鱼源气单胞菌的主要特性研究

对分离于草鱼肠炎、白鲢鱼打印病、鲢鱼白皮病、草鱼烂鳃、鲤鱼体表出血感染及甲鱼败血症等病例的80株细胞进行了主要特性研究。结果表明均为气单胞菌属（Aeromonas)的细菌，其中嗜水气单胞菌（A.hydrophila)29株（占36．25％）、豚鼠气单胞菌（A.caviae)38株（占47．5％）、温和气单胞菌A.sobria）13株（占16．25％）。在被检验的病例中，或为其中一种气单胞菌的单独感染，或为两种、三种气单胞菌的混合感染。经做人工感染试验检查，表明这些分离菌均为相应感染症的致病菌。     

合肥地区类志贺邻单胞菌的动物贮存宿主调查

为探讨合肥地区类志贺邻单胞菌的动物贮存宿主，采用二次增菌分离培养法，对１５种２２８份标本进行检测，结果１２处３６份样品检出此菌，总阳性检出率为１５．７９％，鱼类、观赏水禽、家鸭、猪和清摘工，阳性检出率分别为２３．２９％、１７．８６％、１３．０４％、６．６７％和１０％，表明该菌具有广泛动物贮存宿主，尤其是淡水鱼类，同时对３６株阳性菌的血清分群，其中１７株可分群，分群率为４７．２２％，共分布于７个血清型，人源与动物源共有的血清群是Ｏ１９     

猪源气单胞菌分离鉴定及耐药谱检测

为调查气单胞菌在我国猪粪便中流行情况及耐药谱,2017年3~7月从河南省4个地区,共采集370份猪粪样品,通过缓冲液蛋白胨水增菌培养后,使用添加有氨苄青霉素的气单胞菌基础培养基选择培养,分离气单胞菌。可疑菌株通过形态特征、生化试验和16SrDNA序列比对进一步鉴定。微量稀释法测定分离菌株对17种抗菌药物耐药谱。结果显示,共分离到11株气单胞菌,分离率为2.97%,其中豚鼠气单胞菌5株(占45.45%),杀鲑气单胞菌2株(占18.18%),中间气单胞菌、嗜水气单胞菌、水生气单胞菌和贝斯特润气单胞菌各1株(各占9.09%);阿莫西林/克拉维酸菌耐药率为100%,磺胺甲恶唑、氟苯尼考耐药率81.82%,阿米卡星、美罗培南敏感率均为100%,除了其中1株气单胞菌,其他菌株对头孢噻呋、头孢曲松、庆大霉素、强力霉素、磷霉素、恩诺沙星均敏感,各菌株均呈多重耐药性。表明我国健康猪粪便中携带气单胞菌,如果造成水源或者食物污染,可能有引起人类或者动物感染的风险,应引起重视。     

维氏气单胞菌RCR快速检测方法的建立及初步应用

以维氏气单胞菌的核酸酶基因为靶基因建立了PCR快速检测方法。实验证明该方法具有良好的特异性与敏感性,对维氏气单胞菌基因组DNA的最低检测浓度为1.58×10-4ng;在人工模拟试验的30份样品中:使用PCR检测方法的样本检出率达到了86.7%(26/30),高于细菌分离培养的检出率73.3%(22/30)。该方法的建立为维氏气单胞菌的快速检测提供了新的方法。     

致病性嗜水气单胞菌耐喹诺酮类药物菌株的分离鉴定

对吉林省内12个水域采集和送检的66尾病鱼进行了细菌分离鉴定，共检出46株嗜水气单胞菌疑似菌，通过生化试验结合PCR扩增气溶素基因Aer，确定其中22株为致病性嗜水气单胞菌。进一步采用纸片扩散法和双倍稀释法测定嗜水气单胞菌分离株对多种抗生素的耐药性，其中有4株对喹诺酮类药物耐药，并且为交叉耐药，耐药菌检出率为18．2％，纸片扩散法检测其对喹诺酮类药物的抑菌圈均小于19mm。将病料中分离的8株嗜水气单胞菌负染后电镜观察，耐药菌表面有许多大小不同的球形结构，而敏感菌表面则为细丝状菌毛结构。     

