13种常用农药和玫烟色棒束孢SCAU-IFCF01的相容性研究

为了研究常用农药和生防真菌玫烟色棒束孢Isaria fumosorosea之间的相容性,本文测定了13种常用农药对玫烟色棒束孢孢子萌发、菌丝生长及产孢量的影响。试验结果表明,杀虫剂与玫烟色棒束孢的相容性优于杀菌剂。其中,高效氯氰菊酯与玫烟色棒束孢相容性最好,在常规浓度下,对玫烟色棒束孢孢子萌发和菌丝生长的抑制率分别只有2.42%和1.62%,对产孢基本无抑制作用,苏云金芽胞杆菌和氯氰菊酯与玫烟色棒束孢也有较好的相容性,二者在常规使用浓度下对孢子萌发、菌丝生长、产孢量的抑制率分别为6.05%、2.83%、22.41%和16.3%、7.81%、16.67%。高效氯氟氰菊酯、氟啶脲、丙溴磷与玫烟色棒束孢有一定的相容性。丙环唑、百菌清、戊唑醇、木霉菌、阿维菌素、甲维盐与玫烟色棒束孢的相容性则相对较差。     

玫烟色拟青霉对菜青虫的侵染及致病作用

采用扫描电镜和组织切片方法研究了玫烟色拟青霉(Paecilomyces fumosoroseus)对3龄菜青虫的侵染和致病作用。结果表明:玫烟色拟青霉可通过体壁侵染虫体。3龄菜青虫在接菌8h后,附着在虫体表面的孢子开始萌发,24h后菌丝即可穿透体壁进入血腔,48h后可见虫体内有部分菌丝体。侵入虫体内的菌丝对寄主组织没有选择性。菌丝首先在入侵的血腔中生长,然后侵入邻近的脂肪体和肌肉,随菌丝在虫体内的增殖,中肠、丝腺等相继被侵染。受侵的各组织器官均发生明显的病变,如体壁分离、脂肪体变形、溶解,肌纤维排列松散,中肠上皮细胞脱落并出现许多空泡等。     

玫烟色棒束孢的生物学特性与其对小菜蛾致病力的相关性

测定了玫烟色棒束孢原始亲本菌株PFCF-O、退化亲本菌株PFCF-D和单孢分离子菌株PF-CF-D58、PFCF-D20、PFCF-D50的菌落生长速率、产孢量、孢子萌发率和胞外蛋白酶水平等生物学指标以及各菌株对小菜蛾2龄幼虫的校正死亡率。结果表明,菌株PFCF-O的生长速率呈先快后慢的趋势,产孢量为2.7×107个/mL,孢子萌发率为62.59%,胞外蛋白酶水平为1.16,对小菜蛾2龄幼虫校正死亡率达97.74%。而菌株PFCF-D、PFCF-D20、PFCF-D50和PFCF-D58间平均生长速率和孢子萌发率无显著差异,产孢量变化范围为1.05×107~2.34×107个/mL,胞外蛋白酶水平变化范围为1.02~1.07,各生物学指标及其对小菜蛾2龄幼虫的校正死亡率(19.86%~51.44%)都显著低于菌株PFCF-O。相关性分析结果显示,玫烟色棒束孢对小菜蛾的致病力与菌株生长初期的生长速率、产孢量、孢子萌发率和胞外蛋白酶水平呈极显著的正相关关系,与菌株生长后期的生长速率呈极显著负相关关系。     

紫蓬山国家森林公园虫生真菌物种多样性与分布特点

本文系统研究了紫蓬山虫生真菌资源概况。共采集分离获得436株虫生真菌,鉴定为6属13种,其中优势种为环链棒束孢、蝉棒束孢、球孢白僵菌和玫烟色棒束孢,4种优势种占所有菌株的89.23%。对其虫生真菌季节变化和分布特点进行研究发现,虫生真菌数量丰富但物种多样性指数较低;夏季和晚春虫生真菌最为丰富,随着气温及降雨量的下降,菌株数量逐渐下降;不同季节环链棒束孢、蝉棒束孢和球孢白僵菌的数量波动大,但玫烟色棒束孢波动较小。环链棒束孢、蝉棒束孢和玫烟色棒束孢主要分布于阔叶林中,对单一生境的依赖性较强;而球孢白僵菌主要分布于针叶林中。本研究明确了紫蓬山虫生真菌的物种多样性和分布特点,为进一步开发生物农药奠定基础。     

