中国大陆株日本血吸虫23kD基因重组抗原的研究：—23kD抗原大亲水…

应用多聚酶链反应技术从中国大陆株日本血吸虫成虫ｃＤＮＡ文库筛选到一编码２３ｋＤ抗原大亲水区多肽的克隆基因，并把它连接到ｐＧＥＸ载体上进行ＤＮＡ序列分析和蛋白质表达。结果表明，该克隆基因和编码菲律宾株日本血吸虫２３ｋＤ抗原大亲水区多的克隆基因碱基组成非常相似，１９３年碱基中只有一个不同，而且这个碱基差不影响氨基酸序列组成，该重组基因在大杆菌里得到高产量表达，而且融合蛋白的纯化很方便，免疫印渍转移试验     

应用Sj23基因重组抗原诊断牛、羊血吸虫病研究

以血吸虫基因重组抗原LHD-Sj23／pGEX(血吸虫23kD抗原大亲水区多肽／pGEX载体表达蛋白)作为抗原。应用ELISA法检测黄、水牛和绵羊血吸虫病。结果对黄、水牛的阳性符合率为94．0％(79／84)和85．5％(53／62)，阴性符合率为82．7％(81／98)和95．1％(77／81)，对绵羊的阳性符合率为86．04％(111／129)，阴性符合率为100％(9l／91)。以血吸虫成虫抗原(SWAP)及虫卵抗原(SEA)作为诊断抗原获得的结果差异不明显。对锥虫感染绵羊血清不出现交叉反应。由于基因重组抗原的制备比虫体抗原制备简便、价廉，同时由于基因重组抗原的应用有利于诊断技术的标准化，以基因重组抗原作为血吸虫病诊断抗原具有良好的研究应用前景。     

产气荚膜梭菌α毒素保护性抗原基因在大肠杆菌中的高效表达

对含有产气荚膜梭菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）α毒素基因的重组菌株ＢＬ２１（ＤＥ３）（ｐＸＥＴＡ１）和ＢＬ２１（ＤＥ３）ｐｌｙｓＳ（ｐＸＥＴＡ１）,通过培养性状观察和小鼠接种试验,证明这２株重组菌株均无致病性。随后对这２株重组菌株的表达产物进行了研究,经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和薄层凝胶扫描分析,ＩＰＴＧ诱导３～４ｈ后的ＢＬ２１（ＤＥ３）（ｐＸＥＴＡ１）表达的α毒素占菌体总蛋白３３．２１％,ＢＬ２１（ＤＥ３）ｐｌｙｓＳ（ｐＸＥＴＡ１）表达的α毒素占菌体总蛋白２７．２５％,其相对分子质量约３７５００;经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析,表达产物可被α毒素抗血清识别。包涵体粗提物的免疫攻毒试验结果表明,以１倍致死量攻击的免疫小鼠可获得１００％（３６／３６）的保护,以２倍致死量攻击的免疫小鼠可获得９４．２８％（３３／３５）的保护,从而说明表达产物具有良好的免疫原性。     

日本血吸虫谷胱甘肽S—转移酶小鼠免疫试验

用谷胱甘肽琼脂糖亲和层析柱纯化中国大陆株日本血吸虫成虫谷胱甘肽Ｓ－转移酶（ＧＳＴ）。把纯化的ＧＳＴ结合福氏佐剂免疫了二批ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，获得了２９．５８～３２．７１％的减虫率和５２．９４～６８．１３％，粪便减卵率，ＥＬＩＳＡ试验表明免疫小鼠产生了体液免疫应答，免疫印迹试验（Ｗｅｓｔｒｎ Ｂｌｏｔｔｉｎｇ）显示日本血吸虫水溶性成虫抗原和ＧＳＴ抗原的２８、２８ｋＤ蛋白被免疫小鼠血清所识别。     

