湖北省部分规模化猪场猪乙型脑炎血清学调查

对湖北省部分规模化猪场的936份猪血清样品进行猪乙型脑炎抗体检测,结果阳性数532份,阳性率达56.84％.不同猪群的抗体检测结果发现公猪的血清抗体阳性率为64.23％,母猪的血清抗体阳性率为62.70％,肥育猪、保育猪及哺乳仔猪的血清抗体阳性率分别为50.83％、47.22％和32.61％;不同季节的抗体检测结果表明,3～5月份猪乙型脑炎血清抗体阳性率最低,为43.42％;6～8月份阳性率最高,达77.01％;公、母猪阳性率高主要是由于多次免疫的结果,而哺乳、保育、肥育仔猪的阳性率,可能是部分猪感染了乙型脑炎病毒而产生的.可见,湖北省已有猪乙型脑炎病毒流行.为保证人类的安全及养猪业的健康发展,需加强猪乙型脑炎的免疫工作,防止猪乙型脑炎病的发生与流行.     

保定市某猪场乙型脑炎或减毒活疫苗免疫效果评价

为了评价猪乙型脑炎减毒活疫苗的免疫效果,试验采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清抗体,选择长白×大白二元杂交种母猪40头,分别于接种猪日本乙型脑炎灭活疫苗的第0,15,45天耳静脉采血,分离血清.结果表明:免疫前猪乙型脑炎血清抗体阳性率为35.0%(14/加),免疫后第15,45天猪乙型脑炎血清抗体阳性率为85....     

猪乙型脑炎与衣原体抗体监测及防治措施

为了解某猪场乙型脑炎免疫情况及衣原体感染情况,笔者采集并分离了血清,进行乙型脑炎和衣原体抗体监测。结果显示,该场乙型脑炎抗体阳性率为73.68%、衣原体抗体阳性率为6.02%。分析试验结果,确定了该场猪乙型脑炎免疫情况和衣原体感染情况,用于指导接下来的疫病防控工作,并为广西规模猪场疫病防控提供科学依据。     

东莞市横沥镇猪流行性乙型脑炎血清学调查

为了解东莞市横沥镇猪流行性乙型脑炎流行情况,在2013~2015年,采用酶联免疫吸附方法,对采集的432份猪血清进行了流行性猪乙型脑炎抗体检测。结果为非免疫场100份血清,抗体阳性15份,抗体阳性率为15.00%;免疫场332份,抗体阳性250份,抗体阳性率为75.30%。结果表明,东莞市横沥镇猪场存在流行性乙型脑炎的感染,对于流行性乙型脑炎的防控需采取综合防控措施。     

江苏省淮安市猪乙型脑炎血清学调查

为了解淮安市猪场乙型脑炎病毒感染情况,2012年5月笔者应用ELISA试验对全市12个规模猪场共246份血清样品进行集中监测,结果显示经免疫的母猪,血清阳性率平均为70.59%,其中免疫较好的种猪场抗体阳性率100%;未免疫的猪群,其血清阳性率平均为21.83%;免疫猪群与未免疫猪群相比,血清阳性率平均值差异极显著(P<0.01)。未免疫猪群之间抗体阳性率参差不齐,由最低为0到最高的100%不等。说明各猪场由于种猪来源不同、饲养环境不同、管理水平不同等原因,导致猪群乙脑感染率不同。     

陕西省五种猪传染病的血清学调查

2001年10月至2002年7月对来自陕西省38个养猪场，户的191份猪血清分别进行了猪伪狂犬病，流行性乙型脑炎，细小病毒感染，生殖和呼吸系统综合征的乳胶凝集试验以及猪瘟正向间接血凝试验，共检出抗体阳性血清141份，阳性率为73．8％，其中检查猪伪狂犬病的88份血清，阳性66份，阳性率为75．0％；检查流行性乙型脑炎的5份血清，阳性2份，阳性率为40．0％，检查细小病毒感染的16份血清，阳性8份，阳性率为50．0％；检查猪生殖和呼吸系统综合征的72份血清，阳性63份，阳性率为87．5％，检查猪瘟的15份血清，阳性8份，阳性率为53．3％。     