小菜蛾感染绿僵菌后的病征及组织病理变化

小菜蛾感染绿僵菌后，虫体颜色及外部形态会发生相应变化。组织切片观察表明，绿僵菌菌株LD65处理后36h，附着于小菜蛾体壁的孢子开始萌发入侵。48h后，小菜蛾内表皮被分解，菌丝段进入血腔，并向侵入点附近的脂肪体入侵。3d后感染幼虫死亡，各组织器官均受到侵染。随着绿僵菌继续在死虫体内增殖，各组织器官遭到不同程度破坏。5d后，菌丝突破体表，在虫体外形成菌丝层。菌株LF68侵染过程与LD65相似，但侵染速度快于LD65。     

西双版纳自然保护区玫烟色棒束孢分布的时空动态及寄主多样性

为明确西双版纳自然保护区虫生玫烟色棒束孢的时空动态及寄主多样性，以期为玫烟色棒束孢的开发利用提供理论依据和材料。本研究于2017年7月—2018年9月，对西双版纳自然保护区石灰岩山季雨林、热带季雨林、季风常绿阔叶林、热带丛生竹林、暖热性针叶林5种生境中玫烟色棒束孢的发生季节、生境分布和寄主进行了调查研究，采用形态学和ITS序列对菌株进行种类鉴定。结果表明，在西双版纳自然保护区共采集玫烟色棒束孢674株。从时间动态来看，玫烟色棒束孢于当年10月至次年4月为发生流行期，12月或次年1月为发生高峰期。从空间分布来看，玫烟色棒束孢主要分布于热带丛生竹林和石灰岩山地雨林的低、高和中海拔地带，分别采集到150和133、118、104株，相对丰度分别为22.3%、19.7%、17.5%和15.4%；热带季雨林和季风性常绿阔叶林中相对较少，分别采集到77和73株，相对丰度分别为11.4%和10.8%；暖热性针叶林生境仅采集到19株，相对丰度为2.8%。从海拔分布来看，石灰岩山季雨林生境中，玫烟色棒束孢在高、中、低海拔生境中分布的差异不明显，低海拔生境中菌株数量略高于中海拔和高海拔生境。玫烟色棒束孢的寄主节肢动物有2纲12目，包括昆虫纲11目，蛛形纲1目，其中优势寄主为鳞翅目和膜翅目，其相对丰度分别为40.4%和36.4%。该研究为玫烟色棒束孢生物多样性研究提供了重要内容，也为害虫生防高毒力玫烟色棒束孢菌株筛选提供材料。     

玫烟色棒束孢菌株间的rDNA多态性

本文基于ITS-5.8S rDNA序列对来自国内外的玫烟色棒束孢不同菌株进行了系统发育及DNA多态性研究。系统发育分析表明,玫烟色棒束孢全部被试序列都分离为两个完全独立的支系,分别为聚在分支CladeⅠ-1中且支持率为94%的菌株和聚在分支CladeⅡ-1内且支持率为90%的菌株;为了确定上述2支系的真正分类地位,对所试玫烟色棒束孢与爪哇棒束孢菌株进行了多态性研究,获得8个单倍型,单倍型多样性Hd=0.65,核苷酸多样性Pi=0.04,以及2个不同的DNA序列保守区等。通过系统发育及多态性研究结果表明所试玫烟色棒束孢无论在种的水平上或假定的种群水平上,其遗传多样性都较大、分化明显,它们的差异已超出了种的边界,分支CladeⅠ-1中的菌株是典型的玫烟色棒束孢,而CladeⅡ-1中的玫烟色棒束孢菌株可能是爪哇棒束孢。     