鱼类致病性气单胞菌诊断试剂盒的研制

在 Dot-ELISA检测胞外蛋白酶 ( ECPase)的基础上 ,研制了鱼类致病性气单胞菌诊断试剂盒。该试剂盒可检出气单胞菌培养上清中的 ECPase,检出的最低水平为 78μg/L;气单胞菌属的细菌均呈现阳性反应 ,与迟缓爱德华菌、鳗弧菌、鲁氏耶氏菌、荧光假单胞菌等 4种常见鱼类致病菌不发生交叉反应 ,仅与大肠杆菌有轻微交叉反应。反应试剂盒和脱脂奶平板法检测 2 3株参考株和 1 2 4株样本 ,两者符合率分别为 73.9%和87.2 %。以上试验批内、批外重复 3次结果一致。试剂盒可在 2 4 h内报告结果 ,保存期达 1 a,具有敏感、特异、实用的优点 ,可用于鱼类致病性气单胞菌的诊断     

Dot-ELISA法检测致病性嗜水气单胞菌

在鱼类致病性气单胞菌诊断试剂盒的基础上,用斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA)检测致病性嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila,Ah)胞外蛋白酶ECPase54,同时用脱脂奶平板、PCR特异性扩增气溶素基因aer和16S rRNA基因检测72株气单胞菌分离株.结果显示致病性嗜水气单胞菌检测阳性率分别如下:Dot-ELISA法90.3％(65/72)、脱脂奶平板法75％(54/72)、aer基因PCR法94.4％(68/72)、16S rRNA PCR法81.9％(59/72),Dot-ELISA与其他3种方法的符合率分别为79.2％(57/72)、91.6％(66/72)、81.9％(59/72).在ECPase54兔抗血清制备后的2、4、6、12、18个月,用Dot-ELISA检测72株分离株,检测结果重复性好.结果表明Dot-ELISA法敏感、特异、实用,可用于鱼类致病性Ah的临床诊断.     

24种抗菌药物对鳖气单胞菌的抑菌试验

从北京市某养殖基地发病死亡的鳖内脏组织中,分离到２０株气单胞菌,其中嗜水气单胞菌７株,温和气单胞菌１２株,豚鼠气单胞菌１株,用２４种抗菌药物对其进行药敏试验结果,头孢三嗪,头孢噻肟,头孢呋新和头孢哌酮对该菌高度敏感。     

36株气单胞菌外毒素溶血性和致病性的测定

溶血试验和动物试验检测３６株气单胞菌外毒素的溶血性和致病性。结果显示其中３０株细菌产生的外毒素有溶血性。溶血价在菌株间差异较大。毒素的溶血介与对实验动物的致死率有明显相关性,溶血价在１：１６以上的外毒素对小鼠的致死率均为１００％,溶血价在１：８以下的餐毒素对小鼠的致死率在０￣１００％。此外,两株浊和气单力培养物无菌上清液无溶血性,但对小鼠的致死率达６６．６％,可能与细菌产生了胞外蛋白酶有关。     

用点酶法检测鱼类致病性嗜水气单胞菌HEC毒素

本试验建立的检测嗜水气单胞菌HEC毒素的点酶法,可在嗜水气单胞菌培养上清和临床病料中检出HEC毒素,可检出的最低水平为95ng/ml。用该法检测大肠杆菌、沙门氏菌、鳗弧菌、荧光假单胞菌、温和气单胞菌等的培养上清及患草鱼出血病的病鱼病料,均为阴性反应,仅与豚鼠气单胞菌、杀鲑气单胞菌新亚种及吕克氏耶尔森氏菌有轻度的交叉反应。对72株病鱼分离菌及33份病鱼组织的检测结果表明,点酶法与溶血试验的符合率分别为80.7%和90.9%。以上试验重复3次,结果完全一致。综上可见,用点酶法检测嗜水气单胞菌HEC毒素,无须作复杂的细菌鉴定,并能直接用于病料,是一个快速、敏感、特异、有效的方法,显示出广阔的应用前景。     