日本血吸虫谷胱甘肽S－转移酶小鼠免疫试验

用谷胱甘肽琼脂糖亲和层析柱纯化中国大陆株日本血吸虫成虫谷胱甘肽Ｓ－转移酶（ＧＳＴ）。把纯化的ＧＳＴ结合福氏性剂免疫了二批达ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，获得了２９．５８～３２．７１％的减虫率和５２．９４～６８．１３％的粪便减卵率。ＥＬＩＳＡ试验表明免疫小鼠产生了体液免疫应答，免疫印迹试验（ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔｔｉｎｇ）显示日本血吸虫水溶性成虫抗原和ＧＳＴ抗原的２６、２８ｋＤ蛋白被免疫小鼠血清所识别。     

表达大肠杆菌肠毒素ST1-LTB融合蛋白双价基因工程菌株的构建

重组菌株ＢＬ２１（ＤＥ３）（ｐＸＥＴＳＬＴ１）经ＩＰＴＧ诱导后,其表达产物经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和ＥＬＩＳＡ检测,结果表明重组菌株可以高效表达大肠杆菌肠毒素ＳＴ１－ＬＴＢ 融合蛋白,该融合蛋白占菌体总蛋白的３３．２１％ ,而且已失去天然ＳＴ１肠毒素生物毒性。用从ＩＰＴＧ 诱导的工程菌中提取的包涵体或经甲醛灭活的工程菌制成抗原免疫小鼠,结果免疫小鼠至少能抵抗１．５ＭＬＤ 的大肠杆菌强毒株Ｃ８３９０２（Ｋ８８ａｃ,ＳＴ＋ ,ＬＴ＋ ）的攻击。用提取的包涵体免疫家兔后,采集的血清能够中和天然ＳＴ１肠毒素的毒性。这表明构建的工程菌株ＢＬ２１（ＤＥ３）（ｐＸＥＴＳＬＴ１）可以作为预防幼畜大肠杆菌性腹泻基因工程菌苗的候选株     

猪带绦虫六钩蚴抗原基因的克隆与表达

以λｇｔ１１为载体构建了猪带绦虫六钩蚴ｃＤＮＡ文库，从中筛选出５株表达六钩蚴抗原成分的重组噬菌体。将其中的六钩蚴ｃＤＮＡ与表达质粒ｐＧＥＸ－４Ｔ２连接，在ＴＧ１大肠杆菌中高效表达，获得了２株表达ＧＳＴ－六钩蚴抗原融合蛋白（Ｍｒ分别为５×１０４和６×１０４）的工程菌。在ＬＢ营养液中添加１％乳糖和０．２％葡萄糖，工程菌的表达效果优于用ＩＰＴＧ诱导的效果。融合蛋白约占工程菌总蛋白的２３％。     

类志贺氏菌毒素Ⅱ型变异体B亚单位基因的表达与鉴定

将由 Ｐ Ｃ Ｒ 扩增并克隆在ｐ Ｕ Ｃ１８ 质粒载体中的ｓｌｔⅡｅ Ｂ基因切出,并按预定的阅读框架插入表达性质粒载体 ｐ Ｇ Ｅ Ｘ６ｐ１ 中的谷胱苷肽转移酶（ Ｇ Ｓ Ｔ）基因的下游。重组质粒 ｐｐｐｓｌｔⅡｅ Ｂ在大肠杆菌 Ｂ Ｌ２１ 中以融合蛋白的形式表达 Ｓ Ｌ ＴⅡｅ Ｂ蛋白（命名为 Ｇ Ｓ Ｔ Ｓ Ｌ ＴⅡｅ Ｂ）,即 Ｓ Ｌ ＴⅡｅ Ｂ蛋白（７５６８ｋ Ｄ）与谷胱苷肽转移酶（２７３３５ｋ Ｄ）相连组成分子量为 ３４８８５ｋ Ｄ 的融合蛋白。通过对重组大肠杆菌 Ｐ Ｐ Ｓ Ｌ ＴⅡｅ Ｂ的菌体裂解物的 Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ 电泳分析,以及根据抗原抗体结合反应的免疫学特性,通过 Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ 鉴定,重组大肠杆菌 Ｐ Ｐ Ｓ Ｌ ＴⅡｅ Ｂ（含有重组质粒 ｐｐｓｌｔⅡｅ Ｂ的大肠杆菌 Ｂ Ｌ２１）可以大量表达融合蛋白形式的 Ｓ Ｌ ＴⅡｅ Ｂ。根据 Ｇ Ｓ Ｔ 可与其底物谷胱苷肽结合的特性,用谷胱苷肽结合的 Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４ Ｂ制备的亲和凝胶纯化表达产物,纯化的表达产物经 Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ,可以鉴定到分子量约为 ３５ｋ Ｄ 的蛋白条带,这与融合蛋白形式的 Ｓ Ｌ ＴⅡｅ Ｂ分子量（３４８８５ｋ Ｄ）相当。     