基于环介导等温扩增技术的玫烟色棒束孢可视化检测

玫烟色棒束孢Isaria fumosorosea是一种重要的虫生真菌，已成为微生物源农药的一个要资源。由于缺乏有效手段，无法对罹病害虫中玫烟色棒束孢进行大量、快速、准确的检测，严重制约了该生防菌株防治效果的科学评价。本研究通过环介导等温扩增（LAMP）技术的引物设计和体系优化，建立了玫烟色棒束孢菌株可视化的LAMP检测方法。该检测方法特异性强，准确率高，与其他常见生防菌株和病原菌无交叉反应；检测时间短，60 min可得到阳性结果；灵敏度高，是常规PCR方法的100倍。该方法的建立为田间条件下玫烟色棒束孢菌株的毒力测定与安全性评价提供了新技术。     

虫生真菌玫烟色棒束孢PF904表面活性剂的筛选

为筛选适用于玫烟色棒束孢Isaria fumosorosea PF904菌株的表面活性剂,采用OWRK法和表面张力法测定了甘蓝、苹果、茄子和黄瓜叶片的表面自由能以及添加4种表面活性剂后玫烟色棒束孢孢子悬浮液的表面张力和临界胶束浓度(CMC),并采用量角法和重量差值法测定了4种不同植物叶片上的接触角和最大稳定持留量,同时对筛选获得的表面活性剂进行了安全性评价。结果表明:PEG-12聚二甲基硅氧烷(OFX-0193)、ɑ-烯基磺酸钠(AOS)和二异丁基萘磺酸钠(Nekal)3种表面活性剂在125~500 mg/L下均可提高玫烟色棒束孢孢子悬浮液在4种供试植物叶片上的润湿性能;其中250 mg/L的Nekal在甘蓝和苹果叶片上的最大持留量(11.90和13.28 mg/cm^2)和接触角(29.5°和27.5°)均显著优于OFX-0193和AOS,润湿效果最好;在茄子叶片上,添加125 mg/L的OFX-0193时持留量最大(9.45 mg/cm^2);而添加普鲁兰多糖(Pullulan)达到临界胶束浓度时的溶液表面张力大于甘蓝、苹果和茄子叶片的表面自由能,润湿性能最差。孢子萌发抑制率的测定结果表明:添加Nekal和OFX-0193对玫烟色棒束孢PF904的孢子萌发无抑制作用,而AOS则对其表现为抑制作用。因此,在玫烟色棒束孢PF904中添加OFX-0193和Nekal 2种表面活性剂可用于防治苹果、甘蓝类害虫,添加OFX-0193还可用于防治茄类害虫。     

玫烟色棒束孢与球孢白僵菌对桃蚜致病力对比

为选取具有杀蚜潜力的虫生真菌,采用喷雾法比较研究了玫烟色棒束孢IF-1106和球孢白僵菌BB-1339对桃蚜成蚜的致病力,并利用时间-剂量-死亡率模型估计了2菌株对桃蚜的致死剂量与致死时间。结果表明,菌株IF-1106侵染桃蚜后菌丝如棉絮状,形成淡玫瑰色分生孢子,且菌丝侵染速度快于菌株BB-1339;菌株BB-1339侵染桃蚜后菌丝短而致密,形成白色分生孢子。菌株IF-1106在浓度为1×10⁸ CFU/mL时,累计死亡率达到91.7%,而菌株BB-1339最高仅为55.0%。时间-剂量-死亡率模型中Hosmer-Lemeshow方法拟合异质性检验表明模型拟合良好,在接种后7 d,菌株IF-1106和BB-1339对桃蚜的半致死浓度分别为1.20×10⁵ CFU/mL和8.15×10⁷ CFU/mL;当浓度为1×10⁸ CFU/mL时,2菌株对桃蚜的半致死时间分别为4.2 d和6.8 d。表明菌株IF-1106对桃蚜的致病力高于菌株BB-1339,更具开发潜力。     