2015—2017年我国部分地区猪乙型脑炎血清抗体监测

为了解我国猪乙型脑炎的免疫效果,采用间接酶联免疫吸附试验（ELISA）,对来自全国部分地区529家猪场的10 991份猪血清样品进行乙型脑炎血清抗体检测,并对检测结果进行时间、空间和群间分布分析。结果显示：2015—2017年乙型脑炎平均抗体阳性率分别为89.86%、83.79%和89.89%,总阳性率为88.39%;春季（3月—5月）抗体水平较低,平均阳性率为78.69%,冬季（12月—次年2月）抗体水平最高,平均阳性率为91.24%;西南地区抗体阳性率最低,为80.09%,华东地区最高,为93.57%;经产母猪和公猪抗体水平最高,阳性率分别为95.61%和92.11%,商品猪阳性率最低,为41.38%。结果表明,我国猪群乙型脑炎疫苗免疫水平整体情况较好,但春季、商品猪群以及部分猪场的抗体水平偏低,需要加强监测,及时进行疫苗免疫。     

龙岩市猪流行性乙型脑炎的流行病学调查

为了解福建省龙岩市猪乙型脑炎病毒(JEV)的隐性感染情况和使用疫苗后的血清抗体水平,采用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)对龙岩市2011—2014年规模化猪场和农村散养户共858份猪血清样本进行了JEV的抗体水平检测,并对临床疑似猪乙型脑炎的41个病例进行了聚合酶链式反应(PCR)检测。结果表明:已免疫规模猪场和农村散养户JEV的血清抗体阳性率分别为72.17%和57.72%,规模场JEV的免疫合格率要好于散养户(P0.01);免疫猪群JEV的血清抗体阳性率(69.71%)与未免疫猪群JEV的血清抗体阳性率(68.89%)相比差异不显著(P0.05);2011—2014年检测规模猪场和农村散养户JEV血清抗体水平总体上差异不显著(P0.05);PCR检测41个疑似猪乙型脑炎病例,确诊阳性21份,阳性率为51.22%,其中农村散养户猪只的JEV核酸阳性率显著高于规模场(P0.01)。说明龙岩市JEV的免疫效果不理想,JEV感染仍较严重,应引起重视。     

种猪场猪生殖和呼吸系统综合征血清抗体检测

应用ELISA试剂诊断盒对青海省几个主要种猪场的103份血清进行了PRRS的血清抗体检测，共检出阳性血清6份，阳性率为5．83％，表明青海省几个主要种猪场存在PRRS。     

乙型脑炎油乳剂灭活疫苗田间免疫试验报告

用５批乙型脑炎油乳剂来活疫苗对湖北３５个种猪场内的６－７月龄后后备母猪进行了田间试验，共免疫２６５０头猪，于免疫前后检测了３７５头免疫猪的血凝抑制（ＨＩ）抗体，免疫后有９６％的猪抗体上升。配种妊娠后，对３０头猪进行了抽样攻毒效检，其结果和力试验一样。统计了２４５头免疫猪和１１５头对照猪的生产成绩，免疫猪与对照猪比较，每窝网产活行３．１头，少产死胎、木乃伊２．６头。     

乙型脑炎疫苗研发及应用研究进展

乙型脑炎是由日本脑炎病毒引起的一种人兽共患的蚊媒传染病,它对人类危害巨大,并且给养猪业造成了严重的经济损失,目前临床上还无有效的药物用于治疗该病,而接种乙型脑炎疫苗能有效预防该疫病的流行。自乙型脑炎病毒疫苗应用以来,乙型脑炎的发病率大大下降。论文介绍了乙型脑炎疫苗的发展过程及生产工艺技术,总结了灭活疫苗、减毒活疫苗以及嵌合减毒活疫苗的免疫效果、优势和不足,最后探讨了当前乙型脑炎疫苗可能存在的安全问题以及新型乙型脑炎疫苗的发展方向,以期为新型乙型脑炎疫苗的研发提供参考,为乙型脑炎的防控提供新的思路与科学依据。     

新疆昌吉地区部分规模化猪场PRRSV抗体监测和免疫效果分析

为了查明昌吉地区地区部分规模化猪场猪PRRSV的抗体阳性率及免疫合格率,分别采集了昌吉地区4个免疫了弱毒苗的规模化猪场,和3个免疫了灭活苗的规模化猪场血清共1 036份,采用间接ELISA方法检测其抗体.经检测,4个免疫PRRS弱毒苗规模化猪场总阳性率为79.05％（468/592）,平均KQ为49.63,标准差为39.41.3个免疫PRRS灭活苗规模化猪场总阳性率为62.61％ （278/444）,平均KQ为45.88,标准差为31.22.结果表明,在规模化养猪场使用灭活苗免疫预防PRRS感染作用不如弱毒苗,因此,建议临床应用中应选择弱毒苗为宜,结合检测结果、临床生产数据及猪场已采用猪PRRS免疫程序,建议商品猪在仔猪断奶后初免.在高致病性猪蓝耳病流行地区,可根据实际情况在初免后1个月加强免疫一次,种母猪70日龄前免疫程序同商品猪,以后每次配种前加强免疫一次,种公猪70日龄前免疫程序同商品猪,以后每隔4～6个月加强免疫一次.     