日本血吸虫重组抗原Sj GST Paramyosin和Sj23对绵羊的保护性免疫…

１９９４￣１９９５年１９９７年应用日本血吸虫３类候选疫苗分别免疫绵羊，各组的减虫率、粪便虫卵减少率和组织（肝、大肠、小肠）的虫卵减少率分别是：虫体副肌球蛋白组１７．４％￣５５．３％，１４．６％￣６８．１％和４８．９％￣７６．７％；重组副肌球蛋白组４１．４％￣４４．２％，１５．９％￣２５．１％和４１．１％￣４８．０％；Ｓｊ２６谷胱甘肽Ｓ转移酶（ＧＳＴ）组５３．４％￣６２．１％，１１．０％￣３８．６％     

HIV—2env基因在大肠杆菌和重组痘苗病毒中的表达

将编码人Ⅱ型免疫缺陷病毒（ＨＩＶ－２）ｅｎｖｇｐ１２０（Ｅ１）和ｇｐ３６（Ｅ２）分别克隆到原核高效表达载体ｐＥＴ１７ｂ、ｐＢＶ２２０和真核表达载体ｐ１０、ｐ１６中,构建成８个重组质粒。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析证明,在原核表达系统成功地表达了ＨＩＶ－２ｅｎｖ融合蛋白,表达的蛋白分子量分别为３５０００、７００００和５００００,而原核表达质粒ｐＥＴＥ１在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ凝胶的３５０００处可见明显的额外蛋白带。经薄层扫描测定,原核系统表达的Ｅｎｖ蛋白（ｇｐ１２０）相对含量为５．８％。在真核细胞中表达的Ｅｎｖ蛋白经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测分析,分子量分别为６００００、５７０００和４２０００。上述表达的Ｅｎｖ蛋白均能与ＨＩＶ－２阳性血清发生特异性反应。重组痘苗病毒可诱导小鼠产生抗ＨＩＶ－２Ｅｎｖ抗体     

用几种电泳方法分析牦牛肝片吸虫不同部位抗原

应用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、等电聚焦电泳（ＩＥＦ）及双向电泳三种电泳方法分析牦牛肝片吸虫成虫四种抗原（头抗原－ＨＡ、体抗原－ＢＡ、体表抗原ＳＡ、分泌排泄抗原－ＥＳ）。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ结果表明，ＢＡ、ＨＡ、ＳＡ分子量在１２～１００ｋＤ之间，ＥＳ在１２．３～２６ｋＤ之间，蛋白质染色ＢＡ、ＨＡ、ＳＡ、ＥＳ分别显示２５、２４、１８、９条带；ＩＥＦ分析肝片吸虫分别得３４、３３、２８、２２条带，主要由酸性蛋白质组成，主要谱带在ｐＩ４．２０～６．５５内；双向电泳分析ＢＡ、ＥＳ多肽斑点为６９、３０个     

NDV小片段多肽F14a的融合表达和应用研究

将对应ＮＤＶ强毒株Ｆ基因裂解位点附近编码１４个多肽的双链寡核苷酸片段克隆到融合表达载体ｐＧＥＭＥＸ－１,构建重组质粒ＤＧＥＭＦ１４ａ并转化大肠杆菌ＤＥ３。将ＧＥＭＦ１４ａ／ＤＥ３的融合表达产物免疫兔,制备抗多肽抗体。该抗体与ＤＮＶ强毒株Ｆ４８Ｅ９呈ＥＬＩＳＡ强阳性反应,Ｐ／Ｎ〉３．５￣７．０,百与弱毒ＮＤＶ的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ系呈阴性反应,Ｐ／Ｎ〈２．０,证明制备的Ｆ１４ａ抗多肽抗体是特异的,中用于强     