加州新小绥螨对土耳其斯坦叶螨的捕食作用

为明确加州新小绥螨Neoseiulus californicus （McGregor）对土耳其斯坦叶螨Tetranychus turkestani （Ugarov et Nikolski）的捕食潜力,采用捕食功能反应方法,研究了加州新小绥螨对土耳其斯坦叶螨各螨态的捕食作用。加州新小绥螨对雌成螨、若螨、卵的选择性捕食系数分别为0.44、1.25和1.35。在不同温度条件下,加州新小绥螨对土耳其斯坦叶螨的功能反应均属于Holling-Ⅱ型;28 ℃时捕食能力最强,对土耳其斯坦叶螨雌成螨、若螨和卵的攻击系数分别是0.6279、0.7203和0.7554,最大日捕食量分别为10.81头、28.49头和 40.82粒。在相同温度下,加州新小绥螨雌成螨寻找效应随着猎物密度的增加而降低;在相同密度下,寻找效应随温度的升高先增加后减小,在28 ℃时寻找效应最高,为0.535。加州新小绥螨的捕食作用存在较强的种内干扰作用（m=0.520）,随着捕食者密度的增大,平均捕食量逐渐减少,捕食作用率也相应降低。研究表明加州新小绥螨对土耳其斯坦叶螨具有很好的控制潜力。     

两株棒束孢菌的鉴定及其对茶卷叶蛾和茶小卷叶蛾的致病力

为明确分离自茶卷叶蛾和中华大刀螳僵虫的2株虫生真菌的归属及生防潜力,采用形态学特征和rDNA-ITS序列分析其分类地位,测定了其对茶卷叶蛾和茶小卷叶蛾幼虫的致病力,并初步筛选了其最适培养条件.结果表明:2株真菌均为环链棒束孢Isaria cateniannulata,分别命名为ICBS918和ICTL911.在1.0×10⁸孢子/mL浓度下,ICBS918和ICTL911对茶卷叶蛾幼虫的累计校正死亡率均达100%,LT₅₀分别为3.13 d和3.15 d;对茶小卷叶蛾幼虫的累计校正死亡率分别为100%和95%,LT₅₀分别为3.25 d和3.31 d.接菌后8 d,2菌株对茶卷叶蛾幼虫的LC₅₀分别为0.47×10⁵孢子/mL和1.01×10⁵孢子/mL;对茶小卷叶蛾幼虫的LC₅₀分别为2.20×10⁵孢子/mL和1.34×10⁵孢子/mL.2菌株23 ℃下最适生长培养基均为综合马铃薯培养基,最适产孢培养基均为蛋白胨马铃薯葡萄糖琼脂培养基;在萨氏培养基上,菌株ICBS918和ICTL911分别在24~30 ℃及24 ℃时生长速度最快,在27 ℃和21 ℃时产孢量最大.表明2株环链棒束孢对茶卷叶蛾和茶小卷叶蛾幼虫均具有较好的生防潜力,可作为生防菌进行开发和应用.     

生防菌Alternaria amaranthi-3对反枝苋的防治效果

反枝苋Amaranthus retroflexus是一种世界性恶性杂草。为了确定微生物除草剂候选菌Alternaria amaranthi-3防除反枝苋的潜力,通过盆栽试验研究了接种浓度、露期和水乳剂型对A.ama-ranthi-3菌株致病力的影响。结果显示,接种浓度显著影响菌株的致病力,在48h露期条件下,接种孢子浓度为105个/mL时,菌株水剂对反枝苋幼苗生长抑制率为35.55%;浓度为107个/mL时,生长抑制率达到75.25%。露期对该菌株的致病力也有较大影响,在不保湿条件下,菌株水剂对反枝苋的生长抑制率为26.43%,而保湿48h处理的生长抑制率达到77.96%。Span80∶Tween80=1∶3的复配乳化剂和大豆油制备的水乳剂可显著降低露期对菌株防效的影响和提高菌株的致病力,无露期时,菌株水乳剂对反枝苋的生长抑制率达到88.35%,显著高于水剂;48h露期条件下,菌株水乳剂处理的生长抑制率为90.59%,而菌株水剂处理为77.96%。表明通过剂型的改进菌株Alternaria amaranthi-3能有效防除反枝苋。     

