT免疫保护率是相同的。一般鸡群通过两次的疫苗免疫接种5个月后,对ILT的免疫保护率能够达到100%。通过对鸡传染性喉气管炎重组鸡痘基因工程疫苗田间试验和区域试验结果表明,用该疫苗免疫鸡群,不仅接种反应小、安全、能有效地防止ILT的发生,而且由于鸡群几乎没有接种反应,育成期死淘率低,鸡群生长发育整齐,在产蛋期能表现优良的生产性能。     

新城疫病毒F基因与传染性喉气管炎病毒gB基因重组鸡痘病毒免疫保护产生时间的测定

为了检测表达鸡传染性喉气管炎病毒糖蛋白gB基因和新城疫病毒F基因的重组鸡痘病毒(rFPV-gB-F)的免疫产生期，将60只30日龄SPF鸡随机分为6组，以5d为间隔在试验开始第0、5、10、15、20d时选取10只进行免疫，经翅内侧皮下注射接种1000PFU rFPV-gB-F，另外的10只作为对照。在第1组免疫后的第25d，将不同日龄免疫组和对照组试验鸡再随机分为2组，分别用传染性喉气管炎病毒WG株和新城疫病毒F48E9株强毒攻击。结果表明，在rFPV-gBF免疫接种后第10d时，可以诱发抗gB的抗体，保护免疫鸡抵抗传染性喉气管炎病毒WG株强毒和新城疫强毒的攻击。由此确定，rFPVgB-F免疫产生的时间是接种后第10d。     

表达鸡传染性支气管炎病毒S1基因重组鸡痘病毒对SPF鸡的免疫保护作用

将表达鸡传染性支气管炎病毒(IBV)S1基因的重组鸡痘病毒(rFPV-IBVS1)以5×106PFU剂量翅皮下注射接种4周龄的SPF鸡。血清抗体检测表明,该重组鸡痘病毒能刺激鸡体产生特异性抗体,外周血液中CD4 、TCRγδ T淋巴细胞比例显著高于对照组,而CD8 T淋巴细胞比例低于对照组。免疫后4周用1×103.0EID50的传染性支气管炎病毒LX4株进行攻毒,结果表明,重组鸡痘病毒免疫组与IB弱毒疫苗免疫保护率分别为12/16和13/16;攻毒后喉拭子IBV分离结果表明,IB弱毒疫苗和重组鸡痘病毒免疫组的IBV气管排毒时间比对照组缩短了2 d,病毒的分离率显著低于对照组;肾脏、气管、肺脏、腺胃、脾和肝脏的病理损伤也较对照组轻,而且病变持续时间缩短。     

不同接种途径免疫侯豆平在预防传染性喉气管炎的效果研究

通过对家禽不同品种(SPF鸡、蛋鸡),不同日龄段(1、7日龄),不同免疫途径(刺种、注射)接种侯豆平(鸡传染性喉气管炎重组鸡痘病毒基因工程苗),来研究不同免疫途径、不同日龄免疫与免疫效果的相关性,从而为基层养殖人员临床应用提供更科学的理论依据.实验结果表明侯豆平以注射和刺种两种途径免疫1日龄SPF鸡;1日龄、7日龄蛋鸡均对传染性喉气管炎有很好的保护效果,保护率均在80%以上,且注射效果更好些,同时两种接种途径对鸡群增重影响不显著.     

鸡传染性喉气管炎弱毒株安全性的试验

我厂生产鸡传染性喉气管炎弱毒疫苗,无论是在安全性和免疫原性方面一直比较理想.但近两年来,鸡传染性喉气管炎弱毒苗(广东毒株)在免疫滴眼后,鸡只反应较大,甚至有造成被点眼睛失明现象,而影响鸡只啄食.为此工厂于2001年初立题,进行鸡传染性喉气管炎弱毒疫苗弱株的安全性的试验.     

鸡痘母源抗体对重组鸡痘疫苗免疫效果的影响

为了检测抗鸡痘病毒母源抗体对喉气管炎重组鸡痘疫苗的影响,孵化一批来自禽痘病毒高免母鸡的雏鸡,采用ELISA方法检测鸡痘疫苗免疫鸡后代的血清抗体。检测结果表明,雏鸡自孵出2d开始,血清鸡痘病毒抗体水平就开始缓慢下降,到15日龄时下降至临界值,已有部分鸡开始出现抗体阴性反应;到21日龄时,全部被检血清抗体水平均转为阴性。分别于不同日龄对试验雏鸡免疫接种重组鸡痘疫苗,结果只有当鸡体内的鸡痘病毒母源抗体全部为阴性(21日龄)后免疫时才能产生可靠的保护作用,保护率达到80％以上。这说明鸡痘病毒母源抗体对重组鸡痘疫苗的效果有一定的影响,因此重组疫苗合理的首免时间应选择在3周龄以后。     