边贸入境黄鳝鱼,活蟹气单胞菌的分离与鉴定

从广西凭祥浦寨边贸点入境的越南黄鳝鱼,活蟹分离出８株细菌,生理生化特性显示它们的属气单胞菌,取纯培养物接种于葡萄糖发酵管,并做七叶苷水解试验,其中２株发酵葡萄糖但不产气,定为豚鼠气单胞菌（Ａｅｒｏｍｏｎａｓｃａｖｉａｃ）２株发酵葡萄糖产酸产气但不水解七叶苷,定为温和气单胞菌（Ａｅｒｉｍｉｎａｓｓｏｂｒｌａ）４株发酵葡萄产糖产气且水解七叶苷,定为嗜水单胞菌（Ａｅｒｏｍｏｎａｓｈｙｄｒｏｐｈｉｌａ）。     

大蒜素对气单胞菌的体内外抑制作用

用试管法测定了大蒜素对常见４株气单胞菌的最小抑菌浓度。结果表明,该药对这类致病菌具有较高的抗菌活性,其中对Ｕ１、Ｊ５０１、Ｊ５０２的最小抑菌浓度（ＭＩＣ）为１５．６ｍｇ／ｍｌ,对Ｐ５０２ＭＩＣ为３１．２ｍｇ／ｍｌ。对鲫鱼人工感染温和气单胞菌Ｕ１试验结果表明,大蒜素微囊按５０ｍｇ／（ｋｇ·ｄ）连用３ｄ,对治疗鲫鱼气单胞菌感染有显著效果。     

嗜温气单胞菌的鉴定及其外膜蛋白型研究

从病鳖、鳗鱼体内分离到2株嗜温气单胞菌(TAh-3、EAs-1),经形态学观察、生理生化特性等鉴定,确定TAh-3为嗜水气单胞菌,EAs-1为温和气单胞菌。动物感染试验结果表明,TAh-3株为致病性嗜水气单胞菌,对鲫鱼的致死率100%,EAs-1株为非致病性温和气单胞菌。SDS-PAGE电泳结果显示,TAh-3株外膜蛋白(OMPs)型由7条蛋白带组成,其中1条主带大小为40.0kDa;EAs-1株OMPs型由8条蛋白带组成,其中2条主带大小为38.0kDa、45.0kDa。     

甲鱼病原性豚鼠气单胞菌的分离鉴定

自杭州市郊某甲鱼场送检的病死甲鱼中分离到２２株细菌，在与嗜水气单胞菌抗血清不产生凝集的多株细菌中挑选３株作进一步鉴定，生理生化特性显示它们均属豚鼠气单胞菌。小鼠试验显示有毒力，用其中１株回归本动物发病死亡，并出现与自然病例类似症状。用１株分离菌制备的抗血清与其他２１株分离菌株进行玻板凝集试验，其中１１株有毒力菌株都出现凝集反应，显示豚鼠气单胞菌为本病的主要病原。     

改良DHL培养基分离嗜温有动力气单胞菌的实验研究与评价

嗜温有动力气单胞菌是指嗜水气单胞菌（Ａｅｒｏｍｏｎａｈｙｄｒｏｐｈｉｌａ）、豚鼠气单胞菌（Ａ．ｃａｖｉａｅ）和温和气单胞菌（Ａ．ｓｏｂｒｉａ），后两种的性状与嗜水气单胞菌基本相同。该菌对水产养殖业的危害主要是引起各种鱼类及鳖等的败血症，给水产养殖业带...     