四种熏蒸剂对辣椒疫霉和南方根结线虫的毒力

为明确不同熏蒸剂对土传病原菌辣椒疫霉Phytophthora capsici和南方根结线虫Meloidogyne incognita的毒力,采用密闭熏蒸法测定了4种土壤熏蒸剂氯化苦、棉隆、威百亩、1,3-二氯丙烯的毒力及1,3-二氯丙烯和氯化苦复配的联合毒力。结果表明:氯化苦、棉隆、威百亩、1,3-二氯丙烯对辣椒疫霉的EC₅₀分别为0.12、2.44、8.30、8.45 mg/L; 对南方根结线虫的EC₅₀ 分别为1.23、0.22、0.30、0.18 mg/L。1,3-二氯丙烯和氯化苦以2:1、1:1、1:2比例复配时对辣椒疫霉的EC₅₀ 分别为1.13、0.24、0.14 mg/L;对南方根结线虫的EC₅₀分别为0.19、0.32、0.61 mg/L。结合经济效益和多种病害兼治的原则,推荐使用1,3-二氯丙烯与氯化苦1:1配比,可兼治辣椒疫病和根结线虫病。     

渐狭蜡蚧菌Lecanicillium attenuatum产几丁质酶的活性及对南方根结线虫卵孵化的抑制作用

为探究卵寄生真菌产生的几丁质酶对南方根结线虫卵孵化的抑制作用,采用分离自黑龙江大豆孢囊线虫孢囊上的菌株CGMCC5328,利用NAG和pNP法测定其几丁质降解酶系和外切酶的活性,分析几丁质酶粗酶液对南方根结线虫卵的孵化抑制效果.结果表明,菌株CGMCC5328经形态学和ITS序列分析鉴定为渐狭蜡蚧菌Lecanicillium attenuatum;在几丁质酶诱导培养基中培养第4天时其分泌的几丁质降解酶系达酶活高峰,为16.90 U/mL;第6天外切酶达酶活高峰,为0.59 U/mL,之后酶活趋于稳定持续至第14天;几丁质酶分子量分别为79.6、65.6、54.1、42.1和32.9 kDa;其中培养第7天的几丁质酶粗酶原液对南方根结线虫卵孵化的抑制率为83.17%;第6天菌株CGMCC5328对卵的寄生率为85.10%.表明高效产几丁质酶的卵寄生真菌渐狭蜡蚧菌菌株CGMCC5328对南方根结线虫卵孵化具有明显的抑制效果.     

Mosquito larvicidal activity of alkaloids from Zanthoxylum lemairei against the malaria vector Anopheles gambiae

Four alkaloids, 10-O-demethyl-17-O-methylisoarnottianamide 1, 6-acetonyl-N-methyl-dihydrodecarine 2, nitidine 3, and chelerythrine 4 were isolated from the plant Zanthoxylum lemairei (Rutaceae) and evaluated for mosquito larvicidal activity against the malaria vector Anopheles gambiae. The mortalities of the larvae were determined after 24 h. The results of the larvicidal tests demonstrated that compounds 1 and 2 were the most potent with mortality rates of 96.7% and 98.3% at a concentration of 250 mg/L, respectively. Compound 3 was less potent with a mortality of 28.3% at the same concentration. The percent mortality of 100% was observed at a concentration of 500 mg/L. The least potent of the four alkaloids was compound 4, which achieved 100% mortality at 1000 mg/L. These findings could be useful in the research for newer more selective, biodegradable and natural larvicidal compounds or can be used as lead compounds for the development of larvicides.     