乙脑病毒非结构蛋白NS1的原核表达及重组蛋白间接ELISA方法的初步建立

克隆表达乙脑病毒非结构蛋白NS1,并以其作为包被抗原,建立间接ELISA诊断方法。用此方法分别检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)及猪圆环病毒(PCV)阳性血清各3份,以及33份健康非免疫仔猪血清和205份乙型脑炎灭活疫苗免疫的猪血清,评价NS1-ELISA方法的特异性。取54份乙脑病毒感染的猪血清进行NS1-ELISA检测,评价该方法的敏感性。NS1-ELISA检测的特异性为95%,敏感性达90.7%。与商品化试剂盒比较,其符合率达到96.0%。在重复性试验中,NS1-ELISA检测方法重复性较好。本试验为进一步研究不同感染时期NS1抗体水平的差异奠定基础。     

三个厂家猪瘟活疫苗免疫效果比较试验

在同一条件下对3个厂家生产的猪瘟细胞源活疫苗进行了免疫效果评价试验,并与猪瘟传代细胞苗免疫效果进行比较。结果发现3个厂家生产的猪瘟细胞源活疫苗存在一定差异,2个厂家的免疫效果较好,1个厂家的免疫效果较差。猪瘟传代细胞苗免疫效果优于猪瘟细胞源活疫苗,猪瘟传代细胞苗免疫1次,抗体合格率高,持续时间长,猪瘟细胞源活疫苗要免疫两次才能获得比较好的效果。同时,我们发现高致病性猪蓝耳病活疫苗（JXA1-R株）对猪瘟抗体产生有一定影响。     

Enhancement of humoral and cellular immunity in mice against Japanese encephalitis virus using a DNA prime–protein boost vaccine strategy

A synthetic multi-epitope gene containing critical epitopes of the Japanese encephalitis virus (JEV) envelope gene was cloned into both prokaryotic and eukaryotic expression vectors. The recombinant plasmid and purified recombinant protein (heterologously expressed in Escherichia coli) were used as immunogens in a mouse model. The results indicate that both the recombinant protein and the DNA vaccine induce humoral and cellular immune responses. Neutralising antibody titres in mice in the pcDNA-TEP plus rEP group increased considerably relative to mice immunised using either pcDNA-TEP or rEP alone (P < 0.05). Furthermore, the highest levels of interleukin (IL)-2, interferon-γ and IL-4 were induced following priming with the DNA vaccine and boosting with the recombinant protein. Together these findings demonstrate that a DNA-recombinant protein prime-boost vaccination strategy can produce high levels of antibody and trigger significant T cell responses in mice, highlighting the potential value of such an approach in the prevention of JEV infection.     

猪乙型脑炎乳胶凝集试验与血凝抑制试验方法的比较

用血凝抑制试验 (HI)和乳胶凝集试验 (LAT)两种方法检测乙型脑炎弱毒疫苗免疫猪血清 ,结果均呈阳性反应。用LAT对来自 12个猪场的 94份猪血清进行了乙型脑炎病毒 (JEV)抗体检测 ,并与HI进行了对比 ,两种方法检测结果阳性符合率和总符合率分别为 90 .3% (5 6 /6 2 )和 88.3% (83/94 ) ,两种方法检测结果差异不显著 (p >0 .0 5 )。对来自无乙型脑炎的 12头健康猪血清进行检测 ,两种方法检测结果均为阴性。结果表明 ,用LAT与HI检测乙型脑炎结果符合 ,前者更为简便和实用。     