嗜水气单胞菌Lamp检测方法的建立及应用

基于嗜水气单胞菌气溶素（aerolysin）基因的序列，设计了1套引物，通过条件优化，成功建立了针对致病性嗜水气单胞菌的环媒恒温基因扩增（Lamp）检测法。采用Lamp法对病原菌进行了扩增，并对病鱼血样进行了检测。结果表明，该法只检出致病性嗜水气单胞菌。对不同浓度的细菌悬液扩增结果表明，Lamp检测嗜水气单胞菌的最低菌液浓度为1．4～14／μL。     

框镜鲤致病性维氏气单胞菌的分离鉴定

为鉴定一株致框镜鲤发病病原菌的生物学特性,本研究由濒死框镜鲤体内分离到一株细菌CY0806,对形态学、培养特性、理化特性等生物学特性以及药物敏感性和16S rRNA序列进行检测和分析。结果显示:细菌株CY0806为革兰氏阴性菌,其理化特性与维氏气单胞菌基本相同。系统进化树分析表明,细菌株CY0806序列与维氏气单胞菌模式株ATCC35624无差异,同源性为100%,因此,鉴定该菌株CY0806为维氏气单胞菌。药物敏感性试验结果显示,庆大霉素、新霉素等11种药物对细菌株CY0806有较好的抑菌效果。     

嗜水气单胞菌弹性蛋白酶的纯化及特性分析

为阐明嗜水气单胞菌弹性蛋白酶的性质及其在致病过程中的作用，试验以我国分离的嗜水气单胞菌J-1株为研究对象．纯化了其弹性蛋白酶．并对该酶进行热稳定性、蛋白酶抑制剂抑制作用、金属离子影响和致病性等特性分析。结果表明．嗜水气单胞菌J-1株的培养上清经35％～60％硫酸铵沉淀、阴离子交换层析和凝胶过滤层析，可获得纯化的弹性蛋白酶．SDS-PAGE显示单条带．相对分子质量约38000。该酶对热稳定，EDTA可抑制其活性，PMSF对其无影响，金属离子铜、锌、钴等抑制其活性。说明此酶属于热稳定金属蛋白酶。腹腔注射纯化的弹性蛋白酶能致死小鼠．其对小鼠的LD50为6．4μg（0．2mL）．表明该酶是一种直接致病因子。     

鱼源维氏气单胞菌的耐药性研究

为检测7株鱼源维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)的耐药基因和耐药表型的分布情况,试验采用PCR法检测分离株中氨基糖苷类耐药基因(aac(3)-Ⅱa、aac(6')-Ⅰb、ant(3")-Ⅰa和aph(3')-Ⅱa),磺胺类耐药基因(Sul1、Sul2和Sul3)和四环素类耐药基因(tetA、tetC和tetM),运用Kirby-Bauer纸片扩散法检测7株鱼源维氏气单胞菌分离株对22种常用抗生素的敏感性。结果表明,可检出耐药基因aac(3)-Ⅱa(71.4%)、aac(6')-Ⅰb(85.7%)、Sul2(85.7%)和tetA(28.5%);未检出ant(3")-Ⅰa、aph(3')-Ⅱa、Sul1、Sul3、tetC和tetM基因。7株维氏气单胞菌对磷霉素(100%)、多黏霉素B(100%)、痢特灵(85.7%)、奥复星(71.4%)较敏感;对氨苄西林(100%)、乙酰螺旋霉素(100%)、复方新诺明(85.7%)、磺胺异恶唑(85.7%)、四环素(85.7%)等耐药。这说明耐药基因和耐药表型之间存在一定的相关性。     

两株气单胞菌的分离与鉴定

从福建省某牛蛙养殖场病死牛蛙和某鸭场病死鸭体内分离到两株细菌，检验结果表明，两株分离菌均为有运动力的革兰氏阴性杆菌。根据其临床症状、细菌培养特性、生化特性、动物回归试验以及溶血试验等一系列试验，研究证明牛蛙感染的病原为嗜水气单胞菌，鸭感染的病原为温和气单胞菌。