猪水泡病病毒主要抗原蛋白基因在大肠杆菌中的表达

将编码猪水泡病病毒（ＳＶＤＶ）主要抗原蛋白的基因片段克隆到大肠杆菌表达载体ｐＢＶ２２０的ＰｒＰ１串联启动子的下游,分别构建了重组质粒ｐＢＶ２２０－ＶＰ３（０．６ｋｂ）及ｐＢＶ２２０－ＶＰ３－ＶＰ１（约１．６ｋｂ）,表达的蛋白经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ及Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测,结果表明,表达的ＶＰ３蛋白只与猪水泡病病毒ＶＰ３特异性亚单位抗血清反应,而ＶＰ３－ＶＰ１蛋白未能成功表达。该实验为ＳＶＤＶ疫苗研究奠定了基础。     

应用LHD-Sj23和SjCL基因重组抗原诊断水牛日本血吸虫病的研究

目的：验证日本血吸虫基因重组抗原检测水牛日本血吸虫病的效果。方法：以日本血吸虫基因重组抗原LHD-Sj23／pGEX和SjCL／pET-28a( )作为抗原，应用ELISA法检测水牛日本血吸虫病。结果：感染日本血吸虫病阳性符合率分别为93．3％(42／45)和95．6％(43／45)，阴性符合率分别为93．3％(42／45)和80％(36／45)。和以血吸虫成虫抗原(SWAP)和虫卵(SEA)抗原作为诊断抗原获得的结果差异不明显。同时将上述两种基因重组抗原混合作为诊断抗原，检测水牛血吸虫病，结果阳性符合率为88．9％(40／45)，阴性符合率为33．3％(15／45)。结论：由于基因重组抗原制备简便、价廉，有利于诊断技术的标准化。因此，基因重组抗原在血吸虫病诊断领域有着良好的研究和应用前景。     

柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)BJ株SO7重组抗原的免疫试验

将柔嫩艾美耳球虫（Ｅｉｍｅｒｉａ ｔｅｎｅｌｌａ）ＢＪ株Ｓ０７基因插入ｐＴｈｉｏＨｉｓＢ载体中,构建了１个表达载体,命名为ｐＴｈｉｏＨｉｓＳ０７。将此表达载体转入大肠杆菌ＤＨ５ａ,经ＴＰＴＧ诱导表达后,用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测表达产物。结果表明,含ｐＴｈｉｏＨｉｓＳ０７质粒原工程菌具有明显的表达产物,表达效率为１７．１％。用超声波粉碎仪裂解含重组抗原的工程菌,加入钾加矾作佐剂,用２个剂量（１０、１０     

狂犬病病毒糖蛋白基因在原核细胞中的表达

将狂犬病病毒糖蛋白（ＲＶｇｐ）基因ＢｇｌⅡ片段（１６７５ｂｐ）分别正向插入到原核高效表达载体ｐＥＴ－１７ｂ和ｐＥＴ－１７ｂ２（用ＳａｃⅠ－ＮｄｅⅠ缺失掉ｐＥＴ－１７ｂ６０ｂｐ含起始密码子ＡＴＧ小片段）的ＢａｍＨⅠ切点，构建重组质粒ｐＥＴ－１７ｂＲＶｇｐ和ｐＥＴ－１７ｂ２ＲＶｇｐ。将其分别转化表达受体菌Ｅ．ｃｏｌｉＢＬ２１（ＤＥ３）和Ｅ，ｃｏｌｉＢＬ２１（ＤＥ３）ｐｌｙｓＳ．ＩＰＴＧ诱导表达，菌体经超声波裂解处理后ＳＤＳ－ｐＡＧＥ，染色，在分子量约６００００处可见重组质粒表达的较宽的蛋白带，以抗ＲＶｇｐＭｃＡｂ进行Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ检测，表明该表达蛋白为ＲＶｇｐ。通过扫描显示，表达的ＲＶｇｐ占菌体总蛋白的１０％～１４％，其中ｐＥＴ－１７ｂ２ＲＶｇｐ在Ｅ。ｃｏｌｉＢＬ２１（ＤＥ３）中的表达量最高。     