苏云金杆菌亚致死浓度对美国白蛾及其寄生蜂生长发育的影响

为阐明苏云金杆菌Bacillus thuringiensis(Bt)与白蛾周氏啮小蜂Chouioia cunea Yang的协同作用,分别用103~108孢子/m L的6个Bt浓度处理美国白蛾Hyphantria cunea 2龄幼虫后,通过室内试验测定了Bt对其致死、亚致死效应,及亚致死浓度Bt对寄生蜂子代出蜂的影响。结果表明,浓度106孢子/m L处理组美国白蛾均未能化蛹;而106孢子/m L处理组均能化蛹并羽化,且幼虫发育历期随Bt浓度的增加而延长,平均蛹重在74.92~92.18 mg之间,均高于对照的68.66 mg,但蛹重不呈线性规律变化。当Bt对美国白蛾平均校正死亡率低于17.17%时,幼虫发育历期延迟不明显,但平均蛹重为101.11~124.34 mg,均高于对照;接蜂后能够正常出蜂,出蜂率为33.13%~51.25%,每蛹出蜂量为117.43~143.42头,均显著高于对照。表明用平均校正死亡率低于20%的Bt处理对白蛾周氏啮小蜂的寄生有利,2种生防措施协同作用存在增效潜力。     

Effect of Melia azedarach extract on the activity of NADPH-cytochrome c reductase and cholinesterase in insects

The effect of Melia azedarach extract on the activity of NADPH-cytochrome c reductase and cholinesterase was studied in Spodoptera frugiperda. Larvae were fed an artificial diet containing fruit extract and their midgut was used for enzyme determination. As compared to the control, consumption of the extract containing diet resulted in a 31% inhibition of the cholinesterase activity and a 34% activation of the NADPH-cytochrome c reductase activity. In the cockroach Leucophaea maderae, the effect on reductase activity was even more pronounced (43%).     

建兰胶孢炭疽菌ITS序列分析及其PCR快速检测

由胶孢炭疽菌Colletotrichum gloeosporioides引起的炭疽病是建兰的重要病害.为建立快速检测该病原菌的方法,以ITSl/ITS4为引物,对15个建兰胶孢炭疽菌的ITS进行PCR扩增及测序,将测定的序列与炭疽菌属其它种的ITS序列进行比对分析,设计特异性引物CFl/CR1,并通过常规和巢式PCR对建兰胶孢炭疽菌进行检测.结果显示,15个菌株中有13个菌株ITS序列与该菌的模式种序列相似性高达99％以上,而另外2个菌株相似性则为86％;供试菌株在系统发育树上聚为2个不同的分支;引物CFl/CR1通过常规PCR可从1 ng的建兰胶孢炭疽菌基因组DNA中扩增到目的条带,而利用引物ITSl/ITS4和CF1/CR1通过巢式PCR可从1 pg的基因组DNA中扩增到目的条带,即巢式PCR反应检测灵敏度较常规PCR至少高1 000倍.表明建立的巢式PCR法可从自然感病的建兰叶片组织中检测到胶孢炭疽菌.     

长枝木霉对禾谷胞囊线虫卵的寄生和毒杀作用及其机制

为了明确长枝木霉Trichoderma longibrachiatum对小麦禾谷胞囊线虫Heterodera avenae卵的防治潜力和作用机制,在室内测定了长枝木霉分生孢子悬浮液对小麦禾谷胞囊线虫卵的寄生和毒杀作用,并通过温室盆栽试验测定了长枝木霉分生孢子悬浮液对小麦禾谷胞囊线虫卵的防治效果.室内试验中1.5×107 CFU/mL的长枝木霉分生孢子悬浮液处理12 d对小麦禾谷胞囊线虫卵的寄生率和卵孵化的相对抑制率分别为91.33％和88.35％.温室盆栽试验中1.5×107 CFU/mL处理对土壤中胞囊、线虫和根系中线虫的相对防治效果分别为89.84％、92.67％和88.30％;接种卵悬浮液和长枝木霉分生孢子悬浮液后,小麦幼苗株高、根系长度、地上部鲜重和根系鲜重的增长率分别为66.72％、159.31％、169.09％和170.19％;叶绿素总量和根系活力显著高于对照,分别为17.52 mg/g和356.25 μg·g-1·h-1.研究表明长枝木霉可作为小麦禾谷胞囊线虫的生防制剂.