基因Ⅰ型乙型脑炎病毒病毒样颗粒的制备及其对小鼠的免疫原性分析

降低猪场的流行性乙型脑炎（Japanese encephalitis，JE）感染率对于阻断人的JE暴发至关重要，鉴于我国JE防控形势的紧迫性和现有基因Ⅲ型商品化乙型脑炎病毒疫苗对部分基因Ⅰ型乙型脑炎病毒（genotype Ⅰ Japanese encephalitis virus，GⅠ JEV）流行毒株免疫保护的不确定性，急需研制安全高效、成本低廉的新型猪用GI JEV疫苗。本研究在杆状病毒载体pFastBac^TM多克隆酶切位点插入GⅠ JEV的prME基因表达盒，测序验证后的阳性重组质粒转染DH10Bac^TM感受态细胞后获得Bacmid-prME重组杆粒，进一步将其转染至Sf9昆虫细胞后，获得Bac-prME重组杆状病毒。Western blot、间接免疫荧光及电镜观察GⅠ JEV病毒样颗粒组成蛋白表达及病毒样颗粒形成情况，通过小鼠免疫试验初步评价GⅠ JEV病毒样颗粒的免疫原性。Sf9昆虫细胞中prME基因表达盒编码的蛋白得到高效表达，且组装形成病毒样颗粒。病毒样颗粒免疫原性评估结果表明：GⅠ JEV病毒样颗粒可诱导免疫小鼠产生高滴度的乙型脑炎病毒中和抗体。本研究利用杆状病毒昆虫细胞表达系统获得了GⅠ JEV病毒样颗粒，为研制安全高效的乙型脑炎病毒病毒样颗粒亚单位疫苗提供物质基础。     

日本乙型脑炎病毒E抗原表位的筛选与鉴定

筛选日本乙型脑炎病毒（JEV）的E抗原表位,为开展用JEV模拟表位探索JEV的防治研究创造了条件,为多肽疫苗研制、药物筛选以及特异血清学诊断方法的建立提供重要的线索和依据。以抗JEvE蛋白的单克隆抗体作为固相筛选分子,应用噬菌体表面展示技术,按消减、结合、洗脱、扩增的顺序筛选噬菌体7肽库,挑取噬菌体单克隆培养并ELISA鉴定,对阳性克隆测序分析,确定JEVE抗原模拟表位的氨基酸序列。设计合成包含该表位的E抗原15肽（GGADSMSMAGMAVSY）cDNA序列,与pGEX-KG构建重组表达载体,诱导表达重组多肽并west-ernblot验证。经过4轮筛选后,噬菌体得到高度富集,挑取单克隆ELISA鉴定,有22个克隆呈阳性。对重组多肽进行Western blot验证,结果表明该重组多肽能够特异结合兔抗JEV多抗。应用上述方法成功筛选出JEV结构蛋白E的特异性噬菌体模拟表位,为下一步研究奠定了基础。     

乙型脑炎重组伪狂犬病病毒TK-/gG-/NS+1的安全性及免疫性

用含有日本乙型脑炎病毒 (SA14 - 14 - 2株 )非结构蛋白 NS1基因的重组伪狂犬病病毒 TK- / g G- / NS 1 免疫BAL B/ c小鼠和断奶仔猪。结果表明 ,该重组病毒对 BAL B/ c小鼠和断奶仔猪是安全的 ,免疫的 BAL B/ c小鼠能抵抗伪狂犬病病毒 (PRV )强毒 (Ea株 )的致死性攻击 ,免疫的断奶仔猪能产生乙型脑炎病毒 (JEV)特异性抗体和 JEV特异性 CTL 活性。     

Q969R polymorphism in NLRP3 is associated with immune responses to vaccination against bacterial infections in pigs

Nucleotide‐binding domain, leucine‐rich‐containing family, pyrin‐domain containing‐3 (NLRP3) is an important pattern recognition receptor involved in various inflammatory responses and adjuvant effects upon vaccination. We previously identified the Q969R (A2906G) gain‐of‐function polymorphism in porcine NLRP3, which increased production of interleukin‐1β in in vitro gene transfection experiments. Here, we explored the associations between the A2906G polymorphism and antibody responses after vaccination against bacteria in Large White pigs maintained under specific pathogen‐free conditions. The NLRP3‐2906^A/G pigs had a greater antibody response to vaccine antigens than NLRP3‐2906^A/A pigs. We observed a significant association of the antibody response against Haemophilus parasuis serotype 2 and 5 with NLRP3 genotypes. As the A2906G polymorphism in NLRP3 is widely distributed in commercial pig breeds, Landrace, Large White and Berkshire pigs, there is potential for improvement in vaccine efficiency and disease resistance using this polymorphism in various pig populations.