猪带绦虫六钩抗原基因的克隆与表达

以λｇｔ１１为载体构建了猪带绦虫钩蚴ｃＤＮＡ文库，从中筛选出５株表达六钩蚴抗原成分的重组噬菌体。将其中的六钩蚴ｃＤＮＡ与表达质粒ＰＧＥＸ－４Ｔ２连接，在ＴＧ１大肠杆菌中高效表达，获得了２株表达ＧＳＴ－六钩蚴抗原融合蛋白（Ｍｒ分别为５×１０＾４和６×１０＾４）的工程菌。在ＬＢ营养液中添加１％乳糖和０．２％葡萄糖，工程菌的表达效果优于用ＩＰＴＧ诱导的效果。融合约占工程菌总蛋白２３％。     

猪生殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白在昆虫细胞中的表达及其用作诊断抗原的研究

对猪生殖与呼吸综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）核衣壳蛋白（Ｎ）作为ＥＬＩＳＡ抗原进行了研究，将编码ＰＲＲＳＶＮ蛋白的基因０ＲＦ７ｃＤＮＡ插入杆状病毒表达载体ｐＢｌｕｅＢａｃＨｉｓ２Ａ，通过同源重组获得了重组杆状病毒ＯＲＦ７－ＡｃＭＮＰＶ，感染昆虫细胞ＳＦ９表达了Ｎ蛋白，占细胞总蛋白的７．０７％，纯化后作为抗原建立了间接ＥＬＩＳＡ，与ＩＤＥＸＸ公司的ＥＬＩＳＡ诊断试剂盒有９６％的符合率，与ＩＦＡ有１００％的符合率。试验证实：ＰＲＲＳＶＮ蛋白在昆虫细胞中得到高效表达且是检测ＰＲＲＳＶ抗体的良好抗原。     

大肠杆菌肠毒素ST1-LTB融合基因的高效表达

用限制性核酸内切酶ＥｃｏＲⅠ和ＨｉｎｄⅢ双酶切含大肠杆菌肠毒素ＳＴ１—ＬＴＢ融合基因的质粒ｐＸＳＬＴ１,回收０８４ｋｂ的ＳＴ１—ＬＴＢ融合基因,再将载体ｐＥＴ—２８ｂ（＋）用ＥｃｏＲⅠ和ＨｉｎｄⅢ双酶切,然后将其与ＳＴ１—ＬＴＢ融合基因连接,转化至受体菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中。经ＥｃｏＲⅠ、ＨｉｎｄⅢ、ＢａｍＨⅠ酶切反应鉴定重组子质粒,得到了理想重组质粒ｐＸＥＴＳＬＴ１。重组菌株ＢＬ２１（ＤＥ３）（ｐＸＥＴＳＬＴ１）经ＩＰＴＧ诱导后,其表达产物经ＳＤＳ—ＰＡＧＥ和ＥＬＩＳＡ检测,结果表明重组菌株可以高效表达ＳＴ１—ＬＴＢ融合蛋白,该融合蛋白占菌体总蛋白的３３２１％,而且无天然ＳＴ１生物毒性。     

多头纤虫抗原特性的研究——多头绦虫节片抗原及原头节ES抗原的S…

为了探明多头绦虫成虫节片抗原及多头蚴原头节排泄分泌抗原的多肽组分，以供今后在免疫诊断与预防脑多头蚴病的应用，本试验应用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ首次分析了多头绦虫成虫节片抗主多头蚴原头节ＥＳ抗原的多肽组分。应用１２．５％凝胶的连续系统，垂直板型电泳，考马斯亮头Ｒ－２５０染色的结果表明，成虫节片抗原共有１６条多肽带，其分子量范围２９￣１５４ＫＤ，其中主带４条，分别为７３，８８，１２８，１３４ＫＤ，原头节ＥＳ抗