鸡痘弱毒苗几种免疫途径的安全性及免疫效果

取鸡痘弱毒苗分别以饮水、滴鼻、点眼、肌肉注射、刺翼等5种途径各免疫7日龄非免疫鸡10只，剂量为10羽份／只，免疫后观察14d，检查不同免疫方式对鸡只的安全性；同时，用1个羽份的鸡痘弱毒苗采用上述5种途径各免疫32日龄非免疫鸡20只，接种后28天，连同对照鸡只，用鸡痘强毒攻击，观察21d，比较不同免疫途径鸡痘弱毒苗对鸡只的保护效果。试验结果表明，5种途径免疫的鸡只均安全；饮水、滴鼻、点眼、肌肉注射、刺等5种途径对强毒的攻击保护率分别为60％，60％，50％，60％和100％。     

鸡传染性喉气管炎弱毒疫苗生产工艺的改进

在鸡传染性喉气管炎弱毒疫苗生产中,通过改用尿囊腔接种种毒,减少鸡胚绒毛尿囊（ＣＡＭ）的含量,加入适量尿囊液,制备了鸡传染性喉气管炎混合型弱毒疫苗。这一改进简化了生产工艺,可使生产成本大幅度下降;用此法生产３批共１３５０万羽份疫苗,经在山东、河南、辽宁、黑龙江等省应用,其免疫效果与单纯性ＣＡＭ弱毒疫苗一样。     

表达传染性喉气管炎病毒gB基因重组鸡痘病毒疫苗的遗传稳定性评价

为了检测表达鸡传染性喉气管炎病毒糖蛋白gB基因重组鸡痘病毒（rFPV-ILTVgB)的稳定性，我们对重组病毒进行6代和16代克隆纯化，对纯化后的病毒通过转瓶连续培养传20代，结果发现第6代纯化病毒（rFPV-ILTVgB-C6)在传代过程中有白斑出现，说明病毒纯度不够；经过16代纯化的病毒（rFPV-ILTVgB-C16)对细胞的嗜性加强，病毒的效价进一步升高，20代传代后蓝斑率仍然为100％，PCR的检测进一步证明插入的外源基因能在病毒的长期传代过程中稳定地遗传。抽取病毒细胞传代过程中的第5，10，15，20代次的病毒翅膀内侧无血管处皮下接种2周龄SPF鸡，20天后分为两组，分别用传染性喉气管炎病毒WG株和鸡痘病毒102株攻击，结果不同代次的重组病毒均可以使免疫鸡抵抗传染性喉气管炎病毒和鸡痘病毒强毒的攻击，鸡体内病毒传代试验表明，重组病毒在接种部位仅存在6天，之后就检测不到病毒，重组病毒通过SPF鸡连续传代，不存在病毒返祖的可能，由此可以得出一个结论：rFPV-ILTVgB在结构上和免疫原性上是稳定的，无论是在体外传代，还是在体内均可以稳定遗传，不存在因为接种重组疫苗而给免疫鸡群带来安全威胁的可能，完全可以作为疫苗毒株进行商品化开发。     

传染性喉气管炎新型基因载体疫苗对SPF鸡的免疫保护效果分析

为了评估鸡传染性喉气管炎痘病毒载体重组基因工程疫苗威多妙喉痘(Vector-mune FP-LT)对鸡传染性喉气管炎的免疫效果,采用SPF鸡进行免疫攻毒保护试验。试验结果表明:胚源传染性喉气管炎病毒疫苗(CEO疫苗)和组织培养的传染性喉气管炎病毒疫苗(TCO疫苗)免疫后分别有50%和10%的鸡表现出免疫副反应,而威多妙喉痘免疫后无不良反应;CEO疫苗免疫组、TCO疫苗免疫组和威多妙喉痘免疫组的攻毒保护率分别为100%、90%、85%,无显著差异;气管病变计分结果与临床表现结果一致。同时进行的同居感染试验结果表明:非免疫同居感染组保护率仅为60%,而威多妙喉痘免疫后同居感染的保护率为100%。     

重组鸡痘病毒表达的鸡IL-1β和IL-2以及cMGF对新城疫LaSota疫苗免疫效果的影响

将128只10日龄SPF鸡随机分成8组，每只免疫1PD50的新城疫LaSota疫苗；同时Ⅰ～Ⅵ组鸡分别皮下注射不同剂量的重组鸡痘病毒rFPV-IL-1β、rFPV-IL-2或cMGF，而Ⅶ组和Ⅷ组鸡分别皮下注射鸡痘病毒wt-FPV和PBS作为阴性对照和空白对照。结果，重组鸡痘病毒表达的IL-1β、IL-2或cMGF可以消除鸡痘病毒在免疫后第7d对雏鸡体重增长的影响；一定剂量的IL-1β和IL-2可使鸡脾中CD4^＋T细胞在免疫后第7d和CD8^＋T细胞在免疫后第14d的总体水平提高；免疫第21d新城疫F48E8强毒攻毒后，一定剂量的IL-1β和IL-2能提高免疫保护率，而cMGF却无此作用。结果表明，重组鸡痘病毒表达的IL-1β和IL-2在一定剂量下可增强新城疫LaSota疫苗的免疫效果。     

抗禽流感或传染性喉气管炎两种重组鸡痘病毒疫苗联合免疫的相互影响

“表达H5N1禽流感病毒HA和NA基因的重组鸡痘病毒（rFPV—AI）疫苗”以及“表达传染性喉气管炎病毒gB基因的重组鸡痘病毒（rFPV—ILT）疫苗”均已在实现商业化生产。由于两种疫苗使用了相同的载体病毒,如何使用才能减少相互干扰而产生最好的免疫效果。本研究设计了三个试验组：1）免疫rFPV—AI后间隔4周接种rFPV—ILT;2）rFPV—AI和rFPV—ILT混合后接种;3）将rFPV—AI和rFPV—ILT分别在两个翅膀同时免疫。结果表明,试验鸡接种rFPV—AI后4周接种rFPV—ILT,对传染性喉气管炎病毒WG株攻击的保护率为60％（6／10）,低于rFPV—ILT单独免疫组的保护率（100％,10／10）;rFPV—AI和rFPV—ILT混合后免疫组对禽流感病毒强毒攻击的保护率为80％（8／10）,对传染性喉气管炎病毒强毒攻击的保护率为70％（7／10）,而rFPV—AI和rFPV—ILT分两点同时接种对两种病毒攻击均能产生完全保护。本试验结果建议将这两种相同载体的重组病毒疫苗分两点同时接种以避免相互之间的干扰。     

鸡传染性喉气管炎基因工程疫苗的研究与应用

论述了鸡传染性喉气管炎亚单位疫苗、基因缺失疫苗、重组病毒活载体疫苗、基因疫苗的研究和应用进展情况,表明应用基因工程疫苗免疫可以从根本上改变鸡传染性喉气管炎的防治现状,使传染性喉气管炎的根除成为可能。     

鸡传染性喉气管炎重组鸡痘病毒基因工程疫苗

鸡传染性喉气管炎重组鸡痘病毒基因工程疫苗是由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所与哈尔滨维科生物技术公司经过多年的课题攻关，研制而成的世界上第一个传染性喉气管炎的活载体疫苗，该疫苗目前已经获得农业部颁发的新兽药(二类)证书(农业部公告第461号)，是世界上第一个达到国际疫苗应用标准，并且完全拥有自主知识产权的禽痘病毒活载体疫苗。     

1例因免疫注射引起金黄色葡萄球菌感染的诊治

<正>1发病情况2012年初,家住东湖村朱姓养殖户饲养了3700多羽尼克红商品蛋鸡。育雏时健康状况良好,按免疫参考程序于35日龄对鸡群进行肌肉注射H5N1(Re-4/Re-5)0.5mL/羽和接种鸡传染性喉气管炎重组鸡痘病毒基因工程苗。在接种前朱某在饲料和饮水中添     

白喉型鸡痘病毒Gibbs株免疫特性研究

白喉型鸡痘病毒Gibbs株能在鸡胚绒毛尿囊膜上良好增殖，接种后１２０小时，绒毛尿囊膜明显水肿，且淡黄色痘斑，其毒价达到１０^5.25-10^5.83EID50/0.2ml。用１０倍稀释的病毒悬液肌肉注射１３日龄雏鸡，无任何不良反应。用１００倍稀释病毒液皮下刺种免疫１４－４０日龄鸡，接种后３－６天，接种局部出现痘痂，接种后１４天，用１０倍稀释的Ｇibbs株病毒液二次皮下刺种或用鸡痘野毒株经腿部毛作擦，免疫未见任何局部反应或其它异常，保护率达１００％。，免疫后１６５天，保护率仍达８０％，试验结果证实该毒株具有良好的免疫原性和安全性。     

鸡传染性喉气管炎免疫的研究——“鸡新城疫及传染性支气管炎疫苗混合接种对ILT弱毒免疫的免疫效果的影响”

<正> 鸡的传染性喉气管炎(ILT)的流行范围不断扩大,并形成了常发地区,在传染地区,进行预防接种ILT弱毒疫苗是十分必要的。对各种日龄雏鸡常用不同的弱疫毒苗接种,但由于接种时间又很接近,确认这些弱毒疫苗相互的免疫应答是否彼此影响也是必要的。因此著者探讨了传染性喉气管炎疫苗和鸡新域疫疫苗,或者传染性支气管炎(IB)弱霉疫苗的混合接种,以及各种疫苗对雏鸡免疫应答